%0 Journal Article
%T Construction of prnp gene knockout vector and its transfection in eukaryotic cell<br>牛朊蛋白基因prnp敲除载体的构建及真核细胞转染
%A Hailin Zhang
%A Pang Cheng
%A Jie Lan
%A Yongli Song
%A Yong Zhang
%A <br>张海林
%A 程胖
%A 兰杰
%A 宋永利
%A 张涌
%J 生物工程学报
%D 2010
%I 
%X 利用正负筛选策略(Positive-negative selection,PNS)对中靶细胞进行富集是提高体细胞基因打靶效率常用的策略之一。将动物的朊蛋白基因prnp敲除,使其不能表达朊蛋白(传染性海绵状脑病的致病蛋白),从而使其具有抵抗Prion病感染的能力。本研究采用正负筛选策略,构建了牛prnp基因的双等位基因敲除载体,经内切酶Sac Ⅱ线性化后,再通过电穿孔转染牛胎儿成纤维细胞,分别用600μg/mL G418、200nmol/mL Ganciclovir(GCV)进行正负药物筛选,最终获得了176个药物抗性细胞克隆,进一步采用PCR、测序、间接免疫荧光试验及Western blotting试验对细胞克隆进行鉴定,结果表明,其中的9个细胞克隆为中靶细胞,证明牛prnp基因被成功敲除。本研究为牛prnp的敲除提供了可行性依据,并为体细胞核移植生产敲除朊蛋白基因的转基因动物提供供体细胞。
%K gene targeting
%K positive-negative selection strategy
%K Prion protein
%K bovine fetal fibroblasts
%K prnp
%K immunofluorescence
%K Western blotting<br>基因打靶，正负筛选策略，朊蛋白，牛胎儿成纤维细胞，prnp，间接免疫荧光，Western
%K blotting
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A66E90C274451689E69F6F0291467824&aid=4F9F956F5E6005E5F2C9AAA8D27B4E62&yid=140ECF96957D60B2&vid=96C778EE049EE47D&iid=38B194292C032A66&sid=E42CAFB11D4BE21A&eid=8ED630AD8C61FAE8&journal_id=1000-3061&journal_name=生物工程学报&referenced_num=1&reference_num=2