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嗜热厌氧产乙醇杆菌乙醇代谢途径的初步研究
蒋宇,蔚蓝
南京师范大学学报(自然科学版) , 2005,
Abstract: 以乙醇产量和细胞密度的提高为目标,从碳源和氮源入手,对嗜热厌氧产乙醇杆菌thermoanaerobact-erethanolicusjw200的培养基作了初步优化以提高乙醇代谢途径中的关键酶的得率,便于提纯.葡萄糖浓度的提高对乙醇的产生有明显的诱导作用,但当葡萄糖浓度高于2%,乙醇产量反而下降.酵母粉对乙醇产量没有促进作用,单纯提高酵母粉浓度对细胞密度无显著影响,而同时提高葡萄糖和酵母粉浓度至2.0%,od600最高可达2.0.2%葡萄糖,0.5%酵母粉对单位细胞乙醇产量的诱导效果最佳.t.etha
草菇cdna削减文库的构建
李迅,蔚蓝
南京师范大学学报(自然科学版) , 2005,
Abstract: 介绍一种改进的利用差异杂交和定向插入构建全长cdna削减文库的方法.分别以诱导和非诱导条件培养草菇菌丝,两者都提取总rna并采用polyattractmrnaisolationsystemiii试剂盒快速提取mrna,由powerscripttmreversetranscriptase将诱导菌丝提取的mrna进一步逆转录成cdna第一链,用得到的cdna第一链和非诱导菌丝提取的mrna进行杂交,将未杂交上的cdna第一链洗脱浓缩后,用smarttmcdnalibraryconstructio
海栖热袍菌鞘的提纯及其成分和敏感性
周庆,蔚蓝
南京师范大学学报(自然科学版) , 2008,
Abstract: 海栖热袍菌(thermotogamaritimams8)是一种极端嗜热厌氧菌,细胞始终被一种鞘结构所包围,并且鞘在细胞两端呈现气囊状.通过膜截留法、透析法和等密度梯度离心法对鞘进行提纯,其中密度梯度离心法提纯的效果较理想.通过tlc分析,鞘由糖、蛋白、脂类组成,偏向膜的性质.通过对鞘的敏感性研究,发现蛋白酶k可以帮助鞘形成孔洞,并且仍可保留细胞的完整性,这可能有助于进一步促进t.maritimams8基因转化工作的发展.
纤维素乙醇高温发酵的研究进展与展望
乐易林?,蔚蓝
生物工程学报 , 2013,
Abstract: 利用高温细菌发酵,纤维素乙醇生产有望实现“生物质降解-乙醇发酵-乙醇蒸馏”过程的同步化,从而最大限度地降低纤维素乙醇的生产成本;这是一个目标更高、道路更远、科学性更强的可再生能源发展策略。纤维素乙醇高温发酵研究已经取得了重要进展,目前面临的主要挑战包括发酵乙醇的高温细菌的遗传转化系统不够稳定、缺少内源的高活性和耐热性纤维素酶,以及乙醇代谢调控机理有待进一步解析。这些科技难题将会在dna生物合成和进化技术、细胞生物学技术,以及合成生物学技术的发展中得到解决。
降解结晶纤维素极耐热葡聚糖酶重组菌的构建
李相前,蔚蓝,*
南京林业大学学报(自然科学版) , 2006, DOI: 10.3969/j.jssn.1000-2006.2006.03.007
Abstract: <正>运用产业组织理论、经济学原理和企业管理理论研究了林纸一体化的动力机制模型和运行机理,并对其动因机制、产业组织机制和目标机制进行了分析。从而为促进我国林纸一体化进程,提高林纸一体化组织的生命力和竞争力提供了理论指导。
草菇胞外高丰度蛋白质的分离测序及cdna片段克隆
罗楚平,蔚蓝
南京师范大学学报(自然科学版) , 2005,
Abstract: 经过柱层析,从以稻草粉为基质培养的草菇(volvariellavolvacea)摇瓶发酵液中纯化了hep1(highexpressionalprotein1)和hep2(highexpressionalprotein2)两个在胞外高丰度存在的蛋白质.sds-page电泳和分子筛层析的结果表明hep1和hep2的相对分子质量分别是52.6×103和26.2×103,且都是单亚基.其中hep1经过酶解印迹后对肽段n端前15个氨基酸进行测序.根据测序结果设计简并引物,pcr扩增到一条长约750
极耐热内切葡聚糖酶cel12b的基因克隆、表达和酶学性质的研究
李相前,蔚蓝
南京师范大学学报(自然科学版) , 2006,
Abstract: 极耐热酶在工业生产中有可观的潜在用途,为此从极端嗜热厌氧细菌海栖热袍菌中通过pcr方法克隆出cel12b基因,构建重组表达质粒pet-20b-cel12b,转化至大肠杆菌jm109(de3)诱导表达后,获得极耐热重组内切葡聚糖酶.经过热处理和组氨酸亲和层析柱纯化,获得电泳纯单一条带,酶学性质测定表明:最适作用ph为6.0,最适作用温度90℃,在ph5.3~6.5之间酶活力稳定,90℃半衰期70min.
产结晶纤维素酶的嗜热菌鉴定及其酶学性质
吴窈画,蔚蓝
南京师范大学学报(自然科学版) , 2007,
Abstract: 从云南腾冲热海温泉采集的样品中,分离出一株产结晶纤维素酶的嗜热菌tc-1.该菌株呈杆状,革兰氏阴性,生理生化特征分析和16srdna序列同源性比对表明它属于亚栖热菌属meiothermus.结晶纤维素、木聚糖和葡萄糖可以诱导该菌产生结晶纤维素酶,其中结晶纤维素诱导的酶活力最高.对其产生的结晶纤维素酶进行了初步纯化与酶学性质研究,该酶的最适反应温度为70℃,最适ph为6.0,在50℃~70℃和ph5.5~6.5之间酶活力相对稳定.
表达载体phsh对大肠杆菌热休克系统中负调控机制的影响
吴华伟,蔚蓝
中国生物工程杂志 , 2009,
Abstract: phsh是一种由σ32识别和启动外源基因表达的新型高效的大肠杆菌表达载体。正常e.coli细胞在热激诱导条件下,σ32的浓度在5min内到达高峰,随后被3个负调控蛋白dnak、dnaj、grpe结合导致失活或降解,整个热休克反应持续约12min。在携带有外源基因的高拷贝phsh的e.coli细胞中,外源基因却能持续高效表达4~10h,这一现象表明了此时细胞中的σ32比没有携带质粒的细胞内σ32的浓度要高。σ32浓度的增高有可能是由于3个负调控蛋白dnak、dnaj、grpe在细胞内的含量比正常情况下降低的结果。为了验证这一推测,从e.coli中克隆了dnak、dnaj、grpe的编码基因,表达并初步纯化了其重组蛋白以作分子标记,采用双向电泳技术,分析携带质粒(phsh+)和不携带质粒的e.coli(phsh-)细胞在热休克后胞内蛋白质组的差异。该项实验通过与检索到的标准的e.coli蛋白质组图谱进行比较鉴别出的两个蛋白dnak、grpe,并通过对比目标点的大小和深浅发现phsh+中的dnak均少于phsh─中的目标蛋白,所得结果与上述假设一致。
海栖热袍菌胞外α-淀粉酶在E.coli中的高效表达
王希菊,蒋宇,蔚蓝
微生物学通报 , 2005,
Abstract: 为解决密码子偏好性差异造成的表达水平低下问题,采取了3种手段提高海栖热袍菌胞外α-淀粉酶在E.coli中的表达水平。用PCR方法从海栖热袍菌(Therm otoga maritima)基因组DNA中扩增出胞外α-淀粉酶A的完整基因amyA,插入表达载体pET-20(b)中构建成质粒pET-amyA;运用基因工程手段将amyA基因富含稀有密码子的信号肽进行切除,将不含信号肽的amyAⅠ基因插入pET-20(b)中构建成质粒pET-amyA
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