%0 Journal Article
%T Eukaryotic Expression and Primarily Application of Human Smith D1 Antigen in Methylotrophic Yeast Pichia pastoris<br>人SmD1抗原的酵母真核表达及其初步应用
%A YANG Xiang-Yue
%A WU Wen-Bing
%A LAN Xiao-Peng
%A <br>杨湘越
%A 吴文冰
%A 兰小鹏
%J 微生物学通报
%D 2009
%I 
%X 通过PCR扩增Sm D1基因, 与酵母表达载体pPIC9k重组, 构建表达质粒pPIC9k-Sm D1。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168, 在MD平板上筛选重组克隆, 用G418快速筛选高拷贝转化子, 阳性克隆经甲醇诱导表达后, 培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫酶斑点法(immunodot)鉴定。结果显示PCR产物约为360 bp, 符合预期, pPIC9k-Sm D1重组阳性克隆双酶切鉴定正确,测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致。表达产物Sm D1的分子量约16 kD, 高拷贝毕赤酵母转化菌的表达水平明显高于低拷贝的。immunodot证实表达产物具有天然Sm D1分子的免疫原性。阴性对照菌未见目的表达条带。Immunodot的敏感性为96%, 特异性为100%, 与免疫印迹法(immunoblot, IBT)的符合率为98%。Sm D1在巴斯德毕赤酵母中获得高效分泌表达, 为下一步研究打下了基础。
%K Sm D1 antigen
%K Cloning and expression
%K Pichia pastoris<br>Sm
%K D1抗原
%K 克隆表达
%K 巴斯德毕赤酵母
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=78024727B5F4EF6AA9CA8E605B5FC464&aid=3AE0B20D4DD2C1B6ACEF63BDD9632C80&yid=DE12191FBD62783C&vid=933658645952ED9F&iid=CA4FD0336C81A37A&sid=1578276DBE1CE6C3&eid=C141D807369AF6A3&journal_id=0253-2654&journal_name=微生物学通报&referenced_num=0&reference_num=0