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核移植方法和活化方法对小鼠体细胞克隆胚胎发育的影响
耀,于洋,李雪梅,焦丽红,
科学通报 , 2007,
Abstract: 用卵丘细胞为核供体进行小鼠体细胞克隆,成功获得了一批成年体细胞克隆小鼠.为探讨不同核移植方法和重构胚活化方法对小鼠克隆胚发育的影响,用B6D2F1小鼠的卵丘细胞和卵母细胞作为供、受体进行核移植实验,采用电融合和细胞质内直接显微注射的方法进行核移植,并采用电脉冲、乙醇处理、氯化锶处理和电脉冲联合氯化锶4种不同方法对重构胚进行活化,对克隆胚胎的体外及体内发育进行研究.结果显示,利用显微注射法获得重构胚胎的工作效率(90.7%)显著高于融合法获得重构胚胎的工作效率(49.7%).乙醇、电脉冲和氯化锶3种激活方法都可以诱导孤雌胚发育到囊胚,但前二者处理的胚胎的囊胚发育率(52.4%,54.2%)显著低于后者(76.9%).10mmol/L氯化锶处理6h活化效果最好.融合法获得的重构胚经氯化锶或者电脉冲联合氯化锶激活后,囊胚发育率(9.5%,8.6%)显著高于单纯电脉冲激活(2.6%),而乙醇活化的重构胚没有发育到囊胚阶段.用显微注射法经氯化锶激活获得的重构胚的囊胚发育率最高(16.6%).注射法和融合法获得的重构胚胎经氯化锶激活后进行胚胎移植,都获得了发育到期的体细胞克隆小鼠,发育到期率分别为2.5%和1.4%.结果表明,两种核移植方法对B6D2F1小鼠重构胚胎的早期发育能力有一定影响,用这两种方法都可以获得体细胞克隆小鼠;不同活化方法对重构胚胎的体外发育能力有显著影响,在上述4种激活方式中,氯化锶处理对克隆胚的激活效果最好.
核移植方法和活化方法对小鼠体细胞克隆胚胎发育的影响
耀,于洋,李雪梅,焦丽红,
科学通报 , 2007,
Abstract: 用卵丘细胞为核供体进行小鼠体细胞克隆,成功获得了一批成年体细胞克隆小鼠.为探讨不同核移植方法和重构胚活化方法对小鼠克隆胚发育的影响,用B6D2F1小鼠的卵丘细胞和卵母细胞作为供、受体进行核移植实验,采用电融合和细胞质内直接显微注射的方法进行核移植,并采用电脉冲、乙醇处理、氯化锶处理和电脉冲联合氯化锶4种不同方法对重构胚进行活化,对克隆胚胎的体外及体内发育进行研究.结果显示,利用显微注射法获得重构胚胎的工作效率(90.7%)显著高于融合法获得重构胚胎的工作效率(49.7%).乙醇、电脉冲和氯化锶3种激活方法都可以诱导孤雌胚发育到囊胚,但前二者处理的胚胎的囊胚发育率(52.4%,54.2%)显著低于后者(76.9%).10mmol/L氯化锶处理6h活化效果最好.融合法获得的重构胚经氯化锶或者电脉冲联合氯化锶激活后,囊胚发育率(9.5%,8.6%)显著高于单纯电脉冲激活(2.6%),而乙醇活化的重构胚没有发育到囊胚阶段.用显微注射法经氯化锶激活获得的重构胚的囊胚发育率最高(16.6%).注射法和融合法获得的重构胚胎经氯化锶激活后进行胚胎移植,都获得了发育到期的体细胞克隆小鼠,发育到期率分别为2.5%和1.4%.结果表明,两种核移植方法对B6D2F1小鼠重构胚胎的早期发育能力有一定影响,用这两种方法都可以获得体细胞克隆小鼠;不同活化方法对重构胚胎的体外发育能力有显著影响,在上述4种激活方式中,氯化锶处理对克隆胚的激活效果最好.
卵母细胞老化对小鼠体细胞克隆胚发育的影响
耀,代相鹏,焦丽红,周琪,
科技导报 , 2007,
Abstract: 就小鼠卵母细胞的卵龄对克隆胚的体外发育能力的影响进行了检测,以确定最佳的取卵时间,以及取卵后进行核移植操作的可耐受的时间。采用PMSG和hCG超排B6D2F1雌鼠。在体内老化实验中,分别于注射hCG后13,15,17,20h取卵用于核移植操作;在体外老化实验中,所有的卵均于注射hCG后13h取出并培养,然后在13,15,17,20h进行核移植操作。每个时间点的核移植操作在1h内完成,重构的胚胎培养1h后进行激活。结果显示在体内老化实验中,注射hCG后13h取卵,获得的克隆囊胚发育率最高,为56.0%,15h取卵仍维持了其支持胚胎体外发育的能力,但17h及更长时间后取的卵,重构后的囊胚发育率显著下降(18.1%)。注射hCG后15h取的卵孤雌发育率最高(囊胚发育率为90.1%),并在17h仍维持较高的孤雌发育能力,在20h显著下降。在体外老化试验中,于注射hCG后13h取卵,分别于13,15,17h重构,都获得了较高的囊胚发育率(分别为57.7%,52.2%,46.3%),而在注射hCG后20h重构,囊胚发育率显著下降(14.8%)。体外老化的孤雌胚在注射hCG后22h激活时囊胚发育率显著下降。结果表明卵母细胞在体内和体外老化都影响克隆胚的体外发育,最佳取卵时间为注射hCG后13h,取卵后立即用于重构可获得最佳囊胚发育率;体内、外老化卵支持重构胚较好发育的时间间隔是不同的,体内老化卵支持重构胚发育能力从注射hCG后17h开始下降,体外老化卵则发生在20h。这些结果可以指导操作,有利于在应用核移植进行其他基础研究时降低操作引起的误差。
锌指核酸酶及其应用研究进展
李万利,李文清,明发,耀,曹文广﹡
河南农业科学 , 2014,
Abstract: 锌指核酸酶由锌指和非限制性切割酶两部分组成,锌指能特异性结合基因组双链DNA,非限制性切割酶能造成染色体上双链DNA的断裂,通过机体的修复机制可以使目的基因突变或外源基因插入,进而应用于转基因动物的制备。综述了锌指、切割酶及采用锌指核酸酶制备转基因动物的研究进展,主要包括锌指的发现、结构及与DNA结合时的碱基分布和结合方式,锌指的筛选和设计方法;切割酶的研究进展包括FokⅠ的发现及切割特点,基因修饰后的异源二聚体切割特异性等。
奶牛子宫内膜炎血常规分析及病原分离鉴定
牛晖,张嘉保,徐照学,耀,冯亚杰,陈付英
河南农业科学 , 2015,
Abstract: 为探讨血常规检验在奶牛子宫内膜炎临床诊断中的意义,分析了患病奶牛的血常规数据,同时分离鉴定其子宫内病原微生物。结果表明,与正常奶牛的血常规数据相比,患病奶牛的白细胞计数极显著增高(P<0.01);中性粒细胞百分比和中性粒细胞绝对值均极显著增加(P<0.01),淋巴细胞百分比极显著降低(P<0.01),说明患病组奶牛可能患有由细菌感染引起的子宫内膜炎。经过纯化鉴定,从患牛子宫内分离出15种(54株)细菌,其中,主要为大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,其次是奥斯陆莫拉菌和蜡样芽孢杆菌,且以混合感染为主。
芽孢杆菌类益生素对肉鸡血细胞及免疫器官组织结构的影响
,耀,,乔恩美,吴国忠,李升和
牲畜兽医学报 , 2013,
Abstract: ??为了研究芽孢杆菌类益生素对肉鸡血细胞和免疫器官组织结构的影响,本研究选用480羽刚出壳aa肉鸡,随机分对照组、抗生素组、试验ⅰ和ⅱ组,对照组饲喂基础日粮,抗生素组添加50mg·kg-1金霉素,试验ⅰ和ⅱ组分别添加200和400mg·kg-1富含芽孢杆菌类益生素,试验期42d。结果显示,与对照组相比,试验ⅱ组第21和42天肉鸡红细胞数量、嗜碱性粒细胞和单核细胞比例分别显著或极显著增加(p<0.05或p<0.01),第42天胸腺、法氏囊重量和器官指数分别显著增加46.60%和38.23%、66.67%和47.62%(p<0.05);试验ⅰ组第21和42天肉鸡法氏囊重量和器官指数分别显著增加35.40%和36.92%、88.03%和153.97%(p<0.05),第42天胸腺重量和器官指数显著增加46.27%和28.13%(p<0.05);抗生素组白细胞数量显著减少,第42天脾脏重量和器官指数显著降低(p<0.05)。试验ⅰ和ⅱ组第21和42天肉鸡免疫器官与对照组相比,脾小结数量增多、脾动脉周围淋巴鞘增厚,胸腺皮质增厚、胸腺小体数量减少,法氏囊小结数量增多、小结内淋巴细胞排列紧密,且试验ⅰ组比试验ⅱ组更为明显,而抗生素组免疫器官均出现不同程度的发育不良。上述结果表明,添加200mg·kg-1芽孢杆菌益生素比400mg·kg-1更能促进免疫器官的发育,提示芽孢杆菌类益生素具有增强机体免疫功能的作用。
应用改进的矩阵束方法加速混响室时域仿真
,武占成,耀,
强激光与粒子束 , 2013,
Abstract: ?为了减少混响室时域全波仿真的计算量,首次对混响室时域响应的预测做出探索研究。以改良矩阵束方法为基础,提出一种计算效率更高的矩阵束方法,并验证了该方法的正确性与稳定性。用复指数幂求和式对混响室的时域波形进行拟合,利用该方法能够高效求解出拟合式中的各极点,实现了对混响室时域响应的近似外推。由电场强度的前20000步计算结果,可快速预测得到后20000步响应,发现束参数比例取0.62左右时,对多个采样点的电场均可得到良好的预测效果,可保证仿真与预测相结合得到的结果与真实结果的频域相对误差小于15%。这种结合预测的仿真算法可节省计算量约50%。
南阳牛成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究
楚秋霞,安森亚,施巧婷,辛晓玲,耀,魏成斌,徐照学
河南农业科学 , 2012,
Abstract: 建立了南阳牛成纤维细胞系,旨在为制备转基因克隆牛提供核供体细胞。以南阳牛耳缘组织作为试验材料,通过组织块法培养分离南阳牛成纤维细胞,并进行生物学特性分析。结果表明,含有15%FBS的DMEM/F12培养基较适合原代牛成纤维细胞的体外培养。分析了细胞冻存前和复苏后的活率,分别为95.9%和90.2%,差异不显著;生长曲线表明细胞生长正常。南阳牛成纤维细胞传至第6代时,细胞核型正常。流式细胞仪检测结果显示,G0-G1期的F4和F8代细胞占细胞总数的64.35%和64.53%,F11代细胞占细胞总数的81.90%。在S期,F4代细胞占细胞总数的30.69%,F11代细胞占细胞总数的16.37%。结果表明,所培养的南阳牛成纤维细胞可作为体细胞核移植的供体细胞进行转基因克隆牛方面的研究。
小尾寒羊重复超排激素用量调整及其效果
吴姣,耀,冯亚杰,施巧婷,楚秋霞,辛晓玲,陈付英,治方,徐照学
河南农业科学 , 2014,
Abstract: 为了探究重复超排对小尾寒羊超排效果的影响,以30只2~5岁的小尾寒羊为研究对象,首次超排注射8mg卵泡刺激素(FSH),根据超排反应将供体羊分为3组(一组反应差,二组反应正常,三组反应剧烈),分别对每组第2次、第3次重复超排的激素用量进行调整。一组第2次重复超排时,增加2mg卵泡刺激素(FSH)及200IU孕马血清素(PMSG),第3次激素用量同第2次;二组第2次增加2mgFSH,第3次增加4mgFSH;三组第2次减少1mgFSH,第3次减少1.5mgFSH。结果显示,一组在第2次超排时平均红体数由2.00个增加到7.40个,增加270.0%,平均回收卵子数由1.60枚增加到5.50枚,增加243.8%,第3次超排平均红体数为7.80个,比首次增加290.0%,平均回收卵子数为4.60枚,比首次增加187.5%,第2、3次超排的平均红体数和平均回收卵子数均显著高于首次;二组在调整激素用量后保持稳定的超排效果,第2、3次超排结果与首次差异不显著;三组在调整激素用量后超排效果依然不佳,3次超排结果差异不显著。表明,根据首次超排效果调整小尾寒羊重复超排的激素用量方法可行,对于首次超排反应差的个体,重复超排时增加2mgFSH、添加200IUPMSG,可显著提高平均红体数和回收卵子数;对于首次超排效果好的个体重复超排时增加2mgFSH用量,能保证供体重复超排的稳定性。
不同菌渣肥施用量对小麦产量及其构成因素的影响
聂胜委,李向东,张玉亭,张巧萍,张水清,黄绍敏,康源春,耀
河南农业科学 , 2015,
Abstract:
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