%0 Journal Article
%T Dual screening for targeted gene replacement mutant in Magnaporthe oryzae with GUS as negative marker<br>GUS为负标记的稻瘟病菌目标基因替换突变体双筛选体系
%A Jiaoyu Wang
%A Zhen Zhang
%A Xinfa Du
%A Rongyao Chai
%A Xueqin Mao
%A Haiping Qiu
%A Yanli Wang
%A Guochang Sun
%A <br>王教瑜
%A 张震
%A 杜新法
%A 柴荣耀
%A 毛雪琴
%A 邱海萍
%A 王艳丽
%A 孙国昌
%J 生物工程学报
%D 2009
%I 
%X 目标基因替换是基因功能研究的重要方法, 在生物工程领域广泛应用。为了提高真菌目标基因替换的效率, 以稻瘟病菌为研究对象, 建立了一种以gusA基因为负筛选标记的目标基因替换突变体双筛选体系(GUS-DS)。首先, 检测了78个真菌菌株的内源GUS活性, 发现除3个菌株外均呈阴性。同时, 将gusA基因导入稻瘟病菌、镰刀病菌、炭疽病菌后, 转化子可获得高的GUS活性。表明gusA可用作真菌中的筛选标记。然后, 以gusA为负标记, HPH为正标记, 以过氧化物酶体定位信号受体基因MGPEX5与MGPEX7的替换为例, 建立稻瘟病菌GUS-DS体系。对潮霉素抗性筛选获得的转化子通过GUS活性检测进一步筛选, 呈阴性者为可能突变体。通过PCR与Southern杂交对可能突变体进行验证, 以此评估GUS-DS的筛选效率。结果表明GUS-DS将Δmgpex5与Δmgpex7的筛选效率由原来的65.8%和31.2%分别提高到90.6%和82.8%。另外, 还建立了一种适合于GUS-DS的多重PCR法(M-PCR)用于突变体的验证。通过扩增目标位点的不同区段, 可以有效区分突变体、野生型和随机插入转化子。M-PCR法验证突变体简便、迅速, 可信度与Southern杂交相同。GUS-DS及M-PCR为功能基因组学及生物工程的研究提供了有力的工具。
%K MGPEX5
%K MGPEX7
%K dual scrccn
%K GUS activity
%K targeted gene replacement
%K MGPEX5
%K MGPEX7<br>双筛选
%K GUS活性
%K 目标基因替换
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A66E90C274451689E69F6F0291467824&aid=C64684D0CC4112423887A90FEB82C9A3&yid=DE12191FBD62783C&vid=C5154311167311FE&iid=CA4FD0336C81A37A&sid=62F52895A84563EE&eid=45DBCBD9C0F25664&journal_id=1000-3061&journal_name=生物工程学报&referenced_num=0&reference_num=0