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铜绿假单胞菌popN-突变子Ⅲ型分泌水平及与蛋白酶关系的研究
杨洪江,,李明春,邢来君
生物工程学报 , 2007,
Abstract: 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) Ⅲ型分泌系统(typeⅢ secretion system,TTSS)是重要的细菌致病因子之一,能够将酶蛋白直接注入到宿主细胞内,导致细胞损害的发生。重点研究了TTSS中的popN基因的功能,通过构建popN-突变子,发现该突变子在非诱导条件下,能够分泌酶蛋白,显示popN基因编码的蛋白对TTSS蛋白的分泌具有负调控作用。进一步研究发现,popN-突变子在不同培养基中TTSS的分泌水平存在着显著差异,影响对popN基因的功能的判断。为了解决这一矛盾,从几个方面分析了造成表型差异的可能因素,确定蛋白酶对TTSS分泌蛋白的降解作用,是表型差异存在的主要原因,从而首次系统地阐明popN--突变子在不同培养基中都具有TTSS组成型表达的表型,对于深入研究TTSS的调控机制具有重要意义。
铜绿假单胞菌popN突变子Ⅲ型分泌水平及与蛋白酶关系的研究
杨洪江,,李明春,邢来君
微生物学报 , 2007,
Abstract: 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) Ⅲ型分泌系统(typeⅢ secretion system,TTSS)是重要的细菌致病因子之一,能够将酶蛋白直接注入到宿主细胞内,导致细胞损害的发生。重点研究了TTSS中的popN基因的功能,通过构建popN-突变子,发现该突变子在非诱导条件下,能够分泌酶蛋白,显示popN基因编码的蛋白对TTSS蛋白的分泌具有负调控作用。进一步研究发现,popN-突变子在不同培养基中TTSS的分泌水平存在着显著差异,影响对popN基因的功能的判断。为了解决这一矛盾,从几个方面分析了造成表型差异的可能因素,确定蛋白酶对TTSS分泌蛋白的降解作用,是表型差异存在的主要原因,从而首次系统地阐明popN--突变子在不同培养基中都具有TTSS组成型表达的表型,对于深入研究TTSS的调控机制具有重要意义。
基于GoogleEarth影像分析区域性大型“X”共轭节理系统对宏观岩溶作用的控制
杨瑞,学庸,,文雪峰
地质论评 , 2009,
Abstract: 从黔南、桂北的航天遥感图像上可以清楚地看出,地表的宏观岩溶地貌明显地受控于区域性大型“X”共轭节理系统,此类节理构成一幅巨型的渗滤网,成为大气降水下渗的主要通道,从而导致被其穿透的岩石遭受溶蚀,形成以线性岩溶谷地为主体的岩溶景观。即水平地层分布区,呈片状“X”形网络结构;直立地层分布区,呈羽状条带结构。水体下渗至潜水面后,将主要沿“X”节理走向向当地最低侵蚀基准面排泄,从而形成复杂的地下管道网络系统。首次利用网上GoogleEarth影像研究喀斯特环境,解决了只能依赖航片和卫星照片才能研究地球地貌的瓶颈,这对地貌研究和喀斯特石漠化的研究和治理提供了廉价便利的影像材料。
铜绿假单胞菌popn-突变子ⅲ型分泌水平及与蛋白酶关系的研究
杨洪江?,,李明春?,邢来君?
生物工程学报 , 2007,
Abstract: 铜绿假单胞菌(pseudomonasaeruginosa)ⅲ型分泌系统(typeⅲsecretionsystem,ttss)是重要的细菌致病因子之一,能够将酶蛋白直接注入到宿主细胞内,导致细胞损害的发生。重点研究了ttss中的popn基因的功能,通过构建popn-突变子,发现该突变子在非诱导条件下,能够分泌酶蛋白,显示popn基因编码的蛋白对ttss蛋白的分泌具有负调控作用。进一步研究发现,popn-突变子在不同培养基中ttss的分泌水平存在着显著差异,影响对popn基因的功能的判断。为了解决这一矛盾,从几个方面分析了造成表型差异的可能因素,确定蛋白酶对ttss分泌蛋白的降解作用,是表型差异存在的主要原因,从而首次系统地阐明popn--突变子在不同培养基中都具有ttss组成型表达的表型,对于深入研究ttss的调控机制具有重要意义。
三角褐指藻d5-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达
杨哲?,,邢来君?,李明春?
生物工程学报 , 2009,
Abstract: d5-脂肪酸脱氢酶是合成花生四烯酸的关键酶。根据已报道的d5-脂肪酸脱氢酶基因设计引物,分别从三角褐指藻基因组dna和总cdna中扩增得到1520bp和1410bp的特异片段,序列分析结果显示,结构基因中含有一个大小为110bp的内含子,这是国内外首次报道。将d5-脂肪酸脱氢酶基因亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pyes2.0中,在大肠杆菌中筛选到含有目的片段的重组质粒pyptd5,用电击转化的方法将重组质粒pyptd5转化到营养缺陷型酿酒酵母菌株invsc1中,在缺省培养基中筛选得到酿酒酵母转化菌株yptd5。在合适的培养条件下,添加外源底物双高g-亚麻酸和诱导物半乳糖,培养并收集菌体。通过脂肪酸甲酯气相色谱分析,表明三角褐指藻d5-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中获得了高效的表达,将双高g-亚麻酸转化为花生四烯酸,其底物转化率达到了45.9%。
利用长引物嵌套式反向PCR方法克隆雅致枝霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列
王德培,孙伟,李明春,,张颖慧,邢来君
生物工程学报 , 2006,
Abstract: 用限制酶EcoRⅠ、KpnⅠ分别对雅致枝霉As32806基因组DNA进行消化,而后在低浓度条件下利用T4DNA连接酶使DNA自身环化。根据已知基因序列,设计一对长度为35nt的长反向引物和两对较短的引物,以基因组连接产物为模板,通过三轮嵌套式PCR反应,获得一长度约为4kb的扩增片段。经序列测定表明得到了Δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列约为1.3kb,初步序列分析显示该序列为一潜在的启动子序列。
碱性pH条件下白念珠菌钙离子通道CCH1和MID1基因对钙内流的影响及Crz1p转录因子对其的调控作用
王慧,徐宁,邢来君,李明春,
生物工程学报 , 2011,
Abstract: 白念珠菌Candida albicans对环境pH的适应能力与其致病性有密切关系,钙信号转导途径介导许多环境压力的应答并伴随胞内钙离子浓度的瞬间变化。通过构建钙通道基因CCH1和MID1的缺失突变株,在碱性pH条件下,研究其对胞内钙内流的影响以及转录因子Crz1p对CCH1和MID1基因的调控作用。使用二步法PCR介导的基因敲除技术构建cch1Δ/Δ和mid1Δ/Δ突变菌株,利用流式细胞术比较野生型和突变型菌株在碱性pH条件刺激下胞内钙的瞬间变化,进一步构建pPHO89-LacZ重组质粒并利用β-半乳糖苷
雅致枝霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达
王德培,李明春,,张颖慧,邢来君
微生物学报 , 2006,
Abstract: 根据真菌Δ6-脂肪酸脱氢酶基因保守的组氨酸Ⅱ区和Ⅲ区附近保守序列设计兼并引物进行RT-PCR,得到雅致枝霉(Thamnidium elegans)As3.2806Δ6-脂肪酸脱氢酶基因459bp部分cDNA序列,然后通过快速扩增cDNA末端技术(RACE)向两端延伸得到1504bp的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因全长cDNA序列。序列分析表明有一个1377bp、编码459个氨基酸的开放阅读框TED6。推测的氨基酸序列与已知其他真菌的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的氨基酸序列比对,具有3个组氨酸保守区、2个疏水区及N末端细胞色素b5融合区。将此编码区序列亚克隆到酿酒酵母缺陷型菌株INVSc1的表达载体pYES2.0中,构建表达载体pYTED6,并在酿酒酵母INVSc1中异源表达。通过气相色谱(GC)和气相色谱/质谱(GC-MS)分析表明,该序列在酿酒酵母中获得表达,产生γ-亚麻酸(GLA)的含量占酵母总脂肪酸的7.5%。证明此序列编码的蛋白能将外加的亚油酸转化为γ-亚麻酸,是一个新的有功能的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(GenBank,AY941161)。
非均匀和均匀布风流化床中颗粒的运动分析
田文栋,小林,黎军,,宏至
工程热物理学报 , 2001,
Abstract: 通过实验得到了非均匀布风和均匀布风流化床内示踪颗粒在床层内的运动轨迹,在此基础上,分析了流化床中示踪颗粒的混合和扩散特性。结果表明配风方式对于示踪颗粒的扩散有很大影响,内旋流流化床具有较好的横向和纵向扩散特性,有利于使流化床内横向不均匀的状况得到改善。
内旋流流化床燃烧稳定性研究
田文栋,小林,黎军,,宏至
工程热物理学报 , 2001,
Abstract: 城市生活垃圾焚烧需要稳定均匀的温度来减少燃烧产生的大气污染物。采用内旋流流化床进行了垃圾焚烧实验,通过改变垃圾处理量、垃圾种类和流化床浓相床区高度,研究了浓相床区温度的稳定性和焚烧炉内温度分布。
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