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O-连接的N-乙酰葡糖胺糖蛋白的研究进展
,庞义
生物技术通报 , 2009,
Abstract: O-连接的N-乙酰葡糖胺(O-GlcNAc)修饰是普遍存在的翻译后修饰。已有许多的蛋白被发现是O-GlcNAc蛋白。目前,许多分析方法可以检测O-GlcNAc,将其从内膜系统的多种糖基化中区分出来。O-GlcNAc修饰在细胞事件中发挥着重要的功能,O-GlcNAc的调控异常可能会引起某些人类疾病,如癌症、阿尔茨海默病和II型糖尿病。杆状病毒GP41蛋白也是糖蛋白,它介导芽殖型病毒粒子(buddedvirus,BV)的核衣壳通过胞核。O-GlcNAc的调控研究为探讨GP41蛋白O-Glc-NAc的调控作用提供了参考模式。
农杆菌介导石斛兰遗传转化的研究
张妙彬,梁擎中,肖浩,岑鹏,范干群,
园艺学报 , 2008,
Abstract: 利用根癌农杆菌介导转化石斛兰类原球茎(plbs),研究了石斛兰对潮霉素的敏感性,并通过gus瞬时表达率比较不同类型农杆菌、侵染液浓度及乙酰丁香酮(as)等对石斛兰转化的影响。结果表明:带有pcambia1301的根癌农杆菌(agrobacteriumtumefaciens)eha105(简称为e1301)比带有相同表达载体的lba4404(简称l1301)对石斛兰的转化效率更高,前者约为后者的6倍;较高浓度的侵染液转化效率更高(od600为1.0或1.2时的转化效率约为od600为0.6或0.8时的2倍);在农杆菌生长至od600值为0.8时,添加as可提高转化效率;而当od600为0.6、1.0和1.2时,添加as反而不同程度地降低转化效率;在各种处理中,od600为1.0时不添加as的转化效率最高,达44.4%。经过5~6个月选择培养,抗性小苗经gus染色、pcr和southern杂交检测证明为转基因植株。
石斛兰dfr基因的克隆、序列分析及原核表达
,张妙彬,范干群,陈伟庭,曹友培
园艺学报 , 2010,
Abstract: 二氢黄酮醇4-还原酶(dfr)在不同花色形成中起着关键作用。利用rt-pcr方法从石斛兰中克隆出dfr基因,并命名为dendfr。该序列全长1164bp,编码352个氨基酸。氨基酸序列分析发现,dendfr与3种兰科植物的dfr氨基酸序列同源性达81%~86%,与其他非兰科植物的dfr氨基酸同源性在56%~72%之间。在dendfrn-末端存在一个保守的nadp结合区,序列中存在26个氨基酸组成的底物特异结合区,其中134位氨基酸处存在特异的天冬酰胺n位点。将dendfr的编码区克隆到pqe30载体中,在大肠杆菌中高效表达了该蛋白,为进一步研究石斛兰花色形成机制及花色改良基因工程打下基础。
石斛兰dfr基因植物表达载体的构建
,范干群,张妙彬,肖杨,曹友培
生物技术通报 , 2009,
Abstract: 石斛兰花瓣缺乏橙色、蓝色,这与其二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol4-reductase,DFR)活性有着密切的关系。根据已报道的石斛兰dfr基因序列设计引物,从Den.BuranaEmerald中分离了dfr基因。将该基因序列正向与反向连接到植物表达载体pCAMBIA1301中,并由组成型启动子CaMV35S驱动,成功构建了dfr基因的正义和反义植物表达载体pC-SDN1和pCSDN2,并导入根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefacien)EHA105,以期利用转基因技术培育出石斛兰花色新品种。
以STAT3为靶标的抗肿瘤药物高通量筛选模型的建立和应用
,张宁,牛国君,,刘祥,杨诚
生物技术通报 , 2014,
Abstract: 旨在建立稳定可靠的以转导与转录激活子(STAT3)为靶标的抗肿瘤高通量筛选模型,应用该模型筛选潜在的抗癌药物。利用基因重组、蛋白表达纯化技术,获得STAT3目的蛋白,使用酶联免疫吸附法(ELISA)进行高通量药物筛选,将筛选出的抑制剂在细胞水平上利用MTT比色法测定化合物对癌细胞增殖的影响。结果显示,成功构建表达载体pET-28a-STAT3;所建立的模型稳定可行,可用于以STAT3为靶标的抗肿瘤药物的高通量筛选;用该模型对8248个样品进行筛选,在500μmol/L药物浓度下,化合物MDC6抑制率为92%,另外,进行IC50值的测定时,分子水平上最低达到3.37μmol/L,在细胞水平上可达到15.92μmol/L。建立的高通量药物筛选模型,具有操作方便、成本低、结果稳定等特点,可用于STAT3抑制剂的大规模筛选。
杆状病毒spltmnpvgp41基因的克隆、表达及抗体制备
,李朝飞,尹崇,吕雷,庞义**
农业生物技术学报 , 2004,
Abstract: ? :gp41是杆状病毒包埋型病毒粒子(occlusion-derivedvirus,odv)特有的糖蛋白,它介导芽殖型病毒粒子(buddedvirus,bv)的核衣壳通过胞核。用pcr方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒(spodopteralituranucleopolyhedrovirus,spltmnpv)gp41基因,并将其克隆至5′端有6×his编码序列的原核表达载体pqe30上,转化大肠杆菌(escherichiacoli)m15[prep4],在1mmol/l异丙基-d-硫代半乳糖(iptg)诱导下超量表达了与理论预测值相符的1个37.9kd融合蛋白。以纯化的融合蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔制备了特异的抗gp41抗体。western印迹分析表明,该抗体适合进一步分析spltmnpvgp41蛋白。
斜纹夜蛾核多角体病毒vp39-gst融合蛋白的原核表达
李赛男,李朝飞,,吴文碧,庞义
中国生物工程杂志 , 2006,
Abstract: 用pcr的方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒(spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,spltmnpv)vp39全长基因。将其克隆至原核表达载体pgex-4t-1上,构建重组表达质粒pgex-4t-vp39,转化大肠杆菌bl21(de3),在1mmol/l异丙基硫代-β-d-半乳糖苷(iptg)诱导下超量表达了与理论预测值相符的一个约60kd的vp39-gst融合蛋白。vp39-gst融合蛋白的成功表达为进一步研究vp39在病毒侵染过程中与宿主细胞成分或病毒粒子蛋白间的相互作用奠定了基础。
脂蛋白 (a)颗粒水平与早发性冠脉粥样硬化的相关性分析
,徐世骥,吴炯,张春燕,王蓓,郭玮,柏申△
- , 2016,
Abstract:
甲基肼自由基在高温燃烧分解反应下的非谐振效应
Anharmonic Effect of the Decomposition Reaction in High-Temperature Combustion of Monomethylhydrazine Radicals

于洪,夏文文,宋立国,丁杨,郝宇,康利强,新祥,,()
- , 2017, DOI: 10.3866/PKU.WHXB201705227
Abstract: 基于过渡态理论(TST)和RRKM(Rice-Ramsperger-Kassel-Marcus)理论,使用MP2/6-311++G (3df, 2p) //B3LYP/6-311++G (3df, 2p)基组和方法,本文分别计算了甲基肼自由基在高温燃烧下分解反应的谐振以及非谐振速率常数。因此,甲基肼自由基的详细机理得以研究。在正则系综中,谐振以及非谐振速率常数都随着温度的升高而增加;而在微正则系综中,速率常数随着能量的升高而增加。整体上看,在正则系综和微正则系综中,非谐振效应分别随着温度和能量的升高而变得越来越明显。因此甲基肼自由基在高温燃烧下分解反应的非谐振效应是不能被忽视的。
In this work, the harmonic and anharmonic rate constants of the decomposition reaction of monomethylhydrazine (MMH) radicals have been calculated by using transition state (TS) and Rice-Ramsperger-Kassel-Marcus (RRKM) theories with either MP2 or B3LYP method at 6-311++G (3df, 2p) basis set, respectively. The reaction mechanism and anharmonic effect of the MMH radicals are studied in detail and both of the harmonic and anharmonic rate constants increase sharply with increasing temperature in the canonical system. In the microcanonical system, these constants also show sharp increase with the energies. Overall, the anharmonic effect becomes more pronounced with the increasing temperature or energy in the canonical and microcanonical systems, respectively. These results indicate that the anharmonic effect of the decomposition reaction of MMH radicals is quite significant and cannot be ignored
Ascl2转录调控人结肠癌上皮细胞内CDX2基因表达的研究
钟小莉,尚杨杨,,李姗姗,刘韵,叶钧,,,彭志红,汪荣泉
第三军医大学学报 , 2014,
Abstract: 目的探讨Ascl2对人结肠癌上皮细胞中CDX2基因的转录调控作用。方法预测CDX2启动子的转录因子结合位点,构建包含8个不同长度的CDX2近端启动子的荧光素酶报告基因质粒,分别命名为pGL3-CDX2-C1-8;将各质粒分别转染到shRNA-Ascl2/LS174T和shRNA-Ctr/LS174T细胞中,检测细胞中的双荧光素酶活性。采用染色质免疫共沉淀(ChIP)技术,用Ascl2抗体免疫沉淀与CDX2启动子区DNA片段相结合的Ascl2,PCR扩增CDX2启动子的特异性序列。结果转录因子数据库预测到CDX2近端启动子区含多个E-box结合位点和潜在的Nkx-2、GATA-1、CdxA、Sox-5、SRY等顺式作用元件。双酶切及测序结果证实pGL3-CDX2-C1-8重组质粒插入片段序列均正确。重组质粒在shRNA-Ascl2/LS174T细胞中的荧光素酶活性明显高于shRNA-Ctr/LS174T细胞(P<0.01)。随着CDX2启动子片段的缩短,荧光素酶活性呈升高趋势。ChIP实验证实在CDX2近端启动子存在与Ascl2相结合的片段,在shRNA-Ascl2/LS174T细胞中,Ascl2与CDX2启动子区域中-841~-646、-291~-134、-7~+138片段结合的DNA片段明显少于对照shRNA-Ctr/LS174T细胞。结论Ascl2在结肠癌上皮细胞中可能通过与CDX2近端启动子的直接结合而达到转录阻遏CDX2基因表达的目的。
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