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黄芪遗传转化受体系统的建立及aFGF转化黄芪的研究
李大超,王义,,韩秀文,张美萍
中国中药杂志 , 2009,
Abstract: 目的:建立黄芪的高频再生体系,并在其基础上建立aFGF转化黄芪的体系。方法:以黄芪的子叶节为外植体通过器官发生途径建立高频再生体系,采用农杆菌GV3101转化黄芪子叶节,将aFGF基因导入黄芪,再生株系经过PCR初步检测。结果:以全部子叶节为外植体,在培养基为MS+2.0mg·L-1BA+0.5mg·L-1IBA诱导不定芽;在培养基为1/2MS+5.0mg·L-1NAA生根,获得高频再生体系;全部子叶节在培养基上预培养3d,农杆菌浓度为A6000.3时侵染10min后共培养2d,转移至筛选培养基培养,检测证实aFGF基因整合到黄芪基因组中。结论:在黄芪子叶节高效再生体系基础上,建立黄芪遗传转化受体体系,为黄芪作为植物生物反应器的研究奠定了基础。
aFGF植物表达载体构建及转化紫花苜蓿的初步研究
,王义,孙春玉,王艳芳,李校堃,张美萍
草业学报 , 2011,
Abstract: 主要将aFGF基因按照植物偏爱的密码子进行基因优化,同时加上信号肽、6-组氨酸标签及凝血酶切割因子,合成全基因,再将基因插入到改造的TΩ4AB质粒中,将aFGF基因和质粒上的增强子、启动子、Ω序列及ployA加尾序列双酶切,命名为TΩ4AB-aF,将TΩ4AB-aF插入到pBI121载体中命名为pBI121-TΩ4AB-aF。利用三亲融合法将pBI121-TΩ4AB-aF转入到农杆菌菌株LBA4404中,转化苜蓿。转基因苗用卡那霉素进行筛选;并对抗性苗进行PCR、RT-PCR、WesternBlot检测。结果表明,aFGF在苜蓿中得到表达。为苜蓿作为植物生物反应器奠定理论基础。
五加科植物细胞工程研究进展
聂 福,张美萍,孙春玉,,王 义
北方园艺 , 2010, DOI: 10.11937/bfyy.201007080
Abstract:
日本灵芝灵芝酸发酵工艺的优化
李海源,张亮,张美萍,孙春玉,,王义
北方园艺 , 2012,
Abstract: 以日本灵芝为材料,研究了发酵过程中各个因素对灵芝酸产量的影响,通过正交实验确定了提高灵芝酸产量的最佳发酵条件。结果表明最佳发酵条件为接种量14%,装液量100mL/500mL,培养温度25℃,摇床转速140r/min,初始pH6.5。
刺五加形态发生方式的研究
李香竹,李仙,孙春玉,张美萍,,王义
北方园艺 , 2012,
Abstract: 以刺五加愈伤组织为试材,研究了器官发生途径和体细胞胚胎发生途径获得再生植株的发生机制。结果表明移栽成活率分别达到47%和86%;刺五加不定芽诱导最适培养基组成为MS+NAA0.2mg/L+BA3.0mg/L;体胚诱导的最适培养基组成为MS+蔗糖20g/L+葡萄糖20g/L;细胞学观察发现刺五加不定芽大多发生在愈伤组织表面;刺五加体胚发生与合子胚发育过程相似,发生途径为单细胞起源、内部发生。
大片段DNA遗传转化的研究进展
石玉,,张美萍,孙春玉,王康宇,王义
北方园艺 , 2013,
Abstract: DNA克隆技术是分子生物学研究中一项重要的技术手段。随着分子生物学技术的发展及植物基因组计划的进行,产生了既能够克隆大片段DNA又能够将候选基因利用农杆菌介导法进行遗传转化试验的载体。现对大片段克隆载体的发展及大片段DNA遗传转化的影响因素进行综述,并对大片段DNA遗传转化的发展作了展望。????
人参大片段DNA(100kb)转化灵芝的研究
逄春梅,张亮,孙春玉,,王康宇,张美萍,王义
菌物学报 , 2013,
Abstract: 为探讨人参大片段DNA转化灵芝的可能性,通过电击法将双元细菌人工染色体(BIBAC)载体上的100kb人参大片段DNA转化到灵芝原生质体内。研究发现,在电极间距为4mm,电压强度为240V时,将5μL的人参大片段DNA转化到75μL的灵芝原生质体,在选择培养基上获得了具有再生能力的转化子。根据克隆载体两侧的序列设计两对引物,对转化子进行PCR分析。试验结果表明人参大片段DNA已经转化到灵芝的基因组中。
人参15个组织器官中皂苷量与6种人参皂苷生物合成基因表达的相关性研究
王康宇,张美萍,李闯,,尹锐,孙春玉,王义
中国中药杂志 , 2015,
Abstract: 以四年生红果期吉林人参的15个组织器官为材料,利用HPLC和香草醛-硫酸比色法分别测定15个组织器官中6种单体皂苷(人参皂苷Rg1,Re,Rb1,Rc,Rb2,Rd)和总皂苷含量;同时,利用实时荧光定量PCR测定15个组织器官中法尼基焦磷酸合成酶(farnesylpyrophosphatesynthase,FPS)、鲨烯合成酶(squalenesynthase,SQS)、鲨烯环氧酶(squaleneepoxidase,SQE)、氧化鲨烯环化酶(oxidizedsqualenecyclase,OSC)、β-香树脂合成酶(β-amyrinsynthase,β-AS)和细胞色素P450超家族(cytochromeP450family,P450)基因的相对表达量。研究试图通过相关性分析,获得吉林人参15个组织器官中人参皂苷含量与生物合成途径相关酶基因表达量之间相关关系。结果表明,6种单体皂苷含量之间具有线性正相关的协同增减趋势,而单体皂苷含量与总皂苷含量之间具有相关性极显著(P<0.01)的正相关关系;总皂苷含量与人参中SQS,OSC,β-AS,SQE,P450,FPS基因之间的相关性极显著(P<0.01),单体皂苷含量与6种酶基因之间相关性各不相同。说明这6种参与人参皂苷生物合成酶基因调控人参总皂苷与单体皂苷的生物合成,它们在人参不同组织器官中的表达呈现协同增减趋势,并以集群协调表达的方式来调控人参皂苷生物合成。
植物乳杆菌发酵转化人参皂苷的研究
陈旸,王义,孙亮,王康宇,,孙春玉,张美萍
中国中药杂志 , 2014,
Abstract: 目的:探索植物乳杆菌对人参的发酵工艺,将人参中的部分人参总苷转化成活性更强的人参皂苷Rd。方法:采用静止暗培养法进行微生物发酵;索氏提取法提取人参总苷;香草醛-硫酸显色,紫外-可见分光光度法测定人参总苷含量;HPLC测定供试品中人参皂苷Rd含量。结果:植物乳杆菌对人参的发酵工艺为:发酵培养基为MRS培养基、培养温度35℃、培养pH为5.0、发酵时间2d;发酵后的人参,其发酵产物中人参总苷含量提高了32%,单体人参皂苷Rd含量增加4.864mg·g-1。结论:建立的发酵体系工艺合理,适用于大规模生产,对微生物转化人参皂苷的研究具有重要意义。
棉花黄萎菌间接ELISA方法的建立及其检测棉花体内带菌的应用
,高广瑞,,继志,鹿秀云,马平,李社增
华北农学报 , 2007, DOI: 10.3321/j.issn:1000-7091.2007.02.035
Abstract: 利用棉花黄萎病的病原菌的菌丝蛋白作为抗原,制备了该病原菌菌丝蛋白的多克隆抗体,建立了特异性检测棉花黄萎病菌的间接ELISA方法。该方法检测灵敏度达到5ng/mL棉花黄萎菌菌丝蛋白。应用该方法可定量检测棉花组织及其根部土壤中棉花黄萎菌的含量,同时发现病株的茎、根及根部土壤的带菌量多少与病株发病程度有一定的相关性。本研究说明,该方法可在棉花黄萎病的早期检测和预报上具有重要的应用前景。
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