%0 Journal Article
%T Expression and Function Identification of Extracellular Domain 3 of Human Vascular Endothelial Growth Factor Receptor KDR<br>人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区的表达与配体结合活性的鉴定
%A Juan Zhang
%A Yanli Zhang
%A Haixin Li
%A Wei Chen
%A Tao Zhang
%A Min Wang
%A <br>张娟
%A 张艳丽
%A 李海鑫
%A 陈卫
%A 张弢
%A 王旻
%J 生物工程学报
%D 2008
%I 
%X 血管内皮生长因子受体(VEGFR)是血管内皮生长因子的特异性受体,VEGFR-2在介导VEGF刺激内皮细胞增殖及血管通透性等生物学活性中起重要作用.在大肠杆菌中实现可溶性的人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区的表达,并鉴定其与配体结合的活性.采用重叠PCR的方法合成人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区基因,将该基因与高效表达载体pET-32a重组,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中,表达产物依次经过CM阳离子交换树脂和镍柱亲和层析纯化.利用ELISA法和体外抑制VEGF刺激的人脐静脉内皮细胞增殖实验检测表达产物与配体结合的活性.SDS-PAGE显示,目的蛋白主要以可溶性Trx-KDR3融合蛋白表达于胞质,30℃时1 mmol/L IPTG诱导细菌5 h融合蛋白表达量约占胞质可溶性总蛋白的20%,经CM阳离子交换树脂和镍柱亲合层析纯化得到纯度为95%的产物,Western blotting鉴定是目的蛋白.ELISA和体外HUVEC细胞增殖实验显示,表达产物具有特异性结合hVEGF165的活性,且该作用呈一定的浓度依赖性.具有配体特异性结合活性的可溶性人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区成功表达,为靶向血管抗肿瘤治疗和相关抗体的研究奠定了基础.
%K KDR<br>血管内皮生长因子
%K 蛋白表达与纯化
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A66E90C274451689E69F6F0291467824&aid=0B609EF004176B429BF71E9B7C619F3B&yid=67289AFF6305E306&vid=B91E8C6D6FE990DB&iid=708DD6B15D2464E8&sid=995853F82EBBAC94&eid=E641A1E50E600569&journal_id=1000-3061&journal_name=生物工程学报&referenced_num=0&reference_num=7