%0 Journal Article
%T Cloning and expression of lipase gene to enantioselective resolution of (S)-ketoprofen<br>(S)-酮基布洛芬拆分用脂肪酶基因的克隆及表达
%A Lijuan Xu
%A Yuhong Zhao
%A Ruien Liu
%A Yunying Zhao
%A Jinhong Zhang
%A <br>许丽娟
%A 赵玉红
%A 刘瑞恩
%A 赵运英
%A 张金红
%J 生物工程学报
%D 2010
%I 
%X 本实验室筛选出一株具有不对称拆分消旋酮基布洛芬氯乙酯的菌株NK13为材料,经鉴定为巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium。通过构建其基因文库,从中筛选得到阳性克隆重组子pUC-NK1。测序分析表明,该重组子质粒中包含一长度为633bp的脂肪酶基因的完整开放阅读框,核苷酸同源性对比证明该脂肪酶基因属首次发现(GenBank Accession No.EU381317),将此基因克隆到原核表达载体pET21b(+)中构建重组表达质粒pET-NKest1,转化Escherichia coli BL21,经Isopropyl-β-D-Thiogalactoside(IPTG)诱导在宿主菌中得到表达,经SDS-PAGE电泳检测证明该脂肪酶成熟蛋白分子量约为20kDa。薄层层析与HPLC检测结果显示,表达菌株转化外消旋酮基布洛芬氯乙酯得到(S)-酮基布洛芬过量(e.e.%),由野生菌NK13的5.84%提高到75.28%,提高约15倍,说明该脂肪酶具有优先拆分得到(S)-酮基布洛芬的特性。
%K enantioselectivity
%K (S)-Ketoprofen
%K lipase
%K cloning
%K expression<br>不对称拆分
%K （S）-酮基布洛芬
%K 脂肪酶
%K 克隆
%K 表达
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A66E90C274451689E69F6F0291467824&aid=1B435B18A0D60E9EE64D578E87CE269F&yid=140ECF96957D60B2&vid=96C778EE049EE47D&iid=CA4FD0336C81A37A&sid=6270DC1B5693DDAF&eid=A63576421B012172&journal_id=1000-3061&journal_name=生物工程学报&referenced_num=0&reference_num=10