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嗜热真菌Thermomyces lanuginosus热稳定几丁质酶基因的cDNA克隆及表达
,李多川
微生物学报 , 2006,
Abstract: 根据Thermomyces lanuginosus热稳定几丁质酶Chit的N端氨基酸序列和同源保守序列设计简并引物,通过RTPCR及快速扩增cDNA末端(RACE)的方法,克隆了该几丁质酶的编码基因chit,全长cDNA为1500bp,包含一个由442个氨基酸组成的开放阅读框。该基因已在GenBank中注册,登录号为DQ092332。将成熟肽几丁质酶Chit阅读框与酵母表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pPIC9K/chit,转化毕赤酵母GS115,在甲醇的诱导下,成功地分泌出具生物活性的几丁质酶,诱导6d后酶活性达2.261U/mL,酶蛋白表达量为0.6mg/mL。该酶的最适反应温度和pH 值分别为60℃和5.5,该酶在50℃以下稳定;65℃的半衰期为40min。
一株嗜热毛壳菌β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性
楚春雪,李多川,
菌物学报 , 2004,
Abstract: 研究了液体发酵嗜热毛壳菌Chaetomiumthermophile产生的β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性。粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-SepharoseFastFlow阴离子层析、Phenyl-Sepharose疏水层析、SephacrylS-100分子筛层析等步骤后获得凝胶电泳均一的β-葡萄糖苷酶。经12.5%SDS-PAGE和凝胶过滤层析方法分别测得该酶的分子量大小约为78.4kDa和81kDa。该酶反应的最适温度和pH值分别为60℃和4.5-5.0。有较好的酸稳定性和热稳定性。金属离子对β-葡萄糖苷酶的活性影响较大,其中Ca2+对酶有激活作用,而Ag+、Cu2+、Hg2+对酶有显著的抑制作用。该酶对水杨苷具有很强的底物特异性。
单增李斯特氏菌lm319主要毒力基因的时序性表达研究
亢春雨,于宏伟,,贾英民
农业生物技术学报 , 2015,
Abstract: ?单核细胞增生性李斯特氏菌(listeriamoncytogenes)是一种重要的食源性病原菌,由于其具有分布广、耐受力强、高致病力等特点而备受食品安全领域所关注。本研究通过摇瓶培养和检测菌液od600值制作了该病原菌的生长曲线;采用特异引物对单增李斯特菌lm319中27个毒力基因进行了pcr检测;采用实时荧光定量pcr技术(quantitativereal-timepcr,qrt-pcr)对其中的10个毒力基因的表达量进行了12个批次的定量检测。结果表明,lm319在培养2h内处于生长延滞期,培养2~8h为菌体的指数生长期,培养8h菌体增长量达到最高峰,8~18h为菌体生长稳定期,18h后进入衰亡期;对27个毒力基因的pcr检测结果显示,lm319中明确含有23个毒力基因;qrt-pcr定量检测结果显示,其中10个毒力基因在24h内的表达规律相似,毒力基因的表达量在菌体生长的稳定期后期(16~18h)达到高峰,此后表达量逐渐降低,但到衰亡期毒力基因的表达又呈上升趋势。同时发现,10个毒力基因的表达量差距明显且各不相同,其中细胞壁水解酶基因(invasionassociatedprotein,iap)、纤连蛋白结合蛋白基因(fibronectin-bindingprotein,fbp)、己糖磷酸盐转运蛋白基因(hexosephosphatetransporter,hpt)和srna伴侣蛋白基因(hostfactorforrnaphageqβreplicase,hfq)4个基因表达量较高,而肌动蛋白聚集蛋白基因(actinpolymerizingprotein,acta)和溶血素基因(hemolysin,hlya)两个毒力基因的表达量较低。研究表明,单增李斯特菌lm319中主要毒力基因表达量在菌体生长的稳定期后期达到高峰,到衰亡期毒力基因的表达仍然处于相对较高水平。本研究为单增李斯特菌的检测、预防提供了理论依据。
荧光法测定微藻中色氨酸的含量
,卫东,,夏恩琴,周宽波
海洋科学 , 2005,
Abstract: 建立了微藻中色氨酸的荧光分析方法。以NaOH为水解液水解微藻,在激发波长225nm,发射波长350nm处测定色氨酸的荧光强度。方法线性范围0~0.07mg/L,检测限为0.003mg/L,回收率90%~100.1%。此法快速、简便、灵敏度高。
来源黑曲霉WP1的两种植酸酶基因的克隆及序列比较
柯晓静,,于宏伟,贾英民
华北农学报 , 2009, DOI: 10.7668/hbnxb.2009.02.005
Abstract: 为了获得高产植酸酶菌株,利用PCR技术,从黑曲霉WP1中克隆出2种植酸酶基因phyA和phyB,分别命名为phyA1、phyB1.phyA1长1346bp,成熟肽序列不含内含子,共编码448个氨基酸;phyB1基因长1560bp,基因序列含有3段内含子,共编码460个氨基酸.phyA1和phyB1序列同源性很低,只有21.12%.二者都含有1个植酸酶基因保守序列RHGXRXP;但phyA1含2个HD保守序列,phyB1只含有1个.将黑曲霉WP1植酸酶phyA1和phyB1的基因序列在国际基因库中注册,注册号分别为:DQ60711;DQ836360.
植酸酶基因PhyB1的克隆及序列分析
柯晓静,,于宏伟,贾英民
华北农学报 , 2007, DOI: 10.3321/j.issn:1000-7091.2007.02.004
Abstract: 为了进一步研究多种植酸酶之间的相互作用,利用PCR技术,从黑曲霉WP1中克隆出植酸酶PhyB基因,该基因长1560bp,含有3段内含子,共编码460个氨基酸,与已报道的ALKO243的植酸酶Aph基因(GeneBankAcces-sion:L02420)相比较,编码的氨基酸序列同源性为99.13%,因此将其命名为PhyB1。该基因含有植酸酶保守序列“RHGXRXP”和“HD”。黑曲霉WP1植酸酶PhyB1基因序列已在国际基因库中注册,注册号为:DQ836360。
原子力显微镜观测紫外线诱导的K562肿瘤细胞DNA损伤
刘颖,齐浩,广,陈文,
生物技术通报 , 2009,
Abstract: 利用彗星电泳检测出UVB、UVC短时间照射会使肿瘤细胞的DNA发生断裂,而长时间照射之后彗星电泳无法检测到碎片,推测可能是由于DNA分子交联的原因[1],国内外尚无定论。为了更直观的研究这种现象,提取了UVB,UVA照射后K562细胞的DNA,并调节到合适的浓度在原子力显微镜下观测。实验结果表明UVB对K562肿瘤细胞DNA损伤的影响呈现时间/剂量效应,较短时间照射主要产生DNA的链断裂,较长时间辐射则主要产生DNA链的交联。UVC对K562肿瘤细胞DNA的损伤大于UVB。UVC短时照射即可引起DNA的断裂和交联,较长时间辐射主要产生交联和一些断裂;长时间照射不但产生大量交联,同时有大量断裂产生,并发生凝缩和缠绕等结构破坏。
郑州市最严格水资源管理绩效评估体系及应用
,左其亭,,马军霞
南水北调与水利科技 , 2014,
Abstract: 为了解决中国水问题,促进经济社会可持续发展,实施最严格水资源管理制度势在必行,在此背景下,构建最严格水资源管理绩效评估体系显得尤为重要。本文以《最严格水资源考核实施方案》为准则,结合郑州市的具体情况,提出市级地区水资源评估的总体设想,构建了适用于郑州市的最严格水资源管理绩效评估体系,并据此对郑州市的新密市进行了绩效评估,以期为区域最严格水资源管理绩效评估提供参考。
新型轻钢结构加层节点抗震性能试验研究及有限元分析
赵少伟,丁彦,,,
- , 2013,
Abstract: 钢板加固节点是一种抗震性能优越的轻钢结构加层节点.对该类节点进行 拟静力试验及ANSYS有限元分析,研究节点的破坏现象、滞回曲线等抗震性能.研 究结果表明:所建有限元模型可以有效模拟钢板加固节点的抗震性能.建立了钢 板碳纤维加固节点的有限元模型,并对该模型在低周反复荷载作用下的抗震性能 进行非线性有限元全过程分析,分析结果表明:钢板碳纤维加固节点的抗震性能 略优于钢板加固节点,提高程度并不显著.
Purification and properties of a thermostable chitinase from thermophilic fungus Thermomyces lanuginosus
疏绵状嗜热丝孢菌热稳定几丁质酶的纯化及其性质研究

GUO Run-fang,LI Duo-chuan,WANG Rong,
,李多川,王荣

微生物学报 , 2005,
Abstract: A thermostable extracellular chitinase from culture supernatant of a thermophilic fungus Thermomyces lanuginosus was purified to SDS-PAGE homogeneity, by using ammonium sulfate fraction, DEAE-Sepharose Fast flow chromatography, Phenyl-Sepharose Fast Flow chromatography. A molecular mass of the purified enzyme was between 48-49.8 kD determined by SDS-PAGE and gel filtration chromatography. The chitinase exhibited optimum catalytic activity at pH 4.5 and 55 degrees C respectively. It was thermostable at 50 degrees C and retained 24% activity after 20 min at 70 degrees C. The half life time of the enzyme at 65 degrees C was 25 min. Different metal ions showed different effects on the chitinase activity. Ca2+, Ba2+, Na+, K+ enhanced the enzyme activity, whereas Fe2+, Ag+, Hg2+, Cu2+ caused obvious inhibition. The Km and Vmax values of chitinase on colloidal chitin were 9.56 mg/mL and 22.12 micromol/min respectively. The chitinase showed antifungal activity aginst tested fungi to different degree.
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