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Validación de una técnica colorimétrica para la determinación de carbohidratos
Soto,Carmen; Cuello,Maribel; Alfonso,Yusimí; Cabrera,Osmir; Sierra,Gustavo;
Vaccimonitor , 2002,
Abstract: the appropriate standardization of an analytical assay, followed by the validation of the method and the homogeneity of the chemical and biological reagents used during the different studies are indispensable elements for obtaining optimal results. in this work a methodology was selected for the validation of the analytical method used to determine ribose by the orcinol method using a standard ribose solution (0,025 mg/ml). an analysis of the main validation criteria: linearity, precision, accuracy, sensitivity, specificity, detection limits and robustness were carried out. the usefulness of this procedure was demonstrated and by means of the experimental design and the statistical procedures used, the linearity (r2>0,98), exactness (fexp.
Validación de una técnica colorimétrica para la determinación de carbohidratos
Carmen Soto,Maribel Cuello,Yusimí Alfonso,Osmir Cabrera
Vaccimonitor , 2002,
Abstract: La adecuada estandarización de un ensayo analítico, seguido de la validación del método y la homogeneidad de los reactivos químicos y biológicos a lo largo de los diferentes estudios, son elementos imprescindibles para alcanzar óptimos resultados. En este trabajo se seleccionó una metodología para la validación del método analítico empleado en la determinación de ribosa por el método del orcinol y se utilizó una solución estándar de ribosa (0,025 mg/mL). Se realizó un análisis de los criterios fundamentales de validación:linealidad, precisión, exactitud, sensibilidad, especificidad, límites de detección y robustez. Se comprobó la utilidad de dicho procedimiento y se demostró mediante el dise o experimental y los procedimientos estadísticos empleados que dicho método es lineal (r2>0,98), exacto (Fexp.< Ftab. y texp. < ttab.), preciso(CV<3 %), sensible (LD = 1 ug/mL y LC = 3.3 ug/mL) y específico (respuesta no significativa), por lo cual es confiable. La determinación de ribosa es una técnica colorimétrica que cuantifica pentosas y se emplea con el objetivo de conocer el contenido exacto de la misma en una muestra de producto purificado. Ademáses empleada como control final según la OMS en las vacunas conjugadas de Haemophilus influenzae.
Preparación y evaluación de conjugados de polisacárido Vi de Salmonella typhi con toxoide tetánico
Osmir Cabrera,Maribel Cuello,Carmen R. Soto,Oliver Pérez
Vaccimonitor , 2002,
Abstract: El polisacárido Vi de Salmonella typhi es un antígeno T-independiente y ha demostrado ser protector en adultos jóvenes. En ensayos clínicos controlados, realizados en áreas con alta incidencia de fiebre tifoidea, su eficacia protectora ha sido aproximadamente del 70%. Sin embargo, para aumentar la respuesta de anticuerpos y conferir propiedades T- dependientes al polisacárido en poblaciones de alto riesgo, se han utilizado diferentes métodos para la síntesis de conjugados de polisacárido Vi-proteína. Eneste estudio fue evaluada la inmunogenicidad generada en ratones por un conjugado polisacárido Viproteína obtenido en nuestro laboratorio. El polisacárido Vi purificado fue unido al toxoide tetánico (TT) como proteína portadora por medio de la reacción con carbodiímida. El conjugado resultante fue más inmunogénico que el polisacárido Vi solo. En contraste con las propiedades T-independiente del polisacárido Vi, el conjugado indujo respuesta secundaria y un incremento en la duración de los anticuerpos IgG anti Vi en los ratones. El suero de los animales inoculados con el conjugado mostró altos títulos de anticuerpos IgG anti-TT, similar al TT nativo.
Intranasal immunization with AFCo1 induce systemic, mucosal and memory immune response in neonatal mice
Julio A. Balboa,Belkis Romeu,Maribel Cuello,Caridad Zayas
Vaccimonitor , 2009,
Abstract: Neonates have a poorly developed immune system. Respiratory pathogens cause disease during early periods of live. Consequently, it is important to develop protective vaccines that induce immunity and immunological memory against respiratory pathogens early in life. Intranasal (i.n.) route could be an effective via for immunization.Therefore, we explored the effectiveness of AF (Adjuvant Finlay) PL1 (Proteoliposome) from Neisseria meningitidis serogroup B and its derivate Cochleate (AFCo1) by nasal route in neonatal mice. They were immunized i.n. 3 times 7 days apart and anti PL systemic and mucosal antibody response were measured by ELISA. In addition, aprime-boost strategy was used to evaluate the humoral immune response in neonate mice. The 3 doses of AFPL1 or AFCo1 induced significant levels of anti PL IgG antibodies in comparison whit control, but AFCo1 (2017 U/mL)was significantly higher than AFPL1 (1107 U/mL). AFCo1 and AFPL1 induced a predominant Th1 pattern with IgG2a/IgG1 >1 by i.n. immunization and AFCo1 induced a high anti PL IgA saliva response in saliva. Interestingly,one nasally prime at 7 days of born and a memory one boost i.n. dose 9 weeks later with AFCo1 or AFPL1 showed similar specific IgG levels and IgG2a/IgG1 relation than 3 i.n. doses in adult mice. In conclusion, these results represent the first report of neonatal intranasal vaccination using AFCo1 capable to induce systemic and mucosal immunity and priming for memory.
Nasal immunization with AFCo1 induces immune response to N. gonorrhoea in mice
Maribel Cuello,Osmir Cabrera,Reinaldo Acevedo,Niury Nu?ez
Vaccimonitor , 2009,
Abstract: Neisseria gonorrhoeae infections are common sexually transmitted diseases. Increased antibiotic-resistant of N.gonorrhoeae strains were reported. N. meningitidis is another human restricted bacterium transmitted through mucosa. However, the induction of systemic specific IgG antibody against some proteins between the two speciesis known, but the mucosal immune response to these pathogens is not clear. We hypothesized that N. meningitidis could induce immune response against N. gonorrhoeae. Therefore, serogroup B Proteoliposome (PL) was transformed into AFCo1 (Adjuvant Finlay Cochleate 1) and used for nasal immunization of C57Bl/6 mice. The specific IgG and IgG subclasses against both antigens in sera and vaginal extraction were measured by ELISA.Specific proliferation (3H incorporation) of spleen cells and lymph node recall in vitro with PL or N. gonorrhoeae total antigens was measured. Serum and vaginal extraction anti N. meningitidis and N. gonorrhoeae IgG as well as the induction of specific IgG subclasses were detected. N. gonorrhoeae induces specific proliferation of spleen,cervical lymph node (cLN), and mediestinal (meLN) cells from immunized mice. In conclusion, AFCo1 induce anti N. meningitidis immune responses that recognized N. gonorrhoeae antigens in mice.
Influencia de las vías de inmunización mucosales sobre la protección contra herpes simple tipo 2 con el AFCo1 como adyuvante
Osmir Cabrera,Maribel Cuello,Karolina Th?rn,Madelene Lindqvist
Vaccimonitor , 2011,
Abstract: Las vacunas mucosales se han planteado como una estrategia prometedora para inducir protección mucosal.El virus herpes simple tipo 2 es uno de los patógenos más frecuentes en el humano transmitidos por vía sexual.Varios candidatos vacunales contra este patógeno se han evaluado, pero no han sido efectivos, por lo que aún no se cuenta con una vacuna profiláctica ni terapéutica. La gD2 es una glicoproteína recombinante y está reportada como uno de los antígenos de importancia vacunal contra este germen. Contamos con el cocleato derivado del proteoliposoma de Neisseria meningitidis serogrupo B (AFCo1)que ha mostrado capacidades adyuvantes porvarias vías de inmunización. El objetivo de este trabajo fue evaluar la protección inducida en ratones por el AFCo1-gD2, administrada por diferentes vías mucosales. Se utilizaron ratones hembras C57BL6, los cuales fueron inmunizados por vía intranasal (IN), intravaginal (IVag) o intrarrectal (IR) con AFCo1-gD2 o gD2 sola.Se determinó la IgG anti gD2, la proliferación celular específica, la replicación viral en lavado vaginal, los signos de la enfermedad y la protección frente al reto viral. Se obtuvo respuestas significativas de IgG anti gD2 por todas las vías, aunque la IN mostró los valores más elevados. Se observó proliferación celular en células de animalesinmunizados IN e IVag, pero no por vía IR. Se observó la mayor protección (100%) en los animales inmunizados por vía IN. Se concluye que la vía nasal es la más prometedora en la inducción de protección contra este reto viral.
La gD2 coadministrada con el AFCo1 por vía intranasal induce inmunidad protectora contra virus de herpes simple tipo 2 en ratones.
Osmir Cabrera,Maribel Cuello,Karolina Th?rn,Josefine Peerson
Vaccimonitor , 2012,
Abstract: La infección por virus herpes simple tipo 2 (VHS-2) continúa siendo un problema de salud mundial. Esta infección es transmitida sexualmente y es la principal causa de úlceras genitales. La prevención de esta enfermedad requiere de la utilización de vacunas mucosales, pues las vacunas parenterales no han sido exitosas. Por otra parte, no existen adyuvantes mucosales, por lo que el desarrollo de estos es esencial para la estrategia de estasvacunas. La administración intranasal (IN) de la glicoproteína D del VHS-2 (gD2), coadministrada con el cocleato (AFCo1+gD2) sería igualmente efectiva con la gD2 incluida (AFCo1-gD2). Se inocularon ratones hembras C57BL/6 por la vía IN con gD2, contenida dentro del cocleato, coadministrada con el cocleato o gD2 sola. Se determinaronlos niveles de IgG anti gD2 en suero y lavado vaginal, así como las subclases de IgG anti gD2 por ELISA. Se determinó la respuesta linfoproliferativa en células de bazo, el perfil de citoquinas Th1/Th2, los signos de la enfermedad y la protección frente al reto viral. Se observaron altos títulos de IgG e IgG2c anti gD2 en el suero de los animales inoculados con la gD2 y el AFCo1 como adyuvante. No se observaron diferencias significativas (p>0,05) entre los grupos que recibieron AFCo1+gD2 y los que recibieron AFCo1-gD2. Se observó un perfil de citoquinas tipo Th1 y un 100% de sobrevida en los grupos que recibieron el AFCo1 como adyuvante de la gD2,mientras que en el grupo que recibió la gD2 sola no se observó protección. Estos resultados indican que la gD2 puede ser utilizada coadministrada con AFCo1 por vía IN como un potencial candidato vacunal contra VHS-2.
Preparación y evaluación de conjugados de polisacárido Vi de Salmonella typhi con toxoide tetánico
Cabrera,Osmir; Cuello,Maribel; Soto,Carmen R.; Pérez,Oliver; Taboada,Carlos M; Fari?as,Mildrey; Sierra,Gustavo;
Vaccimonitor , 2002,
Abstract: salmonella typhi vi polysaccharide is a t-independent antigen that has proven to be protective in young adults. in controlled clinical trials in areas with high rates of typhoid fever, the protective efficacy of the vi was approximately 70%. however, in high-risk populations, different methods have been used, to synthesize vi polysaccharide-protein conjugates in order to enhance the antibody response and to confer t-dependent properties to the polysaccharide. in this study a conjugate, vi polysaccharide -protein, was obtained and its immunogenicity was evaluated in mice. purified vi polysaccharide was linked to a carrier protein (tetanus toxoid (tt), via a carbodiimide-mediated reaction. the resultant conjugate was more immunogenic in mice than vi alone. in contrast to the t-independent properties of vi, the conjugates of this polysaccharide with tt induced secondary responses and an increase in the duration of igg anti vi antibodies, in mice. serum of animals inoculated with the conjugate showed high igg anti-tt antibody titers, similar to native tt.
Fragmentación del polisacárido de Neisseria meningitidis serogrupo C para su uso en vacunas conjugadas
Cabrera,Osmir; Soto,Carmen R; Cuello,Maribel; Martínez,Miguel E; Martínez,Juan C; Sierra,Gustavo;
Vaccimonitor , 2001,
Abstract: meningococcal infections are an important cause of morbidity and mortality worldwide. serogroups b and c strains are responsible for most cases in the developed world. meningococcal vaccines containing purified serogroup c capsular polysaccharide induce protective serum bactericidal antibodies in adults, but are poorly immunogenic in young children and may induce tolerance. the immunogenicity of polysaccharide or its fragments can be improved by conjugation to a protein carrier. in this study the purified meningococcal c polysaccharide (ps-c) was depolimerized by acid hydrolysis, heat and sodium peryodate, to obtain oligosaccharides (os-c) and it was evaluated the integrity of their antigenic properties by inhibition elisa. the molecular size was determined by gel filtration and the loss of o-acetyl groups was evaluated. significant differences between the molecular size of the os-c and the values of o-acetyls were obtained by different depolimerization method. the antigenic properties were dependent on the molecular size and the o-acetyls groups. oligosaccharides obtained by acid hydrolysis showed the same antigenic properties as ps-c.
Influencia de las vías de inmunización mucosales sobre la protección contra herpes simple tipo 2 con el AFCo1 como adyuvante
Cabrera,Osmir; Cuello,Maribel; Th?rn,Karolina; Lindqvist,Madelene; Lastre,Miriam; González,Elizabeth; Zayas,Caridad; Balboa,Julio; Romeo,Belkis; Sarandi,Ali M; Pérez,Oliver;
Vaccimonitor , 2011,
Abstract: mucosal vaccines are a promising strategy to induce mucosal protection. herpes simplex virus type 2 is the commonest pathogens in the human transmitted by exposure at the genital mucosal surfaces. many vaccine candidates against this pathogen have been evaluated; but they have not been effective, and neither a prophylactic nor a therapeutic vaccine has been yet obtained. the gd2 is a recombinant glycoprotein and it is reported as one of the antigens of importance for vaccine against this virus. there is the cochleate (afco1) derived from proteoliposome of neisseria meningitidis serogroup b. this cochleate has shown potentialities as adjuvant for several immunization routes. the objective of this study was to evaluate the protection induced in mice by the afco1-gd2 administered by different mucosal routes. female mice c57bl/6 were used and immunized by: intranasal (in), intravaginal (ivag), or intrarectal (ir) routes with afco1-gd2 or gd2 alone. the anti-gd2 igg and specific cellular proliferation were determined and the viral replication in vaginal wash, the signs of disease and the protection against the viral challenge, were measured too. a significant anti-gd2 igg response was obtained by all routes, although the in route showed the highest values. cellular proliferation was observed in cells of animals immunized in and ivag route; but not by ir route. in addition, a higher protection (100%) in the animals immunized with afco1-gd2 by in route was observed. in conclusion the intranasal is the most promising route in the protection induction against this viral challenge.
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