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亚洲牛带绦虫TaCRISP基因克隆、表达和序列分析
戴鹏,戴佳琳,黄江,廖兴江,,周灵贵,申萍香
中国公共卫生 , 2009, DOI: 10.11847/zgggws2009-25-04-07
Abstract: ?目的通过筛选亚洲牛带绦虫(Taeniasaginataasiatica)成虫cDNA质粒文库,识别半胱氨酸分泌蛋白(TaCRISP),并进行克隆表达,为进一步研究其功能提供基础依据。方法用生物信息学方法从亚洲牛带绦虫成虫全长cDNA质粒文库中识别TaCRISP的全长编码基因并预测编码蛋白质的各种结构与功能;将其编码区序列克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,测序鉴定重组质粒,之后进行诱导表达,表达产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。结果该基因全长1090bp,编码239个氨基酸,1aa-16aa位为分泌信号肽,理论分子量为26973.8,等电点为5.96。生物信息分析揭示,TaCRISP与中殖孔绦虫CRISP一致性为38%,相似性为54%;所构建的重组体经PCR、双酶切及测序鉴定与目标基因相符。SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中表达成功。结论发现亚洲牛带绦虫TaCRISP基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白。
亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白基因克隆及表达
王杰,戴佳琳,黄江,吴璇,廖兴江,杜武英,
中国公共卫生 , 2009, DOI: 10.11847/zgggws2009-25-04-11
Abstract: ?目的对亚洲牛带绦虫(Taeniasaginataasiatica)成虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4(Actinrelatedprotein2/3complexsubunit4)基因进行克隆、表达和免疫学研究。方法以亚洲牛带绦虫cDNA文库中肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4的已知序列设计合成一对特殊引物,进行PCR技术扩增目的基因,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,在CaCl2制备的感受态大肠埃希菌BL21/DE3中经过异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因表达,表达产物经过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定。由于蛋白在包涵体表达,故通过N-十二烷基肌氨酸钠(SKL)法纯化获得纯化重组蛋白并用蛋白印迹(Western-blotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明,pET-28a(+)-Arp2/3重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明,基因在大肠埃希菌BL21/DE3包涵体中表达,经过包涵体沉淀的溶解、重折叠和离子交换层析方法获得高纯度蛋白。重组蛋白能识别亚洲牛带绦虫患者及牛带绦虫患者血清,表明该蛋白具有免疫反应性。结论成功克隆亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4基因,表达和纯化得到了该基因的重组蛋白并且证明该基因具有免疫反应性,为进一步研究该基因的功能提供条件。
猪带绦虫腺苷酸激酶基因及蛋白结构特性分析
戴佳琳,黄江,廖兴江,周灵贵,申萍香,刘玉江,
中国公共卫生 , 2009, DOI: 10.11847/zgggws2009-25-10-33
Abstract: ?目的分析和预测猪带绦虫腺苷酸激酶(ADK)基因及其编码的蛋白结构和特性。方法利用各种在线生物信息网站及其它分析软件包,分析从猪带绦虫成虫cDNA质粒文库中识别的腺苷酸激酶基因的结构和编码区序列,分析、预测编码的蛋白质的理化特性、抗原表位、翻译后的修饰、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象等。结果该基因全长864bp,编码区为110~758,编码215个氨基酸,为全长基因。理论分子量、等电点分别为23771.4Da和6.86;没有跨膜区;三维结构建模图显示其线性表位的部位。结论应用生物信息方法从猪带绦虫成虫cDNA文库中筛选出了腺苷酸激酶基因的cDNA全长序列并预测得到其结构与功能方面的信息。
亚洲带绦虫膜联蛋白B3基因生物信息学分析
黄映康,戴佳琳,黄江,廖兴江,申萍香,,周灵贵
中国公共卫生 , 2009, DOI: 10.11847/zgggws2009-25-09-40
Abstract: ?目的识别亚洲带绦虫新基因,分析和预测该基因及其编码蛋白的结构和特性,为其生物学功能研究提供依据.方法利用在线生物信息学网站及工具进行序列分析、预测其编码的膜联蛋白B3的理化特性、抗原表位、翻译后的修饰、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象、进化树等.结果该基因全长1176bp,编码区为70~588bp,编码173个氨基酸,为全长基因;无跨膜区;具有多个磷酸化位点和B细胞线性表位;蛋白的理化性质稳定,理论分子量为19339.7;没有质体、线粒体定位序列;氨基酸序列高度保守.结论运用生物信息学方法从亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中识别出了亚洲牛带绦虫成虫膜联蛋白B3基因,并对其所编码的蛋白质的结构与功能进行预测.
亚洲牛带绦虫26kDaGST基因表达及免疫学分析
黄江,胡旭初,徐劲,余新炳,包怀恩,,廖兴江
中国公共卫生 , 2008, DOI: 10.11847/zgggws2008-24-08-37
Abstract: ?目的对亚洲牛带绦虫成虫26kDa谷胱甘肽S-转移酶基因(glutathioneS-transferase,GST)进行克隆、表达和免疫学初步分析研究,为深入研究其生物学功能提供依据。方法将亚洲牛带绦虫成虫26kDaGST克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹(WesternBlotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-30a(+)-TaGST构建成功。SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性;并且能识别感染了亚洲牛带绦虫的猪血清和亚洲牛带绦虫患者血清,表明其具有免疫反应性。结论亚洲牛带绦虫成虫26kDa谷胱甘肽S-转移酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的高效表达。
亚洲牛带绦虫NOMO1基因在原核细胞中表达
廖兴江,戴佳琳,黄江,胡旭初,余新炳,申萍香,周灵贵,
中国公共卫生 , 2009, DOI: 10.11847/zgggws2009-25-05-26
Abstract: ?目的构建亚洲牛带绦虫NOMO1基因原核重组质粒,进行原核表达、纯化及免疫学研究。方法以亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中含NOMO1基因的质粒作为模板,扩增该基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,测序鉴定重组质粒后再行诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,并用蛋白免疫印迹(Western-blotting)分析其免疫反应性。结果成功建构了原核重组质粒pET28a(+)-NOMI1。该基因在大肠埃希菌中以包涵体形式存在,破包涵体后纯化蛋白通过SDS-PAGE鉴定结果表明该基因在大肠埃希菌BL-21/DE3得到高效表达。Westernblotting结果显示,该重组蛋白可被亚洲牛带绦虫、牛带绦虫病人血清识别,具有免疫反应性。结论成功克隆亚洲牛带绦虫NOMO1基因、表达和纯化得到了该基因的重组蛋白并且证明该基因具有免疫反应性,为进一步研究该基因的功能提供条件。
亚洲带绦虫包虫诊断抗原P-29基因克隆表达
周灵贵,戴佳琳,黄江,廖兴江,胡旭初,余新炳,申萍香,
中国公共卫生 , 2009, DOI: 10.11847/zgggws2009-25-09-38
Abstract: ?目的识别亚洲带绦虫包虫诊断抗原P-29(HydatiddiseasediagnosticantigenP-29)的已知序列并行克隆和蛋白表达及免疫学研究.方法利用在线生物信息学工具序列分析后以亚洲带绦虫成虫包虫诊断抗原P-29基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中诱导表达,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析.结果重组体构建成功并以包涵体形式存在,破包涵体纯化蛋白并得到高纯度的蛋白,且该重组蛋白可被亚洲带绦虫及牛带绦虫病人血清识别,表明其具有免疫反应性.结论亚洲带绦虫成虫包虫诊断抗原P-29可在原核表达系统中获得具有免疫活性的高效表达.
亚洲牛带绦虫Spef1-Like基因克隆、表达及纯化
王杰,戴佳琳,黄江,吴璇,廖兴江,申萍香,周灵贵,杜武英,
中国公共卫生 , 2009, DOI: 10.11847/zgggws2009-25-07-30
Abstract: ?目的扩增、克隆和表达亚洲牛带绦虫(Taeniasaginataasiatica)Spef1-Like基因全长cDNA,并进行表达产物的纯化.方法以亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中含Spef1-Like基因的质粒作为模板,扩增该基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,测序鉴定重组质粒,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化.结果PCR,双酶切及DNA测序见过均表明重组质粒pET-28a(+)-Spef1-Like构建成功,该基因在大肠埃希菌中以上清表达,纯化后蛋白通过SDS-PAGE鉴定结果表明该基因在大肠埃希菌BL-21/DE3得到高效表达.结论成功克隆了亚洲牛带绦虫Spef1-Like基因,并表达和纯化了Spef1-Like蛋白,为研究Spef1-Like的功能及其疫苗等研究提供了基础依据.
关于映象的弱半导映象与映象方程

科学通报 , 1990,
Abstract: 一、引言本文引入映象的弱半可微、弱半导映象,并应用于研究带锥的(B)空间中的(包含凝聚映象方程等在内的)一类1集压缩映象方程T(x)—x=θ(1)的正解(集)、相应映象的正固有值、正固有元(集)等问题。引入并使用了这类映象的不动点指数。本文改进、发展了Petryshyn、Amann、Edmunds等、Schaefer等的一系列结果。
第二型泛函方程的近似方法及应用

福州大学学报(自然科学版) , 1963,
Abstract: 在本文中利用条件(Ⅰ1)(Ⅱ1)定义了第二型泛函方程(1)与(2)之间的“近似”,讨论了如下的两个问题:1~0方程(1)与(2)之间可解性的关系,2~0方程(1)的近似解对精确解的收敛性及收敛速率。在文中还建立了所得理论的一些应用。
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