%0 Journal Article
%T 重组人载脂蛋白A-Ⅰ在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的高表达
%A 冯美卿
%A 蔡钦生
%A 宋大新
%A 钟江
%A 吴满平
%A 周珮
%J 生物工程学报
%D 2004
%I 
%X 高密度脂蛋白 (High densityLipoprotein ,HDL)是血浆中重要的脂蛋白 ,其主要成分为载脂蛋白AⅠ(ApoliproteinAⅠ ,ApoAⅠ为了大量制备该蛋白 ,首先尝试利用Pichiapastoris表达系统高效表达ApoAⅠ。通过PCR扩增获得天然含人载脂蛋白ApoAⅠ的基因片段 ,将其插入到P .pastoris分泌型载体pPIC9K上 ,BglⅡ酶切线性化后电转化P .pastorisGS115 ,将获得的 1000多个转化子依次在含不同G418浓度的YPD平板筛选高抗性转化子 ,得到的2 2个高抗性转化子经甲醇诱导 ,SDS PAGE检测得到 6株高表达菌。然后对其中的高表达菌株AP16的培养及诱导条件进行了优化 ,结果显示 :接种后培养 24～ 28h ,转入诱导阶段 ,培养基pH值在 7～ 7.5 ,菌体密度OD600 =80左右 ,以 1%甲醇诱导 96h最有利于ApoAⅠ的表达 ,表达水平达 160mg/L。 14L发酵罐结果显示表达水平与摇瓶相当 ,均高于其它表达系统 ,为大批量制备奠定了基础.
%K 重组人载酯蛋白ApoAⅠ
%K 毕赤酵母
%K 表达优化
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A66E90C274451689E69F6F0291467824&aid=4757D39DCEB8476470F314056BBA389E&yid=D0E58B75BFD8E51C&vid=A04140E723CB732E&iid=B31275AF3241DB2D&journal_id=1000-3061&journal_name=生物工程学报&referenced_num=0&reference_num=0