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食管癌细胞ezrin基因启动子tpa反应性的研究
高书颖,李恩民,,陆晓峰,许丽艳,
癌变·畸变·突变 , 2009,
Abstract: ?背景与目的:研究食管癌细胞ezrin基因启动子的tpa反应性以及tpa诱导ezrin基因转录的mapk信号转导途径。材料与方法:应用转录因子数据库分析预测ezrin基因-87/+134序列的潜在转录因子结合位点和tpa反应元件;采用双荧光素酶报告基因分析系统,检测ezrin基因-87/+134序列的启动子活性和tpa反应性,tpa反应元件结合蛋白sp1和ap-1对ezrin基因的转录激活作用,以及mapk抑制剂对tpa诱导激活的ezrin基因转录的抑制作用。结果:ezrin基因-87/+134序列存在潜在tpa反应元件,具有启动子活性;5ng/mltpa显著增强ezrin基因启动子活性(p<0.01);sp1和ap-1对ezrin基因具有转录激活作用;mek1/2特异性抑制剂u0126和pd98059降低tpa诱导的ezrin基因转录激活作用。结论:食管癌细胞中,ezrin基因启动子具有tpa反应性;tpa可能通过mek/erk1/2磷酸化sp1/ap-1途径调控ezrin基因转录。
肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的顺式作用元件及转录因子的鉴定
高书颖?,李恩民?,孟令英?,崔磊?,袁华敏?,,许丽艳?
生物化学与生物物理进展 , 2009,
Abstract: 研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞a549为材料,首先采用双荧光素酶报告基因分析系统检测ezrin基因5′侧翼嵌套缺失序列和位点突变序列的转录活性,鉴定肺癌细胞中ezrin基因的基本启动子区以及关键的顺式作用元件sp1结合位点(-75/-69)和ap-1结合位点(-64/-58).其次,利用凝胶电泳迁移率变动分析证明,肺癌细胞核蛋白提取物能够与ezrin基因含有关键顺式作用元件的dna序列结合,形成dna-核蛋白复合物,而且sp1结合位点和ap-1结合位点与重组蛋白rhsp1和rhap-1的结合具有位点特异性.最后,利用瞬时转染实验证实,转录因子sp1和ap-1(由c-jun和c-fos组成的异源二聚体)分别通过sp1结合位点和ap-1结合位点,增强ezrin基因基本转录活性,而且,过表达转录因子sp1、c-jun或c-fos上调了ezrin蛋白表达.研究确定,肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的关键顺式作用元件是sp1结合位点(-75/-69)和ap-1结合位点(-64/-58),与之作用的转录因子sp1和ap-1对于ezrin基因的转录激活作用至关重要.
ngal基因新型tpa反应元件结合蛋白的研究
孟令英?,缪成贵?,,蔡唯佳?,许丽艳?,李恩民?
生物化学与生物物理进展 , 2008,
Abstract: 以往研究发现,食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,ngal)基因的过表达具有明显的12-o-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(12-o-tetradecanoylphorbol-13-acetate,tpa)诱导性,在启动子-152~-60区段存在着一种新型的tpa反应元件(tparesponseelement,tre),但是该元件的结合蛋白尚未被鉴定出来.采用寡核苷酸dna亲和层析法(oligonucleotidetrapping)从食管癌细胞中分离纯化了ngal基因tre结合蛋白;经sds-page进一步分离,银染显示目标蛋白带.人工切取各目标蛋白带进行maldi-tof-ms分析,通过mascot软件搜索ncbi数据库,根据蛋白质的功能、细胞定位和分子质量大小等指标确定8个核蛋白因子:c19、kiaa1949、tdrd1、rxrβ、fam54a、klf15、klf10和yy-1.最后,利用rt-pcr验证了这些核蛋白因子表达的tpa反应性,结果表明c19、kiaa1949、tdrd1、rxrβ和klf15等编码基因的转录表现出了明显的tpa反应性,提示可能是食管癌细胞中应答tpa刺激,参与ngal基因过表达的转录激活因子.
食管腺癌dna拷贝变化相关基因的生物信息学分析
,邱晓阳,林旋豪,詹晓芬,王媛媛,王少洪,沈金辉
癌变·畸变·突变 , 2015,
Abstract: ?目的:探讨食管腺癌dna拷贝变化相关基因所涉及的功能、信号通路,蛋白-蛋白相互作用及表达相关性。方法:从3篇利用全基因组关联分析(gwas)技术大规模分析食管腺癌临床样本的文献,收集120个食管腺癌dna拷贝变化相关基因,进行生物信息学分析,包括基因功能富集分析,蛋白-蛋白相互作用网络的构建,表达谱聚类及表达相关性。结果:基于基因本体论的功能富集分析显示食管腺癌dna拷贝变化相关基因最显著的功能是转录调控。信号通路富集分析富集基因数量最多的kegg信号通路为“pathwayincancer”。dna拷贝变化相关基因的蛋白-蛋白相互作用网络含3356个蛋白节点和63474条边。该网络具有无尺度特点。利用公共的食管腺癌表达谱分析显示食管腺癌dna拷贝变化相关基因表达谱聚类几乎能够将食管腺癌组织与正常食管组织完全区分,而且dna拷贝变化相关基因之间在该表达谱中有显著的表达相关性。结论:本研究利用生物信息学方法,对食管腺癌dna拷贝变化相关基因进行深入的分析,为将来实验验证这些基因在食管腺癌发生发展中的生物学功能奠定基础。
哺乳动物细胞cdk2系列表达载体的构建与表达
吴健谊,蒋太峰,谢剑君*,张锴,,许丽艳
癌变·畸变·突变 , 2011,
Abstract: ?目的:构建一系列细胞周期蛋白依赖激酶2(cyclin-dependentkinase2,cdk2)在哺乳动物细胞的表达载体,为研究cdk2的功能和修饰提供实验材料。方法:从食管癌细胞中提取总rna,逆转录pcr扩增cdk2编码区,然后将pcr产物克隆到t载体;扩增后的cdk2片段分别亚克隆入pcdna3、pcdna4、pntap和pegfp等4种哺乳动物表达载体;最后,将获得的表达载体pegfp/cdk2转染小鼠成纤维细胞nih3t3进行初步的cdk2表达分析。结果:rt-pcr扩增获得约900bp的目的片段,经t载体克隆和dna序列分析,显示重组片段是人cdk2基因序列;cdk2片段分别亚克隆入上述4种载体后获得相应表达载体;运用构建的pegfp/cdk2表达载体,在nih3t3细胞中表达出cdk2蛋白。结论:成功构建了cdk2的哺乳动物细胞系列表达载体,并在nih3t3细胞中成功表达目的蛋白。
建立在芯片与生物信息学预测基础上的mirna靶基因鉴定研究进展
张海峰,吴炳礼,方国强,,黄 俏(综述),许丽艳,李恩民(审校)
癌变·畸变·突变 , 2009,
Abstract: ?microrna(mirna)是一类长度约22个核苷酸(nt)的非编码单链小rna分子。近年来,大量的研究证明,mirna参与了许多重要的生物学过程,其异常表达在肿瘤的发生发展中扮演着癌基因或抑癌基因的角色。关于与肿瘤相关mirna的实验研究方案通常包括4个步骤:①通过基因芯片技术对癌组织与配对的正常组织中差异表达的mirna进行筛查,确定候选mirna;②通过生物信息学软件对所获差异表达的mirna进行靶基因预测,为后续鉴定差异表达mirna的靶基因提供线索;③通过risc免疫共沉淀、稳定同位素标记蛋白质谱或mirna_mrna复合物分析等实验方法对mirna的靶基因进行实验室鉴定;④分析差异表达的mirna及其靶基因与病理、肿瘤复发转移情况以及生存期等临床指标之间的相关关系,确定mirna的肿瘤生物学意义。在本文中,结合我们实验室最近利用基因芯片技术研究食管癌中差异表达mirna及其靶基因的实验结果,综述了目前mirna及其靶基因鉴定方面的最新研究进展。
试论劫持航空器罪

法学家 , 1998,
Abstract:
间接故意犯罪形态论

法学家 , 2000,
Abstract:
cd44v6和ezrin与大肠腺瘤癌变及预后的关系
王媛媛,邱晓阳,况丽平,吴智勇,姚晓东,,王少洪,沈金辉,*
癌变·畸变·突变 , 2015,
Abstract: ?目的:探讨cd44v6和ezrin在大肠腺瘤癌变中的表达及其与临床病理指标和预后的关系。方法:应用免疫组化检测cd44v6和ezrin蛋白在大肠腺癌(80例)、腺瘤伴低级别上皮内瘤变(40例)、腺瘤伴高级别上皮内瘤变(20例)及正常黏膜(20例)中的表达,分析其表达与临床病理指标及生存时间的关系。结果:cd44v6和ezrin在腺瘤伴高级别上皮内瘤变和腺癌组的表达高于正常黏膜及腺瘤伴低级别上皮内瘤变组,差别有统计学意义(p均<0.05)。二者在淋巴结有转移组、有浆膜层浸润组、iii~iv期的表达分别高于淋巴结无转移组、无浆膜层浸润组及i~ii期,差别均有统计学意义(p均<0.05)。cd44v6和ezrin表达与患者生存时间相关(log-rank=18.587,p<0.05;log-rank=7.804,p<0.05)。cox回归多因素分析显示cd44v6是独立的预后危险因素(hr:7.582,95%ci:1.605~35.815,p=0.011)。结论:cd44v6和ezrin的表达与大肠腺瘤癌变、浸润和转移相关,联合检测cd44v6和ezrin的表达对判断大肠腺瘤癌变及预后具有参考价值。
ngal蛋白诱导食管癌细胞发生自噬
张丕显?,方王楷?,许丽艳?,蒋纪恺?,沈忠英?,,陆晓峰?,周飞?,谢剑君?,吴炳礼?,崔有宏?,谢东?,李恩民?
生物化学与生物物理进展 , 2009,
Abstract: 以往研究证明,中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白ngal(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin)与食管癌密切相关,改变ngal表达能够对癌细胞的形态结构产生明显影响,但确切的作用机制不明.在酵母细胞中表达ngal蛋白,柱层析分离纯化.筛选ngalr(ngalreceptor)高表达与弱表达的人食管癌细胞系ec1.71和ec109作为实验细胞模型.5-fam标记ngal蛋白,加入到细胞培养上清中,对比研究ngal蛋白入胞情况、细胞形态学改变、细胞自噬体产生、自噬相关基因表达、细胞内铁离子与铁蛋白水平以及相关细胞信号转导激酶的活性等.结果表明,ngal蛋白可经由内吞途径进入食管癌细胞发挥作用,致使细胞发生典型的自噬性形态结构变化,自噬体大量产生,自噬相关基因的表达发生相应变化,erk被激活,但细胞内的铁离子与铁蛋白未受明显影响.上述结果提示,诱导细胞发生自噬是外源性ngal蛋白经由内吞途径进入食管癌细胞发挥作用的机制之一,与ngal蛋白跨膜转铁未见直接关联,而erk信号转导途径可能参与了这一过程.
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