%0 Journal Article
%T Construction and Expression of Anti-clenbuterol Single Chain Fv Recombinant Vector<br>抗克伦特罗单链抗体表达载体的构建与鉴定
%A Hong Wang
%A Yan Liang
%A Jingyi Yang
%A Xixia Liu
%A Hongbin Zhang
%A Hongtao Lei
%A Yudong Shen
%A Yuanming Sun
%A <br>王弘
%A 梁艳
%A 杨金易
%A 刘细霞
%A 张宏斌
%A 雷红涛
%A 沈玉栋
%A 孙远明
%J 生物工程学报
%D 2008
%I 
%X 为构建克伦特罗(Clenbuterol, CBL)单链抗体(scFv)表达载体, 实现其在大肠杆菌中的表达。以pCANTAB5E- CBL质粒为模板, 扩增CBL的scFv基因, 与pPICZaA载体重组, 然后以重组质粒pPICZaA-scFv为模板扩增scFv及其相连的6 个组氨酸(6×His)片段, 再与载体pBV220连接, 转化大肠杆菌DH5a, 阳性克隆质粒经酶切和PCR鉴定后进行目的片断的序列测定。重组菌经温度诱导表达重组单链抗体, 并通过SDS-PAGE和Western blotting对其鉴定。采用竞争ELISA检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明重组质粒pBV220-scFv含有插入片段, 与原序列的同源性达99.8%。重组蛋白的分子量接近37 kD, 能够被抗His标签单克隆抗体特异性识别且可被游离的CBL竞争性抑制, IC50值为4.55 ng/mL。这说明我们成功构建了重组质粒pBV220-scFv并实现了其在大肠杆菌中的表达, 为进一步进行CBL免疫法快速检测奠定了一定的基础。
%K clenbuterol (CBL)
%K recombinant scFv
%K prokaryotic expression<br>克伦特罗
%K 重组单链抗体
%K 原核表达
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A66E90C274451689E69F6F0291467824&aid=3FEDE7E608A1DE73A0EE1D309FAAF4EF&yid=67289AFF6305E306&vid=B91E8C6D6FE990DB&iid=5D311CA918CA9A03&sid=2EE9948447FBE67D&eid=DCB1FFC992CAE3A0&journal_id=1000-3061&journal_name=生物工程学报&referenced_num=0&reference_num=16