%0 Journal Article
%T Efficient Purification of Recombinant Human NDPK-A in Pilot-scale<br>中试规模高效纯化重组人核苷二磷酸激酶A
%A XIONG Sheng
%A QIAN Chui-Wen
%A GUO Chao-Wan
%A Huang Li
%A LIU Qiu-Ying
%A Zhang Mei-Ying
%A WANG Yi-Fei
%A <br>熊盛
%A 钱垂文
%A 郭朝万
%A 黄立
%A 刘秋英
%A 张美英
%A 王一飞
%J 生物工程学报
%D 2007
%I 
%X 中试规模纯化重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A)。菌体高压匀浆,然后微滤去除菌体碎片,超滤浓缩,所得样品上样DEAE-sepharose Fast Flow,收集目的峰,上样Cibacron Blue 3GA Sepharose CL-4B,含ATP的缓冲液洗脱目的蛋白,超滤精制。结果表明,1500g菌体经过2次匀浆后,所得匀浆液中含NDPK47.6g,经过微滤超滤处理后,可回收目的蛋白27.3g。再经过两步柱层析及超滤精制后,最终可得纯度为96.3%的目的蛋白17.2g,总回收率为36.2%,每100g湿菌体的蛋白产率为1.15g。比较每个步骤的回收率,发现精制>亲和层析>离子交换层析>样品前处理过程。与前期报道发酵工艺联用,rhNDPK-A的纯化产量达到510mg/L。工艺简便、得率高的rhNDPK-A纯化工艺的建立为NDPK的应用开发提供了物质基础;另外,本文结果也提示,对于非分泌型重组蛋白来说,影响目的蛋白回收的最主要因素可能不是柱层析,而是样品前处理过程。
%K nucleoside diphosphate kinase
%K purification
%K microfiltration
%K ultrafiltration<br>核苷二磷酸激酶
%K 纯化
%K 微滤
%K 超滤
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A66E90C274451689E69F6F0291467824&aid=9E0B2BABE2C8A4C4&yid=A732AF04DDA03BB3&vid=EA389574707BDED3&iid=38B194292C032A66&sid=37F781FD8E744761&eid=F9A6B6F259CE5121&journal_id=1000-3061&journal_name=生物工程学报&referenced_num=0&reference_num=17