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双启动子对重组溶源性枯草杆菌中外源蛋白表达的增强作用
刘刚* 张燕
生物工程学报 , 2006,
Abstract: 探讨了双启动子对基于溶源性噬菌体构建的重组枯草杆菌中外源蛋白表达的影响。分别将不含或含有本身启动子的α-淀粉酶基因(来源于bacillusamyloliquefaciens)和青霉素酰化酶基因(来源于bacillusmegaterium)克隆到溶源性枯草杆菌中,得到重组菌b.subtilisamy1,b.subtilisamy2,b.subtilispa1以及b.subtilispa2。由于同源重组,所克隆的片段整合到溶源性枯草杆菌中的噬菌体基因组上,并处于噬菌体强启动子的下游。在重组菌amy1和pa1中,在热诱导的情况下外源基因的转录只受到噬菌体启动子的作用,而在重组菌amy2和pa2中,在热诱导下外源基因的转录同时受到噬菌体启动子和基因本身所带启动子的作用。双启动子的应用使重组α-淀粉酶的表达量提高了133%,使重组青霉素酰化酶的表达量提高了113%。
耐高温α-淀粉酶在溶源性枯草杆菌表达系统中的高效表达
刘刚,,余少文
应用与环境生物学报 , 2005,
Abstract: 摘要构建了高效表达耐高温α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌表达系统,并研究了该表达系统的主要特点.通过pcr扩增由地衣芽孢杆菌的基因组dna分离高温淀粉酶基因后,将其克隆到质粒psg703中.然后用psg703质粒转化含温和性噬菌体φ105mu331的枯草芽孢杆菌,通过同源重组使高温淀粉酶基因插入到溶源性枯草芽孢杆菌的染色体上,并处于φ105mu331的强启动子下游.由于高温淀粉酶基因处于噬菌体的强启动子下游,在热诱导后可以实现高温淀粉酶的高效表达,诱导后8h内分泌到培养液中的高温淀粉酶活性可以达到9.58×103u/ml.本文构建的重组高温淀粉酶表达系统具有稳定、高效和杂蛋白分泌少的特点.图5参16
青霉素g酰化酶在重组溶源性枯草杆菌中的分泌型表达
刘刚,张燕,邓旭,
中国生物工程杂志 , 2006,
Abstract: 采用合适的引物从巨大芽孢杆菌的基因组dna中分离到了不含启动子的pga和含有本身启动子的pga(pgapb),并分别将其克隆到表达载体psg703中。利用表达载体和溶源性枯草杆菌噬菌体f105mu331之间的同源重组而使所克隆的基因整合到溶源性枯草杆菌的染色体上,得到重组菌株b.subtilispa1(含pga)和b.subtilispa2(含pgapb)。在重组菌株中外源基因处于一个可热诱导的噬菌体强启动子的下游。所构建的重组菌株可以高效地合成并分泌青霉素g酰化酶pga。由于pga自身启动子的作用,重组菌株b.subtilispa2合成pga的能力高于b.subtilispa1。在50℃下诱导3min为最佳的诱导条件。在培养基中添加苯乙酸降低了重组pga的表达效率,而葡萄糖对重组pga的表达也具有抑制作用。采用ph-stat的补料策略,在20l发酵罐中进行流加发酵时重组菌株b.subtilispa2发酵上清液中pga的活性达到18.28u/ml。
碱性纤维素酶革兰氏阴性菌株筛选及酶学性质研究*
刘森林,,刘刚,余少文
微生物学通报 , 2005,
Abstract: 用CMC平板筛选方法,从造纸厂碱性淤泥中获得透明圈直径大于30mm的产碱性纤维素酶革兰氏阴性菌H8005。液体摇瓶培养产生碱性CMC酶活力高达4.2 IU/mL。酶学性质初步研究显示,H8005产生的CMC酶反应的pH值以8.0左右为适;在碱性条件下具有较高的酶活和一定的稳定性;反应温度以55℃左右为宜;且具有较好的温度稳定性。Mn2+与Fe3+对酶反应有促进作用,Cu2+和Pb2+对酶反应有抑制作用。该菌产生的纤维素
美洲大蠊变应原CrPI的表达、纯化与免疫学特性鉴定
高波,刘志刚,,徐宏,罗时文,赖仞
昆虫学报 , 2005,
Abstract: 以阳性噬菌体克隆为模板,通过PCR扩增出目的基因片段并克隆入T载体,经测序证实为美洲大蠊Periplanetaamericana变应原CrPI后,将该基因亚克隆入表达载体pGEX-5X-1。美洲大蠊变应原CrPI在大肠杆菌中得到高效表达,但主要以包涵体形式存在于沉淀中。目的蛋白溶于6mol/L盐酸胍并经稀释复性后,经GlutathioneSepharoseTM4B亲和层析,纯度达90%以上。以蟑螂过敏病人血清进行免疫印迹检测,结果显示重组变应原具有良好的IgE结合活性。
粉尘螨Ⅰ类变应原(DerfⅠ)的克隆表达、纯化及免疫学特性
朱健琦,刘志刚,高波,吉坤美,
昆虫学报 , 2006,
Abstract: 粉尘螨Ⅰ类变应原(DerfⅠ)是粉尘螨Dermatophagoidesfarinae主要变应原,可引发Ⅰ型变态反应。挑取纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR方法有效地扩增出DerfⅠ片段,产物连接入T载体(pMD18)。经扩增后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET24a表达载体上,得到重组质粒pET24a-DerfⅠ,工程菌经IPTG诱导培养,高效表达出DerfⅠ蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在。表达产物经亲和层析纯化,用Westernblot及ELISA方法检测免疫学活性,结果表明目的蛋白具有良好的免疫原性。
栝楼组织培养和植株再生研究
佟宏霞,李喜文,
中国中药杂志 , 1996,
Abstract: 采用植物组织培养技术进行栝楼试管苗快速繁殖,以药用植物栝楼的腋芽为外植体.在改良的MS培养基上进行丛生芽诱导、继代扩增和无根试管苗生根,可获得大量再生植株。
银杏无性繁殖位置效应的研究
世岩,胡玉芹,全盛,张锐
植物科学学报 , 1998,
Abstract: ?对银杏无性繁殖的位置效应进行了研究。方差分析结果表明,位置效应在无性繁殖过程中能保持稳定,在品种之间有一定差异。随母树及接穗年龄的增长,位置效应越明显。不同无性繁殖方法有相似的位置效应,并具有显著的重现性。在自然状态下,当年生枝条生长的异质性可分为3个枝段。从嫁接到大量结实后,位置效应可经过强一弱一强阶段。采用基生复干作接穗或插条,或用修剪、复壮和扶梢等方法可以控制或消除位置效应,而且效果明显。
转移印花增稠剂的流变性与微观形貌
李青,赛男,铁玲,陈国强
纺织学报 , 2015,
Abstract: 以转移印花纸涂层改性用增稠剂高取代羟丙基纤维素(H-HPC)和羧甲基纤维素钠(CMC)为研究对象,采用稳态剪切和频率扫描相结合的方法研究了H-HPC、CMC溶液的流变性及其共混溶液在不同环境中的相容性,并利用光学和原子力显微镜对H-HPC、CMC和糊料膜的微观形貌进行观测。研究表明:CMC的结构粘度高于H-HPC并体现出更明显的假塑性和触变性;随着H-HPC或CMC含量的增加,溶液的弹性增强且粘性减弱;酸性、弱碱性以及尿素对H-HPC/CMC溶液的表观粘度和黏弹性影响不大;在80℃以上干燥时,可获得H-HPC和CMC共混均匀且表面平整的糊料膜。
转MT-like基因衣藻的重金属结合能力与抗性特征分析
胡章立,,吴玉荷,涂欢
湖泊科学 , 2002, DOI: 10.18307/2002.0309
Abstract: 通过对转MT-like基因衣藻和其野生品系的比较分析,发现转基因藻株对重金属镉和铜的结合能力及抗性均有大幅提高.在重金属结合能力方面,低浓度(5~10μmol/L)的镉溶液中,转基因藻重金属结合量是野生株的1.5倍左右,而相对高浓度(30~50μmol/L)的镉溶液中,由于重金属对藻细胞的毒害作用,使两者的差异不明显.在重金属铜和镉的抗性方面,转基因藻表现出明显高于野生藻株的抗性特征.用转基因藻去处理含铜的工业废水,结果发现转基因藻的处理效率可以提高10%以上.这说明DNA重组技术对提高藻类的废水处理效率方面具有较大的潜力.
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