%0 Journal Article
%T Optimization of the expression of human DNA topoisomerase I in Pichia pastoris]<br>人DNA 拓扑异构酶Ⅰ在毕赤酵母中的表达及发酵条件优化
%A YANG Guo-Wu
%A YUAN Bao-Hong Ho Kwok_Ping DAI Xin LIN Yong -Cheng ZHOU Shi-Ning
%A <br>杨国武
%A 袁保红
%A 何国平
%A 戴欣
%A 林永成
%A 周世宁
%J 生物工程学报
%D 2004
%I 
%X 为了在体外以人DNA拓扑异构酶Ⅰ(hTopoⅠ)为靶位进行抗肿瘤化合物的快速筛选，用RT-PCR法从Hela细胞中克隆了hTopoⅠ基因ORF并在毕赤酵母中首次成功表达，表达产物可分泌到发酵上清，易于制备。蛋白酶A缺陷的重组酵母(SMD-hTopoⅠ)分泌重组酶的能力比具有蛋白酶A活性的重组酵母(X33-hTopoⅠ和KM-hTopoⅠ)更高。通过发酵条件的优化，使用BMMY(pH7．25)，于20℃，每隔24h补加0．5％(V/V)的甲醇和3％(V/V)的营养液，SMD-hTopoⅠ诱导72h后可表达最高的酶活力(43000u/mL)，发酵上清中hTopoⅠ可达11mg/L，约占总蛋白的10％。SDS-PAGE和Westem blot分析显示，表达的hTopoⅠ为91kD蛋白，无糖基化修饰。
%K human DNA topoisomerase I
%K secretion expression
%K opti mization
%K Pichia pastoris<br>人
%K DNA拓扑异构酶
%K 分泌表达
%K 毕赤酵母
%K 发酵条件
%K 克隆
%K 细胞代谢
%K 肿瘤
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A66E90C274451689E69F6F0291467824&aid=2908A8406A741608&yid=D0E58B75BFD8E51C&vid=A04140E723CB732E&iid=0B39A22176CE99FB&sid=7EBE588F611589FC&eid=50BBDFAC8381694B&journal_id=1000-3061&journal_name=生物工程学报&referenced_num=1&reference_num=40