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Presence of salmonella enteritidis in poultry products and its impact on public health Presencia de Salmonella serovariedad Enteritidis en productos de origen avícola y su repercusión en salud pública
Martha Cecilia Suárez Alfonso,José Ramón Mantilla Anaya
Iatreia , 2000,
Abstract: Salmonella serovar Enteritidis (Salmonella enterica, sub-species enterica serovar Enteritidis or Salmonella enteritidis, when it is artificially named as being a species) (1), is one of the most common causes of human gastroenteritis in cases of food poisoning; some authors consider it to be the most important agent on a world-wide basis. Outbreaks are associated with the intake of different kinds of food, but poultry products are most commonly involved. This agent‘s transmission occurs as a consequence of inadequately cooked chicken and eggs or during cross-contamination with other food. Salmonella Enteritidis and other serovars which produce food poisoning in humans, occasionally cause clinical disease in poultry (avian parathyphosis) or loss of weight-gain, and can generate asymptomatic carriers, which can contribute to the transmission (transovarial), during laying or storage. Globalisation, the open market and the poultry industry‘s growth have increased the intake and distribution of chicken, eggs and their subproducts and, therefore, the possibility of Salmonella spp transmission. Considering the public health importance of this agent, epidemiological studies contributing to the control and prevention of this zoonosis must be carried out. La salmonella serovariedad enteriditis (salmonella enterica subespecie enterica serovariedad Enteritidis, o Salmonella enteritidis cuando se la nombra artificialmente como especie) (1) es una de las causas más comunes de gastroenteritis por intoxicación de origen alimentario en humanos, considera da por algunos autores como la más importante en todo el mundo. La presentación de brotes puede involucrar el consumo de diversos alimentos, pero los productos de origen avícola son los más frecuentemente implicados. La transmisión del microorganismo es consecuencia de la cocción inadecuada del pollo y los huevos o de la contaminación cruzada con otros alimentos. La Salmonella Enteritidis y otras serovariedades que causan intoxicación alimentaria en humanos ocasionalmente producen enfermedad clínica en aves (paratifosis aviar) o merma de la ganancia de peso y puede generar el estado de portador asintomático que contribuye a la transmisión y presentación de casos en humanos. El microorganismo permanece por largos períodos en el ambiente y en las heces; los huevos pueden contaminarse por transmisión vertical (transovárica), durante la postura o el almacenamiento.
Plasmidotipia y evaluación in vitro de la virulencia de cepas de Salmonella enteritidis de origen aviar
Cecilia Suárez,José Ramón Mantilla Anaya,Rubén Darío Toro
Iatreia , 2000,
Abstract: Con el fin de caracterizar a nivel biológico y molecular cepas de Salmonella entérica, subespecie entérica serotipo Enteritidis (Salmonella enteritidis) se obtuvieron y confirmaron bioquímica y serológicamente treinta cepas aisladas de aves clínicamente sanas. Las cepas fueron evaluadas mediante plasmidotipia y determinación de virulencia in vitro evaluando susceptibilidad antimicrobiana, actividad hemaglutinante manosa resistente y manosa sensible como indicativo de la presencia de adhesinas fimbriales y capacidad de sobrevivencia en el interior de macrófagos. La extracción de plásmidos se realizó por la técnica de lisis alcalina. Se obtuvieron perfiles de restricción con las enzimas PstI y SmaI. La susceptibilidad antimicrobiana se determinó por la prueba de difusión de disco en agar. La actividad hemaglutinante en presencia y en ausencia de manosa fue evaluada frente a glóbulos rojos de ave, bovino, equino, humano (A+) y ovino. La capacidad de sobrevivencia en el interior de macrófagos se determinó valorando la viabilidad de las cepas 24 horas después de la ingestión por macrófagos de línea de origen murino. Veintinueve cepas (96.6%) mostraron un plasmido cuyo tama o corresponde al plasmido de virulencia asociado a serotipo. Veintisiete cepas (90%) mostraron dos o más plasmidos. Perfiles de restricción realizados con las enzimas Pst I y Sma I permitieron establecer una alta asociación entre las cepas. Se determinó resistencia a uno o más antimicrobianos en catorce cepas de S. enteritidis (46.6%), se observó resistencia a oxitetraciclina, sulfatrimetroprim, estreptomicina y cloranfenicol. Ninguna cepa mostró resistencia a gentamicina y kanamicina. Se detectó actividad hemaglutinante manosa sensible como indicativo de adhesinas fimbriales tipo I en once cepas (36.6%) de las treinta evaluadas. La totalidad de las cepas sobrevivieron en el interior de macrófagos de línea J774A.1 y fueron viables 24 horas después de la ingestión. Con base en los resultados de este estudio se verificó la virulencia de cepas de Salmonella enteritidis de origen aviar, confirmando esta especie como fuente potencial de infección para humanos. La plasmidotipia, la susceptibilidad antimicrobiana, la detección de hemaglutininas y la sobrevivencia de las cepas en el interior de macrófagos permitieron caracterizar las cepas de campo y pueden constituirse en herramientas útiles para estudios biológicas y en combinación con otras técnicas moleculares y fenotípicas pueden contribuir a estudios epidemiológicos, dada la importancia en salud humana y animal de este patógeno.
Caracterización molecular de aislamientos de Acinetobacter baumannii provenientes de la unidad de quemados de un hospital de tercer nivel de Bogotá Molecular characterization of Acinetobacter baumannii isolations from a burns unit in a third level attention hospital in Bogotá
JANNETH ORQUíDEA PINZóN,JOSé RAMóN MANTILLA,EMILIA MARíA VALENZUELA,FEDERICO FERNáNDEZ
Infectio , 2006,
Abstract: Objetivo. En este estudio se realiza una descripción fenotípica y genética de aislamientos de Acinetobacter baumannii provenientes de la Unidad de Quemados del hospital Simón Bolívar de Bogotá durante diez meses de seguimiento. Materiales y métodos. Se tipificaron 25 aislamientos provenientes de pacientes y 3 ambientales mediante REP-PCR. Para la detección microbiológica de carbapenemasas se realizó la prueba de Hodge y el sinergismo de doble disco. Se determinaron los puntos isoeléctricos con isoelectroenfoque de las betalactamasas producidas. La detección de los genes bla OXA23, bla OXA24, bla VIM, bla IMP se realizó mediante PCR. Resultados. Según su genotipo, los aislamientos se reunieron en nueve grupos La genotipificación clasificó los aislamientos en nueve grupos relacionados con un índice de similitud superior a 0,85. En el grupo E, constituido por el 39,2% de los aislamientos, se detectó un clon conformado por los tres aislamientos ambientales y dos recuperados de pacientes. Se presentó resistencia a los carbapenémicos en 64,2% de los 28 aislamientos; de éstos, el 66,6% fueron resistentes, además, a todos los betalactámicos, aminoglucósidos y fluoroquinolonas probados. En 17 de los 18 aislamientos resistentes a imipenem se evidenció la presencia de carbapenemasas del tipo oxacilinasa. En todos los aislamientos resistentes a imipenem se detectó el gen bla OXA23 y la presencia de dos betalactamasas con puntos isoeléctricos de 6,3 y 6,9. Conclusiones. Se detectó un grupo endémico de A. baumannii que permaneció durante los 10 meses del estudio. La presencia de una carbapenemasa del grupo OXA23 fue un factor determinante de la resistencia a los carbapenémicos. Sin embargo, los resultados microbiológicos permiten suponer la presencia de otros posibles mecanismos de resistencia. Objective.This study is a fenotypical and genetical description of Acinetobacter baumannii carried out in a ten month follow-up at the Unidad de Quemados from the Hospital Simon Bolívar in Bogotá. Materials and methods. 25 patient and 3 environmental isolates were typified by REP-PCR. Hodge’s test and double disc sinergy were done for microbiologic carbapenemase detection. Isoelectric points were determined by betalactamases isoelectric focusing. Gene bla OXA23, bla OXA24, bla VIM, bla IMP detection was carried out through PCR. Results. Isolate genotypification allowed their classification in nine groups based on similarities greater than 0.85. The E group consisted of 39.2% of the isolates, a clone formed by three environmental isolates and two recovered from patients. 64.2%
Molecular characterization of Staphylococcus aureus from nosocomial sources by Multilocus Enzyme Electrophoresis (MLEE) Caracterización molecular de Staphylococcus aureus de origen nosocomial por Electroforesis de Enzimas Multilocus (MLEE)
Suárez Zulma,Valenzuela Emilia María,Mantilla José Ramón,Agudelo Carlos
Revista Colombiana de Biotecnología , 2002,
Abstract: Multilocus Enzyme Electrophoresis (MLEE) was used to characterise 41 Staphylococcus aureus isolates taken from Hospital San Juan de Dios (Bogotá) patients and personnel at the Intensive Care Unit (ICU), from September 1998 to September 1999. The genetic relationships between isolates, as well as resistance profile influence, biotype and compilation time/date, were established. The experimental evidence suggests that the population structure corre-sponds to the clonal model described for Staphylococcus aureus populations, reflecting the prevalence of a small number of clones during the collection period. Se caracterizaron 41 aislamientos se Staphylococcus aureus tomados a pacientes y personal de la unidad de cuidados intensivos (UCI) del Hospital San Juan de Dios, en el periodo comprendido entre septiembre de 1998 y septiembre de 1999 por medio del método de caracterización de Electroforesis de Enzimas Multilocus(MLEE). Se establecieron las relaciones genéticas entre los individuos, así como influencia del perfil de resistencia, el biotipo y el periodo de recolección. La evidencia experimental sugirió que la estructura de la población analizada encaja en el modelo clonal descrito previamente para las poblaciones de Staphylococcus aureus, coincidiendo con la prevalencia de un peque o número de clones durante el periodo de recolección.
Molecular characterization of an outbreak caused by CTX-M-12-producing Klebsiella pneumoniae in a Colombian hospital′s neonatal intensive care unit Caracterización molecular de un brote por Klebsiella pneumoniae productora de CTX-M-12 en la unidad de cuidado intensivo neonatal de un hospital colombiano
José Ramón Mantilla,María Teresa Reguero,Elsa Beatriz González,Ibonne Ayde García
Biomédica , 2011,
Abstract: Introduction. Molecular characterisation of Klebsiella pneumoniae strains is a tool that assits in the reduction of the disemination of drug resistance and the control of nosocomial infections that are caused by this pathogen. Objective. Molecular description of an outbreak of nosocomial infection caused by Klebsiella pneumoniae in a neonatal intensive care unit in a tertiary level hospital in Bogotá. Methods: Eleven Klebsiella pneumoniae isolates were analysed. Production of Extended Spectrum Beta-Lactamases was verified by agar diffusion tests. Isoelectric points of the enzymes were determined by isoelectric focusing. The blaCTX-M-12 gene was detected by PCR and pulsed field gel electrophoresis genotyping was done. Results. All the isolates were Extended Spectrum Beta-Lactamase producers. Pulsed field gel electrophoresis and BOX-PCR genotyping grouped two isolates from hospital objects and eight infection-causing isolates into a single epidemic clone. The isolate from a thermometer was not grouped into the epidemic clone and showed a different resistance pattern. Isoelectric focusing revealed simultaneous beta-lactamase production having different isoelectric points. PCR amplification revealed the presence of the blaCTX-M-12 gene in the 11 isolates studied. Conclusion. This is the first report of a molecularly characterised outbreak of CTX-M-12-producing Klebsiella pneumoniae from Colombia. The results of this study provide additional evidence of the global dissemination of CTX-M ESBL and the need for epidemiological follow-up in our hospitals. Introducción. La caracterización molecular de cepas de Klebsiella pneumoniae es una herramienta que contribuye a disminuir la diseminación de la resistencia y al control de las infecciones nosocomiales causadas por este patógeno. Objetivo. Describir molecularmente un brote de infección nosocomial por Klebsiella pneumoniae en la Unidad de Cuidado Intensivo Neonatal de un hospital de tercer nivel de Bogotá. Materiales y métodos. Se analizaron once aislamientos. Se verificó la producción de betalactamasas de espectro extendido mediante pruebas de difusión en agar. Se determinaron los puntos isoeléctricos de las betalactamasas mediante isoelectroenfoque. Se detectó el gen blaCTX-M-12 por PCR y se realizó genotipificación mediante BOX- PCR y electroforesis en gel con campos pulsados (PFGE). Resultados. Los aislamientos fueron productores de beta-lactamasas de espectro extendido. La genotipificación por PFGE y por BOX-PCR, agrupó a dos aislamientos provenientes de objetos hospitalarios y a los ocho aislamientos causan
Distribution of extended spectrum β-lactamases-codifying genes in Klebsiella pneumoniae isolates from hospitals of Bogota, D.C., Colombia Distribución de genes codificadores de β-lactamasas de espectro extendido en aislamientos de Klebsiella pneumoniae de hospitales de Bogotá, D.C., Colombia
Ingrid Yamile Pulido,José Ramón Mantilla,Emilia María Valenzuela,María Teresa Reguero
Biomédica , 2011,
Abstract: Introduction. Extended spectrum β-lactamases (ESBL) are the most widely distributed enzymes in Enterobacteriaceae of Latin America and are key enzymes in resistance to antibiotics in common use. However, in Colombia, little information is available concerning the identity of genes coding for these enzymes in Klebsiella pneumoniae. Objective. The bla genes were identified in K. pneumoniae isolated from hospitals in Bogotá D.C., Colombia. Materials and methods. One hundred seventy-seven isolates of ESBL producers were collected from 10 hospitals in Bogota between 2003 and 2005. Antibiotic susceptibility was determined by disk diffusion, and the number of β-lactamases in each isolate was assessed by isoelectric focusing. blaCTX-M, blaSHV and blaTEM were identified by PCR and subsequent sequencing. Results. Besides, the resitenance to third generation cephalosporins, 44.7 % and 49.7 % were resistant to amikacyn and thrimetoprim-sulaphametoxazole respectively. Lower resistance rates to other antibiotics were observed as well. An average of three β-lactamases were detected by isoelectric focusing, and the genes blaCTX-M-12 (56.0%) and blaSHV-12 (33.3%) were the most prevalent. blaSHV-5 (11.8%), blaCTX-M-1 (4.0%), blaSHV-27 (2.8%), blaSHV-2 (2.8%), blaCTX-M-2 (1.7%) and blaCTX-M-15 (0.6%) were present in smaller percentages. In addition, three genes were identified that coded for narrow spectrum β-lactamases. Conclusion. Eleven bla genes were identified, eight of which were ESBL-coding. The diversity of the bla genes suggested a continuing exposure of K. pneumoniae to strong antibiotic pressures in Bogota hospitals. Introducción. Las beta-lactamasas de espectro extendido son las enzimas de Enterobacteriaceae de mayor distribución en Latinoamérica. No obstante, en Colombia existe poca información sobre la identidad de los genes codificadores de estas enzimas en Klebsiella pneumoniae. Objetivo. Identificar genes bla presentes en K. pneumoniae procedentes de hospitales de Bogotá, D.C., Colombia. Materiales y métodos. Se recolectaron 177 aislamientos productores de beta-lactamasas de espectro extendido de 10 hospitales de Bogotá, entre 2003 y 2005. Se determinó su sensibilidad antibiótica por difusión en disco y el número de beta-lactamasas presentes por isoelectroenfoque. Se identificaron los genes blaCTX-M, blaSHV y blaTEM, mediante PCR y posterior secuenciación. Resultados. Además de la resistencia a las cefalosporinas de tercera generación, el 44,7 % y el 49,7 % fueron resistentes a la gentamicina y al trimetoprim-sulfametoxazol, respectivamente. Se observaron
Diversidad genética y estructura de la población de Vibrio choierae en Colombia Genetic diversity and population structure of Vibrio choierae in Colombia
Ria?o Pachón Diego Mauricio,Valenzuela de Silva Emilia María,Mantilla Anayá José Ramón,Agudelo Carlos
Revista Colombiana de Biotecnología , 2003,
Abstract: Se realizó la electroforesis en gel por campo pulsado (PFGE) de los macrofragmentos de restricción de 34 aislamien-tos de Vibrio choierae pertenecientes a la epidemia de cólera que se presentó en Colombia entre 1991 y 1996, adicionalmente se analizaron 3 aislamientos de V. choierae no pertenecientes a esta epidemia y un aislamiento de V fluvialis. La diversidad genética observada para los 38 aislamientos tipificados fue de 0,95 valor muy similar al obtenido por Electroforesis de Enzimas Multilocus (MLEE). No se observó correlación entre las variables que carac-terizan a estos aislamientos (serotipo, origen [clínico o ambiental], departamento, tipo electroforético (MLEE) y perfil de macrofragmentos de restricción (PFGE)). No se obtuvo evidencia de desequilibrio de ligamiento al evaluar esta población con los marcadores genéticos PFGE y MLEE. Se sugiere que la población de Vibrio choierae en Colom-bia presenta una estructura genética sexual, hipótesis que está soportada por la falta de evidencia de desequilibrio de ligamiento y la ausencia de correlaciones entre las variables epidemiológicas, bioquímicas y moleculares a dispo-sición, y por el alto valor de diversidad genética obtenido, que puede ser el reflejo de la coexistencia de varias líneas de descendencia entre las cuales existe un alto flujo genético. Palabras clave: Vibrio choierae; Electroforesis en gel por campo pulsado; epidemiología molecular; genética de po-blaciones; desequilibrio de ligamiento. Pulsed field gel electrophoresis (PFGE) was used to study thirty-four Vibrio choierae isolates from the Colombian cholera epidemic between 1991 and 1996. Three Vchoierae isolates not belonging to the epidemic in Colombia and a Vfluvialis isolate were also analysed. The genetic diversity observed for the 38 isolates typified was 0.95, a very similar valué to that obtained by Multilocus Enzyme Electrophoresis (MLEE). No cor reía tion was observed be-tween the variables characterising these isolates (serotype, origin [clinical or environmental], state, electrophoretic type (MLEE) and restriction macro-fragment profile or pulsetype (PFGE)). No evidence of linkage disequilibrium was obtained on evaluating this population with PFGE and MLEE genetic markers. It is suggested that the Vibrio choierae population in Colombia presents a sexual genetic structure. The lack of evidence for linkage disequilibrium and the absence of correlation between the epidemiological, biochemical and molecular variables available sustains such a hypothesis. It is also sustained by the high valué for genetic diversity obtained wh
Distribución de genes codificadores de β-lactamasas de espectro extendido en aislamientos de Klebsiella pneumoniae de hospitales de Bogotá, D.C., Colombia
Pulido,Ingrid Yamile; Mantilla,José Ramón; Valenzuela,Emilia María; Reguero,María Teresa; Gonzalez,Elsa Beatriz;
Biomédica , 2011,
Abstract: introduction. extended spectrum β-lactamases (esbl) are the most widely distributed enzymes in enterobacteriaceae of latin america and are key enzymes in resistance to antibiotics in common use. however, in colombia, little information is available concerning the identity of genes coding for these enzymes in klebsiella pneumoniae. objective. the bla genes were identified in k. pneumoniae isolated from hospitals in bogotá d.c., colombia. materials and methods. one hundred seventy-seven isolates of esbl producers were collected from 10 hospitals in bogota between 2003 and 2005. antibiotic susceptibility was determined by disk diffusion, and the number of β-lactamases in each isolate was assessed by isoelectric focusing. blactx-m, blashvand blatem were identified by pcr and subsequent sequencing. results. besides, the resitenance to third generation cephalosporins, 44.7 % and 49.7 % were resistant to amikacyn and thrimetoprim-sulaphametoxazole respectively. lower resistance rates to other antibiotics were observed as well. an average of three β-lactamases were detected by isoelectric focusing, and the genes blactx-m-12 (56.0%) and blashv-12 (33.3%) were the most prevalent. blashv-5 (11.8%), blactx-m-1-1 (4.0%), blashv-27 (2.8%), blashv-2 (2.8%), blactx-m-1-2 (1.7%) and blactx-m-1-15 (0.6%) were present in smaller percentages. in addition, three genes were identified that coded for narrow spectrum β-lactamases. conclusion. eleven bla genes were identified, eight of which were esbl-coding. the diversity of the bla genes suggested a continuing exposure of k. pneumoniae to strong antibiotic pressures in bogota hospitals.
Epidemiología molecular de infección nosocomial por Klebsiella pneumoniae productora de beta-lactamasas de espectro extendido
Espinal,Paula Andrea; Mantilla,José Ramón; Saavedra,Carlos H; Leal,Aura Lucía; Alpuche,Celia; Valenzuela,Emilia María;
Biomédica , 2004,
Abstract: molecular epidemiology applied to the study of nosocomial infection has been fundamental in formulating and evaluating control methods. from patients in a level 3 bogota hospital, klebsiella pneumoniae samples were isolated that produced extended-spectrum beta-lactamases (esbl). each of 15 isolates was characterized microbiologically and by molecular characters realized by pulsed field gel electrophoresis (pfge) and by repetitive-dna sequences amplification (rep-pcr). antimicrobial susceptibility and esbl production was determined in accordance with nccls guidelines. the beta-lactamases were evaluated by isoelectric-focusing and pcr. twelve (80%) of the isolates were associated with nosocomial infection; 11 of them were from intensive care units. the antibiotic susceptibility displayed 13 resistance patterns - 87% presented co-resistance to amikacin, 53% to gentamicin, 33% to ciprofloxacin,40% to cefepime, 67% to piperacillin/tazobactam, 60% to trimethoprim/sulfamethoxazole and 47% to chloranphenicol. all were sensitive to imipenem. production of tem and shv beta-lactamases was detected simultaneously in most isolates by isoelectric focusing and 93.3% produced a ceftazidimase of pi 8.2 of the shv-5 type. the 15 isolates were grouped into 11 and 12 electrophoretic patterns by pfge and rep-pcr, respectively. the degree of genetic variability indicated an endogenous origin of the nosocomial infections.
Identificación por PCR-SSCP de genes de cefotaximasas en aislamientos hospitalarios de Enterobacteriaceae
Mantilla Anaya,José Ramón; Barreto Hernández,Emiliano; Reguero Reza,María Teresa; Velandia Rodríguez,Daniel Augusto;
Revista Colombiana de Biotecnología , 2009,
Abstract: ctx-m cefotaximases are the most widely distributed extended-spectrum beta-lactamases among enterobacteriaceae and they are an important cause of microbial resistance in nosocomial infection-causing isolates. the object of this work was to identify group 1 ctx-m cefotaximase variants from pcr amplified blactx-m genes by single-stranded conformational polymorphism of restriction fragments (rf-sscp). we analysed 49 enterobacteria isolates using the rf-sscp procedure standardised in this work; isolates were collected from eight hospitals attached to the bogota health secretariat (secretaría distrital de salud). ctx-m-12, ctx-m-15, ctx-m-12a and ctx-m-1 variants were detected as well as a new one, designated ctx-m-60. all variants were detected in hospital and community isolates thereby indicating these genes? possible high mobility from and towards hospital centres. this study represents the first report in colombia of ctxm-12a and of the new evolutionary variant: ctx-m-60.
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