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香蕉上两种病毒在香蕉分化芽中的PCR检测

植物保护学报 , 2007,
Abstract:
番木瓜体胚间接发生方式的研究
,李华平
园艺学报 , 2007,
Abstract: 为了建立小果型番木瓜(caricapapayal.)高效外源基因遗传转化体系,以小果型番木瓜'美中红'的幼胚(授粉受精后90~120d)为材料,通过组织切片和电镜观察了体胚发生方式。结果表明,培养8~12d,愈伤组织首先发生于幼胚的胚根端;培养26d,整个幼胚的胚轴愈伤化,愈伤组织分为粘性透明和干性两大类,组织切片分为明显的两层,外层疏松易脱落,内层结构紧密;培养38d,淡黄色的体胚前体发生于幼胚的胚芽端。番木瓜体胚的形态各异,大多数是形态正常的体胚,少数体胚的形态发生变异。
转基因番木瓜研究进展
,李华平
中国生物工程杂志 , 2004,
Abstract: 番木瓜环斑病毒(prsv)使热带亚热带的重要水果番木瓜的生产受到严重影响,在众多方法防效不佳的情况下,利用病原获得抗性防治prsv给番木瓜的生产带来了光明。综述了近年来转prsvcp基因番木瓜中影响番木瓜转化因素和转基因番木瓜的抗性因素。转prsv外壳蛋白(cp)基因的番木瓜中多以胚性组织为转化材料,被转化材料的生理状态和基因型,是影响转化效率和转基因植株质量的主要因素。所获得的转基因番木瓜对prsv的抗性在很大程度上依赖于接种prsv与所转化prsvcp基因的序列同源性、转基因拷贝数和所转基因的位置等。
广州辣椒上番茄斑萎病毒属病毒的鉴定
刘勇,李媛媛,吴竹妍,
植物保护学报 , 2010,
Abstract:
香蕉线条病毒MP功能域基因的克隆、原核表达及抗血清制备
陈秀,,阮小蕾,李华平
华南农业大学学报 , 2014, DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.2014.02.009
Abstract: 【目的】制备香蕉线条病毒广东分离物(BSV-GD)MP功能域基因编码蛋白的多克隆抗血清,为BSV基因编码蛋白功能的研究提供条件.【方法】对BSV-GDORF3基因氨基酸序列进行生物信息学分析,得出MP功能域基因序列,克隆该基因并插入载体pET-28b(+)构建原核表达载体,经IPTG诱导表达后,采用超声波裂解法进行蛋白可溶性分析,利用组氨酸标签纯化试剂盒对目的融合蛋白进行纯化和回收,然后以纯化的目的蛋白为抗原免疫健康家兔制备其多克隆抗血清;通过Western-blot分析该抗血清的特异性,间接ELISA法检测该抗血清的效价.【结果和结论】MP功能域基因在ORF3中的序列为61~311aa处,核酸序列长753bp.试验克隆了该基因并成功构建了其原核表达载体pET28b-MP,经IPTG诱导1h后表达了相对分子质量约为30800的融合蛋白6His·MP.可溶性分析表明该融合蛋白以包涵体形式存在,纯化获得了高纯度的目的融合蛋白,以其为抗原成功制备了BSV-GDMP功能域基因编码蛋白的多克隆抗血清;分析表明该抗血清具有很强的特异性,其效价高达204800倍以上.
黄瓜花叶病毒在香蕉不同品种组培过程中的症状和传递规律
Transmission pattern and symptoms of Cucumber mosaic virus n infected differentiated banana shoots of different varieties

孙洁,王婉,,李华平
- , 2016,
Abstract: 以感染黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的不同基因型香蕉分化芽为研究对象,利用肉眼观察、RT-PCR和实时定量荧光PCR方法研究CMV在不同感病香蕉分化芽中的症状及传递规律。结果表明,感染CMV的‘粤优抗一号’、‘威廉斯’、‘大蕉’和‘皇帝蕉’在组培过程的第1代至第12代病害症状均不明显。随着组培继代数增加,不同品种的组培苗中CMV含量变化虽然不同,但均在顶部第1~2叶中含量最高。因此,检测香蕉分化芽中CMV最佳材料为顶部叶片。
To study the Cucumber mosaic virus (CMV) transmission pattern and symptoms,quantitative real-time PCR and RT-PCR assay and visual inspection were performed in differentiated banana shoots of different varieties infected by CMV. The results showed that there were no obvious symptoms of the differentiated banana shoots in different varieties such as ‘Yueyoukang No.1’,‘Williams’,‘Dajiao’ and ‘Huangdijiao’. The concentrations of CMV in the differentiated banana shoots of these varieties were not the same in different generations. However,the CMV concentrations of the top-one or (and) top-two leaves were higher than those in other leaves. Hence,the top leaves of differentiated banana shoots could be collected as samples for virus detection. 
香蕉线条病毒衣壳蛋白功能域基因的原核表达及抗血清制备
陈秀,,阮小蕾,刘福秀,李华平
园艺学报 , 2013,
Abstract: 制备香蕉线条病毒广东分离物(bsv-gd)的抗血清,可为bsv-gd的快速检测和进一步研究bsv编码蛋白的功能提供条件。通过常规分子生物学方法,克隆了bsv-gd衣壳蛋白(coatprotein,cp)功能域基因,构建了该基因的原核表达载体pet28b-cp,并诱导表达了大小约为46.5kd的融合蛋白his-cp。可溶性分析表明该融合蛋白以包涵体形式存在。利用his标签纯化试剂盒对目的蛋白进行纯化、回收,获得了高纯度的融合蛋白。以纯化的融合蛋白为抗原免疫健康大耳白兔,成功制备了bsv-gdcp功能域基因编码蛋白的兔抗血清。western-blotting分析表明该抗血清具有很强的特异性,间接elisa法检测抗血清效价达204800倍以上,对植物材料的合适检测浓度为1︰1600~1︰6400。
黄瓜花叶病毒荧光定量PCR检测方法的建立
孙洁,王婉,周翎,阮小蕾,,李华平
华南农业大学学报 , 2014, DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.2014.02.010
Abstract: 【目的】建立检测香蕉中黄瓜花叶病毒Cucumbermosaicvirus(CMV)的实时荧光定量方法.【方法】根据CMV外壳蛋白(CP)保守序列设计了TaqMan实时荧光定量PCR特异性探针及引物,优化反应体系检测TaqMan探针实时荧光定量方法的灵敏度、特异性和重复性.【结果和结论】该方法检测灵敏度为4.2×102μL-1,比普通PCR高100倍,且与香蕉束顶病毒Bananabunchytopvirus(BBTV)、香蕉线条病毒Bananastreakvirus(BSV)无交叉反应,特异性和重复性都较好.用实时荧光定量PCR检测14份田间香蕉样品有5份样品为阳性,进一步证明建立的实时荧光定量方法可用于香蕉CMV的检测.
中西部地区高温炎热台风引发致洪暴雨

气象 , 2006, DOI: 10.7519/j.issn.1000-0526.2006.10.019
Abstract:
南持续暴雨洪涝灾害严重华北阵雨频繁雨量多气温高——2008年6月——

气象 , 2008, DOI: 10.7519/j.issn.1000-0526.2008.9.016
Abstract:
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