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次级淋巴趋化因子SLC的克隆及其在原核系统中的表达
王东宁,李明峰,曾而良,张惟杰,吴祥甫
生物工程学报 , 2001,
Abstract: 以中国人的淋巴组织为材料抽提总RNA,用RTPCR的方法扩增了次级淋巴组织趋化因子(Secondary lymphoid\|tissue chemokine,SLC)的成熟肽基因。序列分析表明,我们克隆的SLC基因与文献报道的仅有一个核苷酸的差异,且并不影响氨基酸的编码。将SLC的cDNA插入含T7启动子的表达载体pET28a(+)中构建重组质粒pET-SLC,转化大肠杆菌BL21(DE3)筛选表达菌株。表达菌株经1mmol/L IPTG诱导表达3~5h后,超声破菌,离心后将上清进行SDS-PAGE,可以看到在18kD左右处有明显的表达条带。用Ni2+亲和层析柱纯化表达产物,纯度达到90%以上。
河流弧菌对牙鲆表皮粘液的趋化作用
邹文政?,纪荣兴?,义家波?,鄢庆枇?
水产学报 , 2009, DOI: 10.3724/SP.J.00001
Abstract: 病原菌对粘液的趋化作用在其对粘液层定植过程中起着重要作用,趋化作用是病原菌的毒力机制之一。为了解病原性河流弧菌对牙鲆表皮粘液的趋化作用,本文采用改良的毛细管法研究了细菌浓度、孵育时间、孵育温度、ph、nacl浓度、碳水化合物等对河流弧菌趋化作用的影响。试验结果表明,在较低浓度下,河流弧菌对牙鲆表皮粘液的趋化量随着菌浓度的升高而增大;在室温下河流弧菌的趋化量随着孵育时间的延长而增加,60min趋于饱和;孵育温度在4~15℃范围内趋化作用随温度升高而增强,15℃时达最大值;ph为8时细菌的趋化性最强;nacl浓度超过0.8%,河流弧菌的趋化性随着浓度升高而显著减弱(p<0.05);8种碳水化合物中甘露醇、乳糖、甘露糖能够极显著地促进河流弧菌对牙鲆表皮粘液的趋化作用(p<0.01)。以上结果说明,牙鲆表皮粘液对河流弧菌有较强的趋化作用,该趋化作用受环境因子的影响较大;本文所揭示的河流弧菌趋化特性将对养殖牙鲆疾病防治提供有价值的参考。
次级淋巴趋化因子slc的克隆及其在原核系统中的表达
王东宁?? 李明峰** 曾而良 张惟杰 吴祥甫*
生物工程学报 , 2001,
Abstract: 以中国人的淋巴组织为材料抽提总rna,用rtpcr的方法扩增了次级淋巴组织趋化因子(secondarylymphoid\|tissuechemokine,slc)的成熟肽基因。序列分析表明,我们克隆的slc基因与文献报道的仅有一个核苷酸的差异,且并不影响氨基酸的编码。将slc的cdna插入含t7启动子的表达载体pet28a(+)中构建重组质粒pet-slc,转化大肠杆菌bl21(de3)筛选表达菌株。表达菌株经1mmol/liptg诱导表达3~5h后,超声破菌,离心后将上清进行sds-page,可以看到在18kd左右处有明显的表达条带。用ni2+亲和层析柱纯化表达产物,纯度达到90%以上。
趋磁细菌磁小体研究进展*
林巍,田兰香,潘永信
微生物学通报 , 2006,
Abstract: 趋磁细菌能在细胞内形成由膜包裹的纳米级单畴磁性颗粒——磁小体。磁小体的形成是受生物严格控制的矿化过程,包括铁离子的吸收、转运和结晶成核等。磁小体膜在磁铁矿(Fe3O4)晶体的形成中起着重要的作用。主要介绍近年来关于磁小体形成过程和参与这一过程的蛋白质等方面的一些重要研究进展。
趋磁细菌磁小体的生物矿化作用和磁学性质研究进展
潘永信,邓成龙,刘青松,N.,Petersen,朱日祥
科学通报 , 2004,
Abstract: 趋磁细菌磁小体研究是揭示生物矿化作用和探索生物活动与地磁场之间联系的重要研究内容。细菌成因的磁铁矿颗粒也是部分湖泊和海洋沉积物磁性的主要载体。本文将在介绍趋磁细菌基础上,重点评述磁小体形成过程研究、磁测量技术、沉积物中化石磁小体的识别方法、环境指示意义等方面的新进展,并简要展望未来磁小体研究及其应用前景。
小鼠趋化性细胞因子MIP-2对胸腺细胞亚群的趋化作用分析
龚顺友,高凌,钱晓萍,田甜,陈慰峰
科学通报 , 2001,
Abstract: 经RT-PCR证实,趋化性细胞因子MIP-2(巨噬细胞炎症蛋白2)不仅表达于小鼠腹腔巨噬细胞,亦表达于新鲜培养的小鼠胸腺基质细胞,且小鼠DN,DP,CD4SP和CD8SP4个胸腺细胞亚群也不同程度表达其特异受体CXCR2.通过Boyden小室趋化实验证实,重组小鼠MIP-2对胸腺细胞4个主要亚群有不同强度的趋化作用,主要趋化DP和SP胸腺细胞亚群,从而报道了MIP-2参与诱导胸腺细胞发育过程中的定向迁移.
凤眼莲根分泌物氨基酸组分对根际肠杆菌属f2细菌的趋化作用
赵大君,郑师章
应用生态学报 , 1996,
Abstract: 凤眼莲(eichhorniacrassipes)的根分泌物中含有met等多种氨基酸,其中met、gaba、gly、ala、asp、ser、val和leu(10-7~10-2mol·l-1)均对凤眼莲的根际肠杆菌属f2(enterobactersp.f2)细菌有强烈的正趋化作用;glu、thr和his(10-7~10-3mol·l-1)也对该菌有一定的正趋化作用;而lys、cys、arg、tyr、pro、asn、gln、ile、phe和typ则对该菌表现出一定的负趋化作用.对细菌的正趋化作用存在一个趋化物的最适浓度范围.具有正趋化作用的氨基酸在凤眼莲根际的浓度都较高,而具有负趋化作用的浓度则较低,这正是凤眼莲与该根际细菌结合为根际微生态系统的原因之一.
细胞内外环境中凝溶胶蛋白水平对中性粒细胞趋化功能的影响
王 颖,孙 妮,刘书婷,王寿勇
重庆医科大学学报 , 2015,
Abstract: 目的:研究细胞内外环境中凝溶胶蛋白水平变化对中性粒细胞(polymorphonuclearneutrophil,PMN)趋化功能的影响。方法:成年SD大鼠,麻醉后采集血液标本,分离PMN,制成1×107个/ml悬液。在Transwell细胞培养系统中进行趋化实验,分别在上、下室培养基中加入重组凝溶胶蛋白,或者采用电穿孔方法向PMN中分别转入凝溶胶蛋白及其抗体,观察PMN趋化功能的变化。结果:在Transwell上、下室加入凝溶胶蛋白,以及向PMN中转入凝溶胶蛋白,趋化至下室的PMN数量和趋化指数均没有明显改变(P>0.05);向PMN中转入凝溶胶蛋白抗体后,趋化至下室的PMN数量减少,趋化指数降低(P<0.05)。结论:细胞外凝溶胶蛋白水平改变,或向细胞内导入外源性凝溶胶蛋白,均不能影响PMN的趋化能力,但向细胞内导入凝溶胶蛋白抗体,可以抑制PMN的趋化功能。
人牙龈干细胞的分离鉴定及基质细胞衍生因子-1对其趋化效应的研究
杜令倩,杨丕山,葛少华
华西口腔医学杂志 , 2015, DOI: 10.7518/hxkq.2015.03.005
Abstract: 目的研究基质细胞衍生因子-1(SDF-1)受体CXCR4在人牙龈干细胞(GMSCs)上的表达及SDF-1对人GMSCs的趋化效应。方法通过有限稀释法分离并培养人GMSCs,检测其表面干细胞标志物的表达情况,测试其克隆形成率及多向分化能力,利用免疫荧光染色法检测人GMSCs上SDF-1受体CXCR4的表达,用Transwell细胞培养室检测不同质量浓度SDF-1对人GMSCs的趋化反应,光镜下计数迁移至滤膜下侧面的不同视野的细胞数。结果人GMSCs具有较高的自我更新能力,在体外呈克隆状生长,表达间充质干细胞表面标志物CD44、CD73、CD90、CD105和CD166,而造血干细胞表面标志物CD14、CD34和CD45的表达为阴性。体外诱导培养的人GMSCs能够向成骨细胞及成脂细胞分化,其克隆形成率为21.4%±2.8%。免疫荧光染色显示,人GMSCs表达SDF-1受体CXCR4。SDF-1的质量浓度为100、200ng·mL-1时,Transwell细胞培养室中迁移的细胞数目(每高倍视野分别为189.3±4.4和164.6±4.9)显著多于空白对照组(每高倍视野47.8±2.5)(P<0.01);使用CXCR4中和抗体处理后,人GMSCs的迁移效应明显受到抑制(每高倍视野降低为29.0±2.4,P<0.01)。结论人GMSCs表达趋化因子SDF-1受体CXCR4,SDF-1对人GMSCs有趋化效应,这种趋化效应可能是通过其特异性受体CXCR4介导的。
人牙周膜干细胞的分离鉴定及骨形态发生蛋白-2对其趋化效应的研究
杜令倩,杨丕山,赵宁,葛少华
华西口腔医学杂志 , 2012, DOI: 10.3969/j.issn.1000-1182.2012.01.003
Abstract: 目的研究人牙周膜干细胞(PDLSCs)对骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的趋化反应。方法通过有限稀释法分离、培养人PDLSCs,利用免疫荧光染色检测人PDLSCs波形丝蛋白及干细胞表面标志物STRO-1的表达,检测人PDLSCs多向分化能力,通过克隆形成实验和5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)共培养的方法检测其干细胞特性。利用24孔的Transwell细胞培养室来检测人PDLSCs对BMP-2的趋化反应,光镜下计迁移至滤膜下侧面的不同视野的细胞数。结果人PDLSCs抗波形丝蛋白染色阳性,表达干细胞表面标志物STRO-1,体外诱导培养的人PDLSCs能够向成骨细胞和成脂细胞分化,具有较高的自我更新能力,并在体外呈克隆状生长。在100、200ng·mL-1BMP-2实验组,Transwell细胞培养室中迁移的细胞数目显著多于空白对照组(P<0.01)。结论BMP-2对人PDLSCs有趋化效应。
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