%0 Journal Article
%T Cloning, heterologous expression and purification of a 3-ketosteroid-9α-hydroxylase (KSH) from Mycobacterium sp. NwIB-01<br>分枝杆菌Mycobacterium sp. NwIB-01 3-甾酮-9α-羟基化酶基因的克隆、异源表达及分离纯化
%A Shuyue Fan
%A Wei Wei
%A Fengqing Wang
%A Dongzhi Wei
%A <br>范书玥
%A 魏巍
%A 王风清
%A 魏东芝
%J 生物工程学报
%D 2009
%I 
%X 3-甾酮-9α-羟基化酶(KSH)是微生物甾体降解途径中的关键酶,在甾体药物制备中有重要价值。以本实验室从土壤中自行筛选的分枝杆菌Mycobacterium sp.NwIB-01为出发菌株,利用红平红球菌Rhodococcus erythropolis SQ1已报道的ksh序列与已全基因组测序的分枝杆菌序列数据库进行比对分析,根据同源基因设计简并引物获得部分ksh序列,通过染色体步移扩增出全长ksh(命名为M.S.-ksh),该基因与耻垢分枝杆菌M.smegmatis mc2155的ksh同源性为85%。构建pET32-ksh表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高表达重组转化子菌株,经IPTG低温诱导,SDS-PAGE电泳分析,目的蛋白主要为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上,用Ni2+亲和层析柱纯化,纯度达90%以上。本研究为利用基因工程菌进行工业化生产甾体药物奠定了基础。
%K 分枝杆菌NwIB-01
%K 3-甾酮-9α-羟基化酶
%K 甾体降解
%K 异源表达
%K 分离纯化
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A66E90C274451689E69F6F0291467824&aid=A2DACE15315FF64041B7AA49BC304BAC&yid=DE12191FBD62783C&vid=C5154311167311FE&iid=59906B3B2830C2C5&sid=9EAD63ADE6B277ED&eid=9475FABC7A03F4AB&journal_id=1000-3061&journal_name=生物工程学报&referenced_num=0&reference_num=22