%0 Journal Article
%T Expression, Purification and Characterization of Rat Procarboxypeptidase B in Pichia pastoris<br>鼠羧肽酶原B在毕赤酵母中的表达、纯化与鉴定
%A WANG De-Jie
%A MIAO Lin
%A CHEN Hong
%A LI Yan-Ying
%A CHEN Hui-Peng
%A FANG Hong-Qing
%A <br>王德解
%A 苗林
%A 陈宏
%A 李彦英
%A 陈惠鹏
%A 方宏清
%J 生物工程学报
%D 2007
%I 
%X 为了在毕赤酵母中表达鼠羧肽酶原B(procarboxypeptidaseB,proCPB)蛋白,以RT-PCR法从SD鼠胰腺细胞中克隆了proCPB基因,将其插入pPIC9载体,PEG1000介导转入毕赤酵母GS115细胞,在甲醇的诱导下,实现了proCPB在毕赤酵母中的成功表达。通过发酵条件的优化,使用BMGY(pH6·0)培养基,添加0·5%的酪蛋白水解物,于28℃,在起始OD600达10·0时,每隔12h补加0·5%的甲醇,重组酵母GS115-proCPB表达的产物量可达到最高(500mg/L),表达时间可达120h,表达的目的蛋白占总蛋白的94%以上。通过纯化条件的优化,采用两步疏水层析,可使目的蛋白的纯度达96%以上,蛋白得率达38%,重组proCPB活化后所得CPB的比活力可达110u/mg(CPB标准品为180u/mg)。相对分子量测定表明重组蛋白的分子量与理论值极相近,N-端氨基酸测序进一步表明proCPB基因在毕赤酵母中得到了正确的表达和翻译后加工修饰。
%K carboxypeptidase B
%K Pichia pastoris
%K expression optimization
%K protein purification<br>羧肽酶B
%K 毕赤酵母
%K 表达优化
%K 蛋白纯化
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A66E90C274451689E69F6F0291467824&aid=0FF6830299FB43F3&yid=A732AF04DDA03BB3&vid=EA389574707BDED3&iid=CA4FD0336C81A37A&sid=1D0FA33DA02ABACD&eid=5C3443B19473A746&journal_id=1000-3061&journal_name=生物工程学报&referenced_num=0&reference_num=16