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Estudio de estabilidad del sistema ELISA DAVIH AgP24 Stability study of ELISA DAVIH-p24 Ag
Kenia Romero Martínez,María T. Pérez Guevara,Anitza Fragas Quintero,Yulianne Pe?a Orta
Revista Cubana de Medicina Tropical , 2009,
Abstract: OBJETIVO: para extender el tiempo de vida útil del sistema ELISA DAVIH-AgP24, se realizó una prueba de estabilidad en anaquel. MéTODOS: el estudio se realizó durante 12 meses, con 3 lotes consecutivos del diagnosticador. El protocolo a seguir fue ensayar la curva de calibración del control positivo, según las instrucciones de uso del sistema. Se controlaron los requisitos de calidad de cada uno de los reactivos de acuerdo con sus especificaciones. Se estudió la normalidad de los valores obtenidos en cada uno de los puntos de la curva en los meses estudiados y la homogeneidad de las medias y las varianzas utilizando como criterios de aceptación las dócimas de Grubbs y de Cochran, respectivamente. Para la precisión del ensayo, se realizó un análisis de cada uno de los puntos de la curva en los meses 1, 4, 7 y 9, mediante la utilización de cartas de control (gráficas de Levy-Jennings), estableciendo como límites ± 2 desviaciones estándar. RESULTADOS: los requisitos de calidad de cada componente cumplieron con las especificaciones hasta el noveno mes, a partir del cual se apreciaron cambios en las características organolépticas del cromógeno tetrametilbencidina y un deterioro en las características funcionales del sistema, por causa del tampón sustrato; en el resto de los componentes no se observaron cambios. Los valores obtenidos fueron aceptados como normales hasta el noveno mes. Los valores estadísticos de Grubbs y de Cochran observados para los 6 puntos de la curva durante los 9 meses analizados fueron menores que los valores críticos tabulados para a= 5 %, por lo que se concluyó que existe homogeneidad entre medias y varianzas. En los gráficos de Levey-Jennings los valores se mantuvieron dentro de los límites establecidos. CONCLUSIONES: estos resultados permitieron extender el período de validez del sistema hasta 6 meses, con 50 % de cobertura. OBJECTIVE: extending useful lifetime of ELISA DAVIH-p24 Ag, an on shelf stability test was conducted. METHODS: three consecutive batches of the diagnostic kit were studied for 12 months. The applied protocol was to test the calibration curve of the positive control according to the manufacturer's instructions for the system operation. The quality requirements for each reagent, according to their specifications, were controlled. Normality in obtained values for each point of the curve in the analyzed period and also homogeneity of means and variances were studied by using Grubbs′ and Cochran′s tests, respectively. For the assay precision, each point of the curve was analyzed at 1st, 4th, 7th and 9th months by mea
Validación del sistema UMELISA HBsAg PLUS utilizando muestras de suero de cordón umbilical Validation of UMELISA HBsAg PLUS system based on umbilical cord serum samples
Kenia Romero Martínez,María T Pérez Guevara,Norma García Agramonte,Esperanza Sánchez Diéguez
Revista Cubana de Medicina Tropical , 2013,
Abstract: Introducción: la selección y el desarrollo de métodos analíticos siempre ha sido un tema importante para los laboratorios de ensayo. Para adoptar un método se hace necesario validarlo, porque el objetivo de la validación es probar la aptitud de los métodos, así como la competencia del laboratorio para realizar determinado ensayo. El sistema UMELISA HBsAg PLUS no contempla dentro de su aplicación el empleo de muestras de suero obtenidas a partir de sangre del cordón umbilical, sin embargo, con este tipo de muestra se certifica el uso de la placenta como materia prima. Objetivo: teniendo en cuenta la necesidad de demostrar que el cambio no afecta los parámetros de desempe o del sistema, se hizo su validación para muestras de suero de cordón umbilical. Métodos: se emplearon tres paneles de muestras en los estudios de especificidad, concordancia con el sistema de referencia Hepanostika HBsAg Uni-Form II, robustez, precisión a dos niveles de repetibilidad (intraensayos) y precisión intermedia (interensayos), y límite de detección. Resultados: la validación del sistema mostró los siguientes indicadores: especificidad y concordancia del 100 %, sistema robusto frente a los cambios de temperatura entre 35 y 38 °C, elevada precisión intraensayos (4,65 %) e interensayos (CV menores que 20 %), límite de detección correspondiente a una dilución de 1/10 000. Conclusiones: los resultados demostraron que el sistema UMELISA HBsAg PLUS se puede emplear para la detección de HBsAg en muestras de suero de cordón umbilical. Introduction: the selection and the development of analytical methods have always been an important issue for testing laboratories. The adoption of a method requires validation because the objective is to prove the capability of a method as well as the competencies of the laboratory to make an specific assay. The range of applications of UMELISA HbsAg PLUS system does not include the use of serum samples taken from the umbilical cord blood; however the use of placenta as raw material is certified with this kind of sample. Objective: to validate this system for umbilical cord serum sample taking into account the need of proving that this change does not affect the performance parameters of the system. Methods: three panels of samples were used to study specificity, agreement with the reference system Hepanostika HbsAg Uni-Form II, robustness, precision at two levels of repeatibility (intrassay) and intermediate precision (interassay) and detection limit. Results: validation of the system showed the following indicators: specificity and agreement of 100 %,
Dise o y evaluación del sistema DAVIH VIH-2 Design and evaluation of DAVIH VIH-2
Dayamí Martín Alfonso,Eladio Silva Cabrera,María T. Pérez Guevara,Dervel F. Díaz Herrera
Revista Cubana de Medicina Tropical , 2007,
Abstract: Se expusieron los resultados del dise o y la evaluación del diagnosticador DAVIH VIH-2, sistema ELISA indirecto dise ado para el pesquisaje de anticuerpos al VIH-2, que utiliza en su fase sólida un péptido sintético de la proteína de envoltura gp36 del VIH-2. La evaluación del desempe o del sistema se realizó utilizando paneles de referencia de la OMS y se determinó que la sensibilidad fue 100 %, la especificidad 99,81 %, la eficacia 99,81 % y la concordancia muy buena (índice kappa= 0,978). Las muestras de suero de 959 personas con resultados indeterminados o negativos a la confirmación de anticuerpos al VIH-1 (DAVIH-Blot) se evaluaron en el sistema DAVIH VIH-2. Resultaron reactivas al sistema 24 muestras, confirmándose la presencia de anticuerpos al VIH-2 en 6 de ellas. Estos resultados permitieron sugerir la introducción de este diagnosticador en el algoritmo de diagnóstico de la infección por VIH en Cuba. The results of the design and evaluation of DAVIH VIH-2 diagnosing system, an indirect Elisa for screening of HIV-2 antibodies, which uses a HIV-2 glycoprotein gp36 synthetic peptide in its solid phase, were exposed. In the system evaluation using WHO reference panels, 100 % sensitivity, 99,81 % specificity, 99,81% efficacy and very good concordance level (kappa = 0.978) were attained. Serum samples of 959 individuals with undetermined or negative results to the HIV-1 antibodies confirmation (DAVIH blot) were evaluated by the DAVIH VIH-2 system. Twenty four samples were reactive, six of which had confirmed HIV-2 antibodies. These results allowed recommending the introduction of this diagnostic kit in the HIV infection diagnosing algorithm in Cuba.
Pesquisaje de anticuerpos contra el virus linfotrópico de células T humanas tipo I (HTLV-I) en donantes de sangre y grupos de riesgo
ELADIO SILVA CABRERA,MARíA T. PéREZ GUEVARA,ANA L. LUBIáN CABALLERO,JOSé L. DE LA FUENTE ARZOLA
Revista Cubana de Medicina Tropical , 1997,
Abstract: Se estudió la presencia de anticuerpos contra el virus linfotrópico de células T humanas tipo I (HTLV I) en 3 774 sueros; de ellos, 1 409 eran de donantes de sangre, 1 444 de pacientes que habían padecido recientemente alguna enfermedad de transmisión sexual (ETS) y 921 de enfermos politransfundidos. Se emplearon los sistemas DAVIH HTLV I (ELISA) y DAVIH BLOT HTLV I (Western Blot) producidos en Laboratorios DAVIH (La Habana, Cuba), para el pesquisaje y confirmación, respectivamente. De los 68 sueros reactivos en la prueba de ELISA, en 2 se confirmó la presencia de anticuerpos al HTLV I/II y 12 fueron considerados indeterminados por el Western Blot. It was studied the presence of HTLV-I antibodies in 3 774 sera, 1 409 of them were from blood donors, 1 444 were from patients who had suffered from some sexually transmitted disease recently, and 921 from transfused patients. The DAVIH HTLV I (ELISA) and DAVIH BLOT HTLV I (Western Blot) systems produced at the DAVIH Laboratories (Havana, Cuba) were used for screening and confirmation, respectively. Of the 68 reactive sera utilized in the ELISA test, it was confirmed the presence of HTLV I/II antibodies in 2, whereas 12 were considered as undetermined by the Western Blot.
Estudio de estabilidad del sistema ELISA DAVIH AgP24
Romero Martínez,Kenia; Pérez Guevara,María T.; Fragas Quintero,Anitza; Pe?a Orta,Yulianne; Izquierdo Márquez,Maricela;
Revista Cubana de Medicina Tropical , 2009,
Abstract: objective: extending useful lifetime of elisa davih-p24 ag, an on shelf stability test was conducted. methods: three consecutive batches of the diagnostic kit were studied for 12 months. the applied protocol was to test the calibration curve of the positive control according to the manufacturer's instructions for the system operation. the quality requirements for each reagent, according to their specifications, were controlled. normality in obtained values for each point of the curve in the analyzed period and also homogeneity of means and variances were studied by using grubbs′ and cochran′s tests, respectively. for the assay precision, each point of the curve was analyzed at 1st, 4th, 7th and 9th months by means of levy-jennings′ graphs, setting ± 2 standard deviations as limit values. results: the quality requirements of each component met the specifications up to 9th month; from that moment on, changes in the organoleptic characteristics of tetramethylbenzidine chromogen and deterioration in the operational characteristics of the system were observed due to substrate buffer. the remaining components did not change. the yielded values were accepted as normal up to the 9th month. grubb′s and cochran′s test values for the 6 points of the curve during the nine months were lower than the tabulated critical values for a= 5 %, so homogeneity between means and variances was confirmed. levey-jennings′s graphs showed values within the set limits. conclusions: these results allowed extending the validity period of the system to six months, with 50 % coverage.
Validación del método de titulación del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1
álvarez Seguí,Giselle; Dubed Echevarría,Marta; Noa Romero,Enrique; Navea Leyva,Leonor M.; Pérez Guevara,María T.; Rodríguez,Antonio;
Revista Cubana de Medicina Tropical , 2009,
Abstract: background: viral quantification is essential to demonstrate biological product safety during the validation of the production process. objective: to evaluate the accuracy, linearity and detection limit of a titration method for the human immunodeficiency virus type 1. methods: the titration was performed by calculating the end-point dilution method, through the cytopathic effect assay and the determination of ag p24 production by an enzyme immunoassay. mean infective dose in cultured cells per milimeter was estimated by reed and muench′s method. results: the accuracy of the method was similar to that of the reference titration, the variation coefficient figures for accuracy (repeatability and intermediate accuracy) were lower than 5 % and 10 %, respectively, the linearity showed adequate correlation coefficient and the detection limit was determined in the 10-12 dilution conclusions: the evaluated method was suitable for viral quantification
Pesquisaje de anticuerpos contra el virus linfotrópico de células T humanas tipo I (HTLV-I) en donantes de sangre y grupos de riesgo
SILVA CABRERA,ELADIO; PéREZ GUEVARA,MARíA T.; LUBIáN CABALLERO,ANA L.; DE LA FUENTE ARZOLA,JOSé L.; NAVEA LEYVA,LEONOR; CRUZ SUI,OTTO;
Revista Cubana de Medicina Tropical , 1997,
Abstract: it was studied the presence of htlv-i antibodies in 3 774 sera, 1 409 of them were from blood donors, 1 444 were from patients who had suffered from some sexually transmitted disease recently, and 921 from transfused patients. the davih htlv i (elisa) and davih blot htlv i (western blot) systems produced at the davih laboratories (havana, cuba) were used for screening and confirmation, respectively. of the 68 reactive sera utilized in the elisa test, it was confirmed the presence of htlv i/ii antibodies in 2, whereas 12 were considered as undetermined by the western blot.
Dise?o y evaluación del sistema DAVIH VIH-2
Martín Alfonso,Dayamí; Silva Cabrera,Eladio; Pérez Guevara,María T.; Díaz Herrera,Dervel F.; Romero Martínez,Kenia; Díaz Torres,Héctor M.; Lubián Caballero,Ana L.; Ruiz Gutiérrez,Nancy; Ortiz Losada,Eva;
Revista Cubana de Medicina Tropical , 2007,
Abstract: the results of the design and evaluation of davih vih-2 diagnosing system, an indirect elisa for screening of hiv-2 antibodies, which uses a hiv-2 glycoprotein gp36 synthetic peptide in its solid phase, were exposed. in the system evaluation using who reference panels, 100 % sensitivity, 99,81 % specificity, 99,81% efficacy and very good concordance level (kappa = 0.978) were attained. serum samples of 959 individuals with undetermined or negative results to the hiv-1 antibodies confirmation (davih blot) were evaluated by the davih vih-2 system. twenty four samples were reactive, six of which had confirmed hiv-2 antibodies. these results allowed recommending the introduction of this diagnostic kit in the hiv infection diagnosing algorithm in cuba.
Adaptación a microescala del método potenciométrico con electrodo ión selectivo para la cuantificación de fluoruro
GUEVARA RUIZ, Paulina;ORTIZ PéREZ, María Deogracias;
Revista internacional de contaminación ambiental , 2009,
Abstract: similarly to other countries, ground water from méxico is naturally polluted by fluoride. the main effects of fluoride at typical ground water concentrations are dental fluorosis, neurological deficits and reproductive disorders. in order to verify that the fluoride concentration is within the allowed guideline in méxico (nom 127 and 201), it is important to monitor fluoride levels in water and commercial beverages. the aim of this work is to develop a modification of the standard potentiometric method for fluoride determination in water, in order to reduce costs and amount of potentially toxic waste substances. both methods were validated, the standard potentiometric method with the ion selective electrode and the microscale modification proposed in this paper. the methods were compared using statistic tests and graphics, followed by the comparison of 125 samples of commercial bottled water sold in the city of san luis potosí. optimal results were obtained for the validation of both methods, and the microscale modification showed statistically identical results to those obtained with the standard method in all samples of bottled water. the microscale modification is a good alternative for fluoride assessment in water and beverages, and it represents a 95 % reduction of costs and chemical waste.
ADAPTACIóN A MICROESCALA DEL MéTODO POTENCIOMéTRICO CON ELECTRODO IóN SELECTIVO PARA LA CUANTIFICACIóN DE FLUORURO
Paulina GUEVARA RUIZ,María Deogracias ORTIZ PéREZ
Revista internacional de contaminación ambiental , 2009,
Abstract: En varios países, incluido México se presenta una contaminación natural con fluoruro en agua subterránea; los principales efectos en la salud observados en población expuesta a concentraciones mayores al valor permisible que en México es de 1.5 mg/L- son la fluorosis dental y esquelética, así como da o reproductivo y neurológico. En varios estados de la República Mexicana, este problema es aún desconocido, de ahí la necesidad de evaluar las concentraciones de fluoruro en agua de consumo en varias comunidades. Así, el objetivo de este trabajo es desarrollar un método a microescala para la determinación de fluoruro en agua, que al reducir la cantidad de reactivo y muestra necesarios, disminuya costo y substancias de desecho. Se validó el método potenciométrico establecido en la NMX-AA-077-SCFI-2001, así como el método a microescala propuesto en este trabajo; posteriormente, se compararon ambos métodos mediante gráficos y cálculos estadísticos. Además se analizaron por ambos métodos 125 muestras de agua embotellada de venta en la ciudad de San Luis Potosí. Los datos de la validación del método fueron óptimos para su desempe o. Los resultados de la determinación en las muestras de agua embotellada por ambos métodos, indican que la modificación a microescala es estadísticamente comparable al método potenciométrico con electrodo ión selectivo. El método propuesto a microescala es apropiado para su utilización, con una reducción de 95 % en costo y desechos generados.
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