%0 Journal Article
%T Rapid Disruption of Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus orf60 by Red Recombination System<br>利用Red系统快速敲除家蚕核型多角体病毒orf60基因
%A WANG Qiang
%A GUO Zhong-Jian
%A YAO Qin
%A WANG Hai-Yan
%A CHEN Ke-Ping
%A <br>王强
%A 郭忠建
%A 姚勤
%A 王海燕
%A 陈克平
%J 生物工程学报
%D 2007
%I 
%X 用Red重组系统和最近构建的家蚕核型多角体病毒（BmNPV）bacmid在大肠杆菌BW25113中快速地敲除BmNPV orf60基因。从大肠杆菌BmDH10Bac中提取BmNPV bacmid，将其电转化到含有质粒pKD46（能表达Red重组酶）的大肠杆菌菌株BW25113中，获得了可用于BmNPV基因打靶的菌株BW25113-Bac。设计一对长63bp的引物（5′端为orf60基因的左右同源臂，长45bp；3′端长18bp，为氯霉素抗性基因（cat）的首尾序列），以pKD3质粒（含cat）为模板，PCR扩增携带orf60左右同源臂的cat，即打靶线性化片段。将该线性化片段电转入BW25113-Bac菌株，在Red重组酶的作用下，线性化片段与BmNPV bacmid中的orf60基因发生同源重组。设计3对特异引物，用PCR方法证明cat成功地替换了BmNPV orf60基因。重组bacmid DNA转染BmN细胞后，Western blot分析未检测到orf60基因的表达。
%K Red重组系统，
%K orf60，
%K 基因敲除
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A66E90C274451689E69F6F0291467824&aid=A345B13979E1D2162843A5515ADF020F&yid=A732AF04DDA03BB3&vid=EA389574707BDED3&iid=94C357A881DFC066&journal_id=1000-3061&journal_name=生物工程学报&referenced_num=0&reference_num=0