%0 Journal Article
%T 基于大肠杆菌受体菌DH5α △asd缺失株的构建及作为基因转化、表达操作系统的评估
%A 原志伟
%A 朱晓芳
%A 朱春红
%A 朱军
%A 王建业
%A 朱国强
%J 微生物学通报
%D 2010
%I 
%X 基于大肠杆菌(E. coli)染色体上asd基因的已知序列, 利用λ噬菌体的Red同源重组系统一步法构建E. coli DH5α的asd基因缺失突变株DH5α △asd::cat, 在二次重组中利用携带能够表达FLP位点特异性重组酶的质粒pCP20介导二次同源重组, 以去除上述缺失突变株中氯霉素抗性筛选基因。结合PCR扩增和测序结果, 证明DH5α △asd缺失突变株的正确构建。该缺失突变株失去了在普通LB培养基上生长的能力, 只有添加DAP或导入表达asd基因的质粒(asd基因互补试验)才能在LB培养基上生长, 与原型DH5α比较, 其生长速度和生长对数期、接受不同拷贝数质粒的转化效率几乎相一致。基于该缺失突变株构建出以asd营养基因为标志的大肠杆菌染色体-质粒平衡致死系统。体外培养连续传代50代次, pnirBMisL-fedF-asd质粒不丢失, 并功能性表达F18大肠杆菌黏附素FedF。
%K 大肠杆菌DH5α
%K 受体菌
%K Red重组系统
%K asd基因
%K 突变株
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=78024727B5F4EF6AA9CA8E605B5FC464&aid=FBEBF8C48512B29FE44F80378171991F&yid=140ECF96957D60B2&vid=42425781F0B1C26E&iid=CA4FD0336C81A37A&sid=5F3EAB54EFB0D838&eid=04011F6519DE775C&journal_id=0253-2654&journal_name=微生物学通报&referenced_num=0&reference_num=0