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Strategies for Optimizing Pichia pastoris Expression System
巴斯德毕赤酵母表达系统优化策略

李洪钊,李亮助,孙强明,冮宏映
微生物学报 , 2003,
Abstract: 巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris,Pp)表达系统是目前分子生物学领域中用于表达重组蛋白的标准工具之一。Pp的如下优点是促成此表达系统在近十几年里迅速发展和被广泛应用的重要原因 :Pp为单细胞真核生物 ,生长快 ,易于分子遗传学操作 ;Pp的醇氧化酶 1 (AlcoholOxidase 1 ,AOX 1 )基因的启动子具有强诱导性和强启动性 ,适于外源基因的高水平诱导表达 ;Pp具有强烈的好氧生长偏爱性 ,可进行细胞高密度培养 ,利于大规模工业化生产 ;Pp可高水平分泌表达外源蛋白 ,纯化方便 ;Pp具有真核细胞的翻译后…
剑麻遗传转化体系的建立与优化
丁静,徐立,杜中军,李志英
热带农业科学 , 2011,
Abstract: 以剑麻无菌苗叶片为试材,研究了潮霉素(Hyg)、菌液浓度、侵染时间、乙酰丁香酮(As)及羧苄青霉素(Car)等因素对剑麻遗传转化的影响。结果表明,剑麻最适遗传转化体系为:Hyg选择浓度为25 mg/L,OD600=0.6左右的农杆菌菌液,侵染时间为10~15 min,As浓度为200 μmol/L,Car浓度为400 mg/L。
影响谷子愈伤组织基因枪转化的因素
刁现民,陈振玲,段胜军,刘玉乐,赵连元,孙敬三
华北农学报 , 1999, DOI: 10.3321/j.issn:1000-7091.1999.03.007
Abstract: 通过Gus基因在谷子胚性愈伤组织中的瞬时表达检测,分析了影响谷子愈伤组织基因枪转化效率的几个因素。钨粉的包被质粒DNA用量以3μg/mg钨粉,CaCl2浓度1.5mol/L,亚精胺浓度40mmol/L为最佳,过高的DNA、CaCl2和亚精胺加入量均显着降低转化率;JQ700基因枪样品室高度7cm,轰击速度400~450m/s转化,较其它速度和样品室高度下转化Gus基因表达率高;每次转化的愈伤组织用量对转化效率也有影响,以1~2gGus基因表达斑最多;玉米ubiquitin启动子较CaMV35S启动子的瞬时表达显着增强。
蜡状芽孢杆菌磷脂酶c基因在大肠杆菌中的异源表达
刘菲菲,张梁,顾正华,丁重阳,石贵阳
食品科学 , 2013,
Abstract: ?利用磷脂酶c能够分解卵黄中的卵磷脂而在卵黄lb琼脂平板上产生乳白色晕圈,从本实验室微生物菌种库600株细菌中筛选出一株高产磷脂酶c(plc)蜡状芽孢杆菌bacilluscereus12,以其染色体为模板扩增得到磷脂酰胆碱特异性磷脂酶c(pc-plc)编码基因pcplc1,构建重组表达质粒pet28a(+)-pcplc1,并将重组质粒转入受体菌e.colibl21(de3)中,用异丙基硫代-β-d-半乳糖苷(iptg)进行诱导表达。sds-page分析显示:重组蛋白以可溶性蛋白的形式存在于细胞破碎上清,分子质量约33kd,与预期蛋白大小一致。重组蛋白在硼砂卵黄平板上显现明显的乳白色晕圈,证明重组蛋白具有磷脂酶c活性,重组大肠杆菌构建成功。通过改变培养温度、iptg诱导剂浓度及诱导时间等单因素试验初步优化得到摇瓶培养最佳诱导表达条件为:转接量4%、最佳诱导时机1.5h、最佳iptg终浓度为0.2mmol/l,25℃诱导培养4h,最佳诱导条件下重组蛋白全部以可溶性蛋白形式存在,破碎上清酶活力达到(30.24±0.18)u/ml。
大规模est序列测定中的条件优化
张新叶,黄敏仁*,王明庥
南京林业大学学报(自然科学版) , 2005, DOI: 10.3969/j.jssn.1000-2006.2005.03.025
Abstract: <正>连续3年调查发生慢性枯萎病不同发病程度的毛竹,进行了病原的分离、纯化及鉴定。结果表明,毛竹慢性枯萎病的病原菌是一种粘帚霉(gliocladiumsp.)。该茵初生分生孢子梗轮枝状,长96~128,um,顶端轮生4~5个细瓶形小梗,轮生小梗长约19.2~24μm;次生分生孢子梗青霉状,长64~128μm,瓶梗大小(4.0~4.8)μm×(6.4~9.6)肛m;分生孢子大小(2.4~6.2)fmx(1.9~3.2)μm。
运用均匀设计法优化rpa(k)在原核系统中的表达条件
罗惠霞,李敏,王玉炯,马春骥
中国生物工程杂志 , 2007,
Abstract: 运用均匀设计法对影响rpa(k)在大肠杆菌中表达的因素进行了优化设计,摸索出了对表达产物进行诱导表达的最佳优化表达条件。结果如下:溶解氧为90%,iptg诱导时间为5.3h、iptg终浓度为0.1mmol/l、培养基为hd、ph值为6.0、诱导温度为25?c。目的蛋白平均密度从0.16提高到0.48,是优化前的3倍。
乳糖诱导甜蛋白monellin在大肠杆菌中的表达
杨书慧,赵胜军,刘军,闫达中,易丹
中国生物工程杂志 , 2008,
Abstract: 根据已报道的单链monellin甜蛋白的氨基酸序列,按大肠杆菌基因偏爱密码子,设计和人工合成了单链monellin基因。将单链monellin基因克隆到大肠杆菌表达载体pet-28a中,构建了重组表达载体pet28a-mon,转化大肠杆菌bl21(de3),得到表达monellin的大肠杆菌工程菌株。借助sds-page分析方法,研究了乳糖代替iptg诱导大肠杆菌表达甜蛋白monellin。通过对乳糖作为诱导剂表达条件进行优化,monellin的表达量可占细胞总蛋白的33.09%,与iptg诱导表达量接近。本研究结果为乳糖作为诱导剂应用于重组大肠杆菌生产甜蛋白monellin提供了参考依据。
乳糖作为诱导剂对人β-防御素3蛋白表达的影响*
李春丽,席燕燕,陈正华,何国庆
微生物学通报 , 2006,
Abstract: 对人β-防御素3基因工程菌株BL21-pET-hBD3的乳糖诱导条件进行了研究。乳糖浓度、诱导时间和诱导温度对菌株生长和目的蛋白表达的试验结果显示,高浓度乳糖对菌株生长有抑制作用(P<0.01),对目的蛋白的表达无显著影响(P>0.05),延长诱导时间对菌株生长有利(P<0.01),但对蛋白的表达无显著影响(P>0.05)。以0.5%乳糖在37℃诱导4h对目的蛋白的表达有利,目的蛋白的含量可达28.1%。控制好诱导条件,乳糖与IPTG的
植物基因工程表达载体的改进和优化策略 Strategies for Optimizing Expression Vectors Used in Plant Genetic Engineering
侯丙凯,夏光敏,陈正华HOU Bing-kai,XIA Guang-min,CHEN Zheng-hua
遗传 , 2001,
Abstract: 外源基因在转基因植物中表达效率低一直是令相关研究者困扰的一个问题.转基因植物的生物安全性最近在全球范围内开始引起世人的担忧.本文简要介绍了近年来在植物表达载体构建方面所采用的一些新策略,这些策略有助于增强外源基因的表达水平、提高生物工程体的安全性。 Abstract:The low expression level of foreign genes in transgenic plants is a puzzling question for researchers in plant genetic engineering.The biosafety concern is now causing a growing public wariness of transgenic plants around the world.This article reviews the new strategies currently used in construction of plant expression vector for plant genetic engineering.These strategies are important for obtaining better expression of foreign genes and developing safer transgenic plants.
Soluble expression of recombinant cyclophilin A in Escherichia coli
重组亲环蛋白A的可溶性表达

YAN Xiao,XU Li-ren,GUAN Yi-xin,YAO Shan-jing,
闫啸
,徐立仁,关怡新,姚善泾

浙江大学学报(农业与生命科学版) , 2010,
Abstract: 为获得高表达量的可溶亲环蛋白A(cyclophilin A,CypA),对重组CypA质粒表达和工程菌的培养过程进行研究.首先将pRSET-CypA质粒转入Escherichia coli BL21菌株,获得表达CypA的重组工程菌;然后以2×YT为基本培养基,对培养基组成包括碳源、氮源和氨苄青霉素浓度进行优化,并考察接种量和诱导条件(诱导剂浓度、诱导时机、诱导后培养时间)等对目标蛋白表达量的影响.结果表明:通过控制培养温度和转速可大大减少CypA包涵体的量;以甘露醇为碳源能显著提高目标蛋白的表达量;优化的培养基组成为蛋白胨16 g·L-1,酵母提取物10 g·L-1,NaCl 5 g·L-1,甘露醇10 g·L-1,Amp 50 mg·L-1;在对数生长期中期OD600为1.3时加入1 mmol·L-1 IPTG诱导,然后在30 ℃、180 r·min-1条件下继续培养9 h收获菌体;优化后目标蛋白CypA产量为66.7 mg·L-1发酵液,与优化前相比提高了76.6%.
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