%0 Journal Article
%T Expression and purification of human β-secretase (BACE1) in Pichia pastoris<br>人β-分泌酶 (BACE1) 在毕赤酵母中分泌表达及纯化
%A Peng Wang
%A Ying Zhao
%A Ping Zhu
%A Weishuo Fang
%A <br>王鹏
%A 赵颖
%A 朱平
%A 方唯硕
%J 生物工程学报
%D 2011
%I 
%X 为了获得活性良好的重组人β-分泌酶 (β-secreatase, BACE1)，用于研究其与抑制剂的作用模式，构建了携带β-分泌酶proBACE1和BACE1编码序列的重组表达质粒pPIC9K-MetBACE22和pPIC9K-MetBACE46，通过电击法转入毕赤酵母GS115中，分别得到重组子9k-B22和9k-B46。重组菌株在诱导表达培养基中诱导外源基因表达，结果显示9k-B22的上清活性明显高于9k-B46的上清活性。9k-B22表达上清浓缩后经HisTrap亲和柱纯化得到的蛋白具有良好的BACE1活性, SDS-PAGE/高碘酸-希夫试剂染色发现其为糖蛋白，并且其糖基侧链可以被Endo Hf完全切除，得到50 kDa左右的两条蛋白带。肽质量指纹图谱鉴定发现，这两个蛋白分别与proBACE1和BACE1匹配。活性检测发现糖基化BACE1和去糖基化BACE1的活性均低于HEK-293细胞表达的商品BACE1，这说明糖基化及其类型对BACE1的活性非常重要。然而已知的BACE1抑制剂对三者的抑制率无显著差异，这说明糖基化并不影响与抑制剂的相互作用。经过一系列培养条件优化BACE1纯化产量提高到1 mg/L，这为发现并优化BACE1新型抑制剂的相关研究奠定了物质基础。
%K β-分泌酶，糖基化，毕赤酵母，肽质量指纹图谱
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A66E90C274451689E69F6F0291467824&aid=F437B1BF01E7F486E40A623DD48D3115&yid=9377ED8094509821&vid=DB817633AA4F79B9&iid=708DD6B15D2464E8&sid=03F4C4D3CD1EB259&eid=9E8E868F1632249A&journal_id=1000-3061&journal_name=生物工程学报&referenced_num=0&reference_num=35