%0 Journal Article
%T Cloning, expression, purification and activity assay of Trypanosoma brucei phenylalanyl-tRNA synthetase in Escherichia coli<br>布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶在大肠杆菌中的克隆、表达、纯化及活性测定
%A Ying Yao
%A Guangwei Gao
%A Dawei Li
%A <br>姚璎
%A 杲光伟
%A 李大伟
%J 生物工程学报
%D 2010
%I 
%X 苯丙氨酰-tRNA合成酶是布氏锥虫蛋白合成过程中的一类重要酶,以其为靶点的抑制剂可能发展成为新一代的抗锥虫药物,但此前并没有分离锥虫苯丙氨酸-tRNA合成酶的报道。本研究用大肠杆菌成功克隆表达并纯化了布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶并进行了活性测定。首先通过PCR方法从布氏锥虫细胞基因组中分别扩增出苯丙氨酰-tRNA合成酶的α亚基、β亚基的基因,依次克隆入pCOLADuet共表达载体,然后在大肠杆菌BL21(DE3)RIPL中进行了成功表达,并采用Ni-Bind亲和层析对其进行了纯化,最后用免疫印迹进行了鉴定。此外还采用放射性同位素方法进行了酶活性测定,这为下一步进行布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶抑制物的设计和体外筛选奠定了良好的基础。
%K Trypanosoma brucei
%K phenylalanyl-tRNA synthetase
%K prokaryotic expression
%K purification
%K enzyme activity assay<br>布氏锥虫
%K 苯丙氨酰-tRNA合成酶
%K 原核表达
%K 纯化
%K 酶活测定
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A66E90C274451689E69F6F0291467824&aid=2D50C0DA54026FBAA55E233ECFD6F4A9&yid=140ECF96957D60B2&vid=96C778EE049EE47D&iid=CA4FD0336C81A37A&sid=B47A0E731AF43EB2&eid=5E25104E99903E8A&journal_id=1000-3061&journal_name=生物工程学报&referenced_num=0&reference_num=0