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一种改进的蛋白质超薄凝胶电泳方法
,张涌?
生物化学与生物物理进展 , 2000,
Abstract: 介绍了一种将聚丙烯酰胺凝胶固定在电泳夹板上的蛋白质电泳方法.通过此方法蛋白质电泳可以在0.4mm厚的聚丙烯酰胺凝胶上进行.实验证明,经此方法处理的玻板结合凝胶非常牢固,在电泳后的所有处理步骤中都不会发生凝胶脱落现象.
中国肝癌病人p53突变体r248w的细胞功能研究
赵 晶?,
西北农林科技大学学报(自然科学版) , 2008,
Abstract: [目的]探索p53基因突变对细胞正常功能的影响,阐明肝癌的发病机制.[方法]利用pcr产物直接测序的方法,对202例中国肝癌患者p53基因的11个外显子进行突变筛查;利用定点突变的方法构建真核表达载体pcmv-r248w,westernblot检测突变体蛋白r248w在p53缺失型h1299细胞中的表达情况;采用双荧光素酶报告基因检测系统和流式细胞仪,研究r248w突变对转录活性及促凋亡能力的影响.[结果]在其中1例样本的7号外显子处筛查到突变形式为cgg→tgg的点突变,使p53蛋白248位的精氨酸(arg)突变为色氨酸(trp),即r248w,突变率为0.495%;在h1299细胞中转染等量的pcmv-p53和pomv-r248w时.野生型p53与突变体r248w的蛋白表达量相当,但r248w的转录活性及促凋亡能力显著低于野生型p53.[结论]r248w突变可能引起p53蛋白构象的改变,从而影响p53的转录活性及促凋亡能力,使细胞的正常生理功能紊乱,导致肿瘤发生.
Ti3Al金属间化合物超塑性的研究进展
刘莹莹,,鸿镇
材料工程 , 2008,
Abstract: 详细的对Ti3Al金属间化合物的超塑性研究进展状况进行了总结和评述.根据现有的研究结果可知,此类合金的最佳超塑性变形温度为940~980℃,最佳超塑性变形的应变速率为10-4~10-3s-1,其最大延伸率可达1500%左右,接近于普通钛合金的超塑性水平.Ti3Al金属间化合物超塑变形的主要机制是晶界滑动,失效的主要原因是空洞的形成和连接.针对已取得的研究成果和在目前研究中仍然存在的问题,提出了一些有关Ti3Al金属间化合物超塑性研究的看法.
人sumo-3基因原核表达及多克隆抗体制备
安宁,杨振,宋振,雷鸣,
中国生物工程杂志 , 2008,
Abstract: 构建人sumo-3基因的原核表达载体pet41a(+)-sumo-3,表达重组gst-sumo-3融合蛋白,制备人sumo-3多克隆抗体。试验结果显示,通过pcr方法从重组质粒peyfp-sumo-3中克隆到的sumo-3n端93个氨基酸的基因序列与ncbi上提供的序列一致,重组质粒pet41a(+)-sumo-3构建成功;重组pet41a(+)-sumo-3在e.coli.bl21(de3)plyss中表达gst-sumo-3融合蛋白,分子量为44.0kda,与预期分子量一致;采用亲和层析纯化融合蛋白gst-sumo-3并免疫家兔,获得人sumo-3抗体;westernblot检测显示该抗体可以特异性识别sumo-3,elisa检测结果成阳性,抗体效价约为1:20000。实验结果为进一步研究人sumo-3及sumo第二类家族的功能提供了有用工具。
GH4133A合金多火次锻造工艺研究
宁永权,,岳太文,鸿镇,艳丽
材料工程 , 2008,
Abstract: 对GH4133A合金进行了多火次热模锻造实验,探索了不同锻造温度和变形量在不同火次变形后的晶粒度、室温拉伸和700℃拉伸性能.结果表明当在1080℃以10%进行多火次锻造时,GH4133A合金晶粒度以及室温拉伸性能随着锻造火次增加而提高,700℃拉伸强度接近;当多火次变形量为30%时,晶粒度、室温拉伸和700℃拉伸强度均是二火次成形最高.以1160℃进行多火次热模锻造后合金的700℃拉伸性能优于以1080℃锻造时.上述实验结果与晶粒度、拉伸变形时晶粒变形方式、每种变形方式下晶粒的参与量和每种变形方式的持续时间有关.
Prokaryotic expression and preparation of polyclonal antibody for human SUMO-3 gene
人SUMO-3基因原核表达及多克隆抗体制备

Ning AN,
安宁
,杨振,宋振,雷鸣,

中国生物工程杂志 , 2008,
Abstract: To construct a prokaryotic expression vector of Human SUMO-3, purify Human SUMO-3 proteins produced by the expression system, and prepare its antiserum. The fragment of human SUMO-3 gene was amplified from pEYPF-SUMO-3 plasmid by PCR. The enzyme digested target fragment was cloned into pET41a(+) clone and expression vector and transfected into E. coli. BL 21 (DE3) plysS, in which SUMO-3 expression was induced by IPTG. After the soluble protein was purified through GST affinity chromatography, processed by identified by SDS-PAGE, a rabbit was immunized with the fusion protein, and the antiserum was obtained. The result of DNA sequence analysis showed that the cloned SUMO-3 gene sequence was completely corresponding to GenBank data. SDS-PAGE and Western blotting showed that the expressed SUMO-3 fusion protein was about 44.0 kDa, mainly existing soluble protein of E. coli. , that could be purified through GST affinity chromatography. The results of ELISA is positive, and Western blotting confirmed that the antiserum reacted specifically to the SUMO-3 protein. A recombinant SUMO-3 protein and the specific polyclonal antibody have been obtained, which provides a basis for establishment of immunoassays of human SUMO-3.
水稻WRKY89中的亮氨酸拉链结构增强蛋白与W盒元件的相互作用
王海华,郝中娜,谢科,,
科学通报 , 2005,
Abstract: WRKY蛋白是一类参与植物生物和非生物胁迫反应、代谢、发育等过程的转录调节因子.水稻WRKY89与其他的WRKY成员同源性较低,推测由263个氨基酸组成,其N端带1个可能的亮氨酸拉链结构.采用pET-29b载体原核表达了OsWRKY89和其3个N端缺失的衍生物,并采用Ni柱的方法对表达的蛋白进行了纯化.凝胶阻滞结果表明,OsWRKY89能与含顺式元件W盒的DNA序列特异结合,而缺失N端亮氨酸拉链的OsWRKY89与该元件的结合能力显著下降.酵母双杂交结果表明,亮氨酸拉链样结构参与OsWRKY89蛋白的同源相互作用.进一步缺失OsWRKY89至部分WRKY结构域导致表达的蛋白完全丧失与上述元件的结合活性,表明WRKY结构域是DNA结合中不可缺少的.这些结果说明亮氨酸拉链结构在蛋白质与蛋白质互作和DNA与蛋白质中起重要作用.
表达Cryptogein基因的烟草抗病性和耐盐性增强
蒋冬花,陈旭君,,
科学通报 , 2004,
Abstract: 隐地蛋白(cryptogein,Crypt)是由隐地疫霉(Phytophthoracryptogea)分泌的一种分子量约为10kD的蛋白类激发子.用农杆菌介导的叶盘转化法获转Crypt(PALCrypt)和CryK13V(CaMV35SCryK13V)基因的烟草植株.接种试验结果表明,T2代转基因烟草株系对黑胫病菌(Phytophthoraparasiticavarnicotiana,Ppn)、赤星病菌(Alternariaalternata)和野火病菌(Pseudomonassyringaepvtabaci)的抗性显著增强.Northern杂交和RT-PCR分析结果表明,低水平的表达转化基因Crypt和CryK13V就足以激活PR-1a和PR-5等防卫反应相关基因的表达;在PALCrypt转化系统中,病原菌Ppn能快速和高水平诱导PR-1a等病程相关基因的表达,表明诱导型PAL启动子对入侵病原菌能及时识别并快速、有效地激活防卫反应,从而赋予转基因植株抵抗病原菌侵染的能力.研究还发现,表达Crypt和CryK13V基因的烟草植株耐盐性比对照明显提高,转化株系中高水平组成型表达PR基因和转录因子可能与耐盐性增强有一定正相关性.上述结果表明,植物对生物和非生物逆境的抗性途径和机制存在着交叉.
热模锻造+直接时效粉末高温合金的强化机制
宁永权,,谢兴华,鸿镇,谭立军,陶宇
金属学报 , 2010, DOI: DOI:10.3724/SP.J.1037.2009.00781
Abstract: 对涡轮盘用镍基粉末高温合金FGH4096进行了热模锻造+直接时效处理,探索细化粉末高温合金毛坯组织的工艺及相关增强机制.结果表明在不降低延伸率的前提下,直接时效处理对于热模锻造后的合金具有明显的强化作用,并且以多方向变形配合直接时效的强化效果最为显著.按多方向热模锻造+直接时效工艺,可使FGH4096合金的组织显著细化,平均晶粒尺寸达6μm,γ'相析出尺寸达80nm.OM,SEM和TEM观察表明,除多方向大变形可直接破碎晶粒、细化晶粒外,反复再结晶也是细化晶粒的有效途径;同时,洁净的再结晶晶界完全取代了原始粉末颗粒边界.直接时效处理后保留了多方向变形产生的位错缠结,并且获得更为细小的γ'相.热模锻造+直接时效处理后合金所表现出来的超高强度主要源自于细晶强化、晶界强化、形变强化和γ'相强化的综合作用.
基于软化机制的TC18钛合金本构关系研究*
梁后权,鸿镇,宁永权,,赵张龙
金属学报 , 2014, DOI: 10.3724/SP.J.1037.2013.00801
Abstract: 通过TC18钛合金热模拟压缩实验,得到不同变形条件下的高温变形真应力-真应变曲线.通过加工硬化和动态软化效应,分析变形参数变化对TC18钛合金应力-应变曲线形态和峰值应力的影响.不同变形条件下,TC18钛合金流变曲线呈现出相似的特征,而峰值应力对变形参数的变化却十分敏感.通过Poliak-Jonas准则,分析了不同条件下TC18钛合金在高温变形过程中的软化机制.相同温度下,动态再结晶机制主要发生在低应变速率下的高温变形过程中,并且软化机制的选择对温度不敏感.基于传统的Arrhenius型方程,针对TC18钛合金热变形过程中不同的软化机制,分别建立动态再结晶和动态回复机制下的本构方程.针对识别出的TC18合金在不同变形条件下的软化机制,通过适用的本构模型来描述TC18合金在应变为0.7时真实应力对变形温度、应变速率的响应过程.以动态再结晶为主要软化机制的变形过程,其变形激活能和应变速率敏感系数远远大于以动态回复为主的过程.
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