%0 Journal Article
%T Aplicaci車n de las pruebas de PCR convencional simple y m迆ltiple para la identificaci車n de aislamientos de Leptospira spp. en Colombia Application of conventional and multiplex PCR assays for identification of isolates of Leptospira spp. in Colombia
%A Natali Moreno
%A Piedad Agudelo-Fl車rez
%J Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud P迆blica
%D 2010
%I Instituto Nacional de Salud
%X Debido a las dificultadas asociadas con la identificaci車n serol車gica de aislamientos de Leptospira ssp, se genera gran inter谷s en la pruebas moleculares por su poder discriminatorio, reproducibilidad y f芍cil interpretaci車n. Objetivo. Aplicar y validar la prueba de PCR convencional, usando dos pares de iniciadores descritos previamente y dirigidos a los genes lipL32 (PCR simple) y secY/flaB (PCR m迆ltiple), con el fin de evaluar su aplicaci車n para identificar especies pat車genas y sapr車fitas de Leptospira spp. Materiales y m谷todos. Para la estandarizaci車n de las pruebas de PCR se us車 22 cepas de referencia internacional y 12 aislamientos colombianos. Se determin車 el nivel de detecci車n de cada pareja de iniciadores, su especificidad frente a otros microorganismos causantes de enfermedades end谷micas en Colombia y su capacidad de identificar especies dentro del grupo de Leptospira. Resultados. El l赤mite de detecci車n de la PCR simple lipL32 fue una diluci車n 1:10000 y para la PCR m迆ltiple secY/flaB fue una diluci車n 1:100 para el gen secY y 1:1000 para flaB. La especificidad de todos los iniciadores fue de 100%. La PCR simple lipL32, mostr車 amplificado espec赤fico para 21/22 cepas de referencia mientras que la PCR multiple secY/flaB lo fue para 18/22 cepas. De los 12 aislamientos colombianos, siete fueron positivos por PCR lipL32 y seis lo fueron por PCR secY/flaB. Conclusiones. Los resultados m芍s consistentes fueron obtenidos con la PCR simple lipL32 tanto en l赤mite de detecci車n, especificidad y utilidad para la identificaci車n de Leptospira spp, por lo que esta prueba es aplicable a la identificaci車n molecular de aislamientos pat車genos de Leptospira spp de diversas fuentes. Serological identification of Leptospira ssp isolates is difficult to achieve. Thus, molecular testing may be of great interest thanks to its high discrimination power, reproducibility and easy interpretation. Objective. To implement and validate conventional and multiplex PCR methods (using primers directed against lipl32 and secY/flaB genes, respectively). To assess the capacity of PCR methods to identify pathogenic and saprophytic species of Leptospira ssp. Material and methods. 22 international reference strains and 12 colombian isolates were used. DNA was extracted with a commercial kit (Wizard). Specificity and sensitivity of both PCR methods were evaluated. Results. The maximum dilution of DNA samples allowing the detection of Leptospira ssp was determined to be 1:10000 for the PCR lipL32 and 1:100/1:1000 for the multiplex PCR secY/flaB. Both PCR didn＊t detect DNA from microorganisms u
%K Leptospira
%K Reacci車n en cadena de la polimerasa
%K T谷cnicas de diagn車stico molecular
%K Colombia
%K Leptospira
%K Polymerase chain reaction
%K Molecular diagnostic techniques
%K Colombia
%U http://www.scielosp.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1726-46342010000400009