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高生物量富硒酵母的选育及培养条件初步优化
?? 王昌禄 张博润*
生物工程学报 , 2003,
Abstract: 通过筛选、单倍体分离、诱变和原生质体融合,从融合子中选育了一株高生物量富硒酵母菌株(编号为zff-28),其细胞硒总含量分别是原始亲株zy-67和zy-198的2.8倍和2.0倍。通过单因素实验和正交试验设计,确定了优化培养条件:6%糖浓度的蔗糖糖蜜,添加0.5%(nh4)2so4、0.1%h3po4、60μg/mlse,ph60~6.5,装液量50ml/250ml三角瓶,接种量10%,培养时间25h。在优化培养条件下,菌株zff_28的生物量可达8.2g/l,细胞中硒的含量达2050μg/g,硒总含量达到了16810μg/l,是培养条件优化前的1.3倍。细胞硒含量的91%为有机硒。
The Breeding and Culture Condition Optimization of a High-biomass,Selenium-enriched Yeast Strain
高生物量富硒酵母的选育及培养条件初步优化

FAN Xiu-Ying,GUO Xue-Na FU Xiu-Hui HE Xiu-Ping WANG Chang-Lu ZHANG Bo-Run,
,王昌禄 张博润

生物工程学报 , 2003,
Abstract: The yeast fusant ZFF-28, which is high in biomass production and rich in selenium, was constructed after mutagenesis and protoplasts fusion between yeast strains. The total selenium content of ZFF-28 is 1.8 and 1.0 times higher than that of the parental strains Saccharomyces cerevisiae ZY-67 and Saccharomyces kluyveri SZY-198 respectively. Using single factor tests and a L16(4(3) x 2(1)) orthogonal design, the cultivation conditions was optimized as: 50mL culture in 250mL shake flasks in molasses containing 6% sugar and 60microg/mL Se at 28 degree C for 25h at 220 r/min, with the initial pH adjusted to 6.0 - 6.5. Under the optimized conditions, the biomass (dry weight) reached 8.2g/L and the Se content of the cells reached 2050microg/g, with organic and inorganic Se contents being 91% and 9% respectively.
优良酿酒酵母(面包酵母)三倍体菌株的选育*
刘春,,,,张博润
菌物学报 , 2003,
Abstract: 通过初筛、单倍体分离、诱变、原生质体融合及杂交等育种技术选育出一株具有高生物量、耐高糖、强絮凝性能的优良酿酒酵母(面包酵母)三倍体菌株ZLFH-121,其生物量分别为原始亲株BL68、BL92、L77的1.22、1.33与1.83倍;絮凝性能明显优于原始亲株BL68、BL92。并对其培养条件进行了优化研究,结果表明三倍体菌株ZLFH-121能够很好地利用糖蜜培养基,并表现出良好的絮凝能力。在优化的培养条件下,生物量提高至93.82g/L(湿重),为初始培养条件下的1.30倍。经遗传稳定性分析,证明三倍体菌株ZLFH–121遗传稳定,是一株具有潜在应用价值的优良酿酒酵母(面包酵母)菌株。
优良酿酒酵母(面包酵母)三倍体菌株的选育*
刘春,,,,张博润
菌物学报 , 2003,
Abstract: 通过初筛、单倍体分离、诱变、原生质体融合及杂交等育种技术选育出一株具有高生物量、耐高糖、强絮凝性能的优良酿酒酵母(面包酵母)三倍体菌株ZLFH-121,其生物量分别为原始亲株BL68、BL92、L77的1.22、1.33与1.83倍;絮凝性能明显优于原始亲株BL68、BL92。并对其培养条件进行了优化研究,结果表明三倍体菌株ZLFH-121能够很好地利用糖蜜培养基,并表现出良好的絮凝能力。在优化的培养条件下,生物量提高至93.82g/L(湿重),为初始培养条件下的1.30倍。经遗传稳定性分析,证明三倍体菌株ZLFH–121遗传稳定,是一株具有潜在应用价值的优良酿酒酵母(面包酵母)菌株。
工业酵母菌的遗传修饰研究进展及其应用前景
,,,张博润
中国生物工程杂志 , 2003,
Abstract: 简要概述工业酵母菌的遗传修饰研究进展,主要介绍适用于工业酵母菌遗传修饰的转化系统;敲除工业酵母基因工程菌细胞内不需要的基因的反选择技术;外源基因在工业酵母菌中克隆和表达的非自身克隆技术;工业酵母菌自身已有基因的克隆和表达的自身克隆技术等。此外,对遗传修饰的工业酵母菌的工业化应用前景作了简要展望。
The Screening of A Zinc-enriched Yeast Strain and Primary ptimization of Cultivation Conditions
富锌酵母的选育及培养条件研究

GUO Xue_Na FU Xiu_Hui HE Xiu_Ping ZHANG Bo_Run,
,,,张博润

微生物学报 , 2004,
Abstract: 对402株不同种属的酵母菌株进行了出筛、复筛、单倍体分离、诱变,从亲株Y-6-16-18(a met)accharomyces cerevisiae)和Y378-4-15(α-leu)(Sacharomyces kluyveri)的杂交菌株中选育到一株富锌酵母菌株(编号为ZGH374)。并初步优化了发酵条件:培养基为80g/L糖浓度的麦芽汁、10g/L蛋白胨、锌添加量400μg/mL,pH 6.0,装液量40mL/250mL三角瓶,接种量10%(V/V),培养起始添加锌盐,培养时间30h。在优化的条件下,杂交菌株ZGH374的生物量(细胞干重)达到14.3g/L,细胞锌含量可达到9.3mg/g,锌总含量达到了133mg/L。
絮凝基因内衔接重复序列与酵母菌絮凝特性多样性及遗传稳定性
岳峰?,,,张博润?
生物工程学报 , 2013,
Abstract: 存在于酵母菌细胞表面的絮凝蛋白与邻近细胞表面寡聚甘露糖链相互作用,从而使细胞相互聚集形成细胞团的生理过程称为酵母菌絮凝。编码絮凝蛋白的基因中存在大量衔接重复序列,这些重复序列的变化不但使酵母菌呈现出絮凝特性的多样性,而且由重复序列驱动的基因内或基因间重组使酵母菌的絮凝特性具有非常明显的遗传不稳定性。文中综述了基因内重复序列对酵母菌絮凝特性和遗传稳定性的影响,将为基于序列调控策略改进酵母菌絮凝特性及遗传稳定性奠定理论基础,为絮凝特性在发酵工业或环境修复过程中的可控应用提供新的解决策略
低双乙酰抗老化啤酒酵母工程菌的构建
张吉?? 刘楠 张博润*
生物工程学报 , 2005,
Abstract: 用来源于啤酒酵母的γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶基因(gsh1)和铜抗性基因(cup1)取代质粒plz-2中α-乙酰乳酸合成酶基因(ilv2)内部约2.3kb的dna片段,构建成重组质粒picg。限制酶酶切质粒picg后获得在基因gsh1和cup1两端含有ilv2序列的6.0kb的dna片段。用此片段转化啤酒酵母ysf31,得到铜抗性高的转化子。并通过pcr和α-乙酰乳酸合成酶(ahas)活性测定筛选到酵母工程菌。小试实验结果表明酵母工程菌谷胱甘肽含量比受体高34%,而双乙酰含量是受体的75%。其他发酵指标并没有发生改变。中试实验表明酵母工程菌发酵周期缩短3d,而且成品啤酒的保鲜时间延长50%。由于dna操作过程中没有外源基因介入,因此啤酒酵母工程菌为生物安全的自克隆菌株,具有重要的实际应用价值。
酵母菌利用糖蜜发酵产麦角甾醇的工艺条件优化
王绍杰?,,,张博润?
生物工程学报 , 2013,
Abstract: 麦角甾醇是由酵母菌产生的具有重要经济价值的代谢产物。为了提高酵母菌利用糖蜜发酵生产麦角甾醇的产量,通过响应面分析法优化了发酵培养基配方,并在5l发酵罐对发酵过程ph控制和底物流加补料方式进行了优化。结果表明,利用优化后的发酵培养基,即糖蜜总糖40g/l,kh2po41g/l,k2hpo41.86g/l,cuso4·5h2o17.5mg/l,feso4·7h2o13.9mg/l,mgso4·5h2o12.3mg/l,玉米浆10ml/l,麦角甾醇产量比优化前提高了29.5%;利用恒定ph控制策略,在5l发酵罐进行分批发酵,使麦角甾醇产量提高了62.1%;进一步采用底物流加补料策略,使麦角甾醇产量达到1953.85mg/l,是分批发酵的3.2倍,而且麦角甾醇产率比分批发酵提高了42.7%。为酵母菌发酵糖蜜产麦角甾醇的产业化应用奠定了基础。
人乳头瘤病毒16亚型l1蛋白在多形汉逊酵母中的优化表达
李巍巍?,,,张振颖?,张博润?
生物工程学报 , 2009,
Abstract: 为了实现人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,hpv)16亚型衣壳蛋白l1在多形汉逊酵母(hansenulapolymorpha)中的高效表达,根据l1蛋白的氨基酸序列及多形汉逊酵母的密码子偏爱性,对l1蛋白的编码序列进行优化设计,合成了完整的编码序列,命名为hpv16l1。以甲醇诱导型启动子moxp和终止子aoxtt为表达调控元件,以尿嘧啶合成相关基因ura3为筛选标记,构建了hpv16l1的重组表达质粒pymoxu-hpv16。用sacii酶切质粒pymoxu-hpv16使其线性化,电转化多形汉逊酵母菌株h-ura3,依据营养缺陷互补筛选重组菌株。通过pcr扩增及hpv16l1蛋白表达量分析表明已获得稳定高表达l1蛋白的重组汉逊酵母菌株hp-u-16l。摇瓶发酵条件的初步优化表明,以ypm(ph7.0)为基础培养基进行诱导培养,控制接种量使初始培养液od600为1.0,每隔12h补加甲醇至终浓度为1%(v/v),37oc、200r/min条件下诱导培养72h后,hpv16l1蛋白的最高表达量为78.6mg/l。本研究为多形汉逊酵母源hpv16l1疫苗的研制奠定了基础。
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