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表达vWF蛋白的重组BHK细胞的无血清培养
,孙祥明,张元兴
华东理工大学学报 , 2004,
Abstract: 采用HADAMARD统计设计方法建立了适于重组BHK细胞培养和vWF蛋白表达的无血清培养基SFMA。用SFMA进行重组BHK细胞的批培养,细胞生长明显优于有血清培养(DMEMFBS(φPRS=0.05))和无血清培养基SFM-Ⅱ的培养,最大细胞密度可分别提高16.7%和40%。同时,在培养的96h,蛋白的表达水平比有血清培养提高了18.7%,SFMA维持培养48h的vWF蛋白的表达水平比SFM-Ⅱ提高了50%。
温度对重组BHK细胞生长、代谢和vWF蛋白表达的影响
,孙祥明,张元兴
华东理工大学学报 , 2007,
Abstract: 通过重组幼仓鼠肾细胞(BHK细胞)在不同温度下的批培养和脉冲培养,研究了温度对重组BHK细胞生长、代谢以及血管性血友病因子(vWF)蛋白表达的影响。相对于37℃,升高和降低温度的培养都降低了细胞的生长速率和密度,降温的作用更明显,主要表现为延长了细胞生长的迟滞期。在不同温度的脉冲培养中,细胞的比生长速率变化不大,表明进入对数生长期后,细胞生长对一定范围的温度变化不敏感。培养温度对细胞群体中处于S期的细胞比例影响不大,但在33℃和39℃下培养,细胞群体中处于G0/G1期的细胞比例有明显升高,处于G2/M期的细胞比例下降。当培养温度降低到33℃时,细胞群体中发生凋亡的细胞数随着温度升高而增加。温度的降低能显著提高单个细胞的vWF蛋白表达能力,在33℃下培养,vWF平均比生产速率提高了45%。
外源PDI基因导入CHO细胞及其对HBsAg分泌的影响
蔡振荣,,张元兴
生物技术通报 , 2009,
Abstract: 在前期的研究工作中发现,当培养基中添加1.5%DMSO(二甲基亚砜)会使CHO细胞的HBsAg(乙肝表面抗原)产量提高80%以上。与此同时,DMSO引起了HBsAg在细胞胞内的大量积累,其含量提高了8倍。同时,DMSO引起了CHO细胞中PDI(二硫键异构酶)含量降低。由此怀疑是由于PDI不足造成了HBsAg的胞内积累。根据NCBI上查阅到的中华仓鼠小肠中PDI基因序列,通过RT-PCR的方法,从CHO细胞中获得了PDI序列,并构建重组质粒pGFP-PDI。通过阳离子脂质体转染技术,导入外源PDI,使各单克隆CHO细胞的PDI酶活提高30%~90%。但分析这些克隆在1.5%DMSO下HBsAg的胞内积累情况,发现没有改善,从而排除了PDI不足而引起外源蛋白积累的可能。
重组cho-gs细胞降低氨毒副作用的代谢研究
张芳 孙祥明 张元兴*
生物工程学报 , 2006,
Abstract: 在重组cho-gs细胞无血清批培养过程中,由于gs系统的引入,使氨对细胞的毒副作用显著降低,从而引起细胞生长和代谢途径发生变化。当起始氨浓度为1.42mmol/l时,细胞最高密度可达到15.6×105cells/ml,随着氨浓度的增加,尽管细胞生长受到一定的抑制,但在氨浓度为12.65mmol/l时,细胞密度仍可达到8.9×105cells/ml。当起始氨浓度从0.36mmol/l增加到12.65mmol/l时,细胞对葡萄糖的得率系数和乳酸对葡萄糖的得率系数降低,己糖激酶(hk)、丙酮酸激酶(pk)和乳酸脱氢酶(ldh)酶活分别提高了43%、140%和25%,表明细胞对葡萄糖的利用增加,糖代谢更倾向于高能量生成途径。在谷氨酰胺代谢途径中,氨促进了谷丙转氨酶(gpt)酶活,谷氨酸到α-酮戊二酸的转化逐渐倾向于谷丙转氨途径,谷氨酸脱氢酶(gdh)酶活降低,脱氨途径相应受到抑制。此外,氨浓度的增加使细胞群体处于g0/g1期的比例逐渐升高,当氨浓度为12.65mmol/l时,重组蛋白比生产速率比氨浓度为0.36mmol/l时提高了2.1倍。
重组hsv-ⅱ病毒疫苗的微载体悬浮培养生产工艺研究
林美玲,唐寅,张明,,黄明志
中国生物工程杂志 , 2014,
Abstract: 经过重组减毒的ⅱ型溶瘤单纯疱疹病毒(rhsv-ⅱ)在体外具有良好的溶瘤效果,并对小鼠体内b16r黑色素瘤内注射具有较高的疗效。重组hsv-ⅱ病毒作为高效的新型溶瘤病毒疫苗有望用于肿瘤的临床治疗。vero细胞是广泛应用于病毒疫苗生产的细胞基质,该细胞系对多种病毒敏感且产量高,其微载体培养安全,开发重组hsv-ⅱ溶瘤病毒肿瘤疫苗的vero细胞微载体反应器悬浮培养生产工艺具有重要的意义。以自主开发的低血清培养基为基础,对vero细胞的反应器微载体球转球转移放大工艺及在位消化放大培养工艺进行了研究和比较,以新老微载体比3:1的比例成功实现了微载体球转球转移放大,建立了可实现至少四次/级连续放大的球转球转移放大培养工艺,可用于工业化生产过程。在此基础上,初步建立了以vero细胞为基质的重组hsv-ⅱ病毒疫苗反应器微载体无血清悬浮培养生产工艺,最大病毒滴度可达到6.62lgtcid50/ml以上。为以vero细胞为基质的无血清病毒疫苗规模化培养提供了一种简便、高效的工艺方法。
mdck细胞微载体悬浮培养放大工艺研究
龚迪,,张元兴
中国生物工程杂志 , 2012,
Abstract: mdck细胞对各种流感病毒具有高度敏感性,广泛应用于流感病毒的分离和疫苗制备。通过探索培养基中促进细胞贴壁的关键组分,并筛选水解物,开发了适合mdck细胞生长的低血清培养基。发现钙、镁离子是细胞贴壁不可缺少的物质,麦麸水解物可以部分代替培养基中的血清。利用该低血清培养基,经过消化转移将mdck细胞从5l反应器放大至25l反应器,微载体上细胞贴附均匀、生长旺盛,25l反应器中培养48h细胞密度可达30.5×105cells/ml。研究结果为工业规模反应器微载体悬浮培养mdck细胞生产流感病毒奠定了基础。
二甲基亚砜作用下重组cho细胞胞内乙型肝炎表面抗原的定位
马浙永,,张元兴
中国生物工程杂志 , 2008,
Abstract: 在培养环境中添加二甲基亚砜(dmso)能分别提高重组cho细胞乙型肝炎表面抗原(hbsag)的产量和比生产速率70%和3.2倍以上,但同时发现胞内hbsag的积累量是对照组的7.2倍。为了分析胞内hbsag积累的区域,采用电镜技术分析后发现,经dmso处理后的cho细胞胞内出现了很多的扩张区域,这些扩张区域分布整个胞浆,有的扩张区域已经侵蚀到细胞核上,而对照组未发现明显的扩张区域。进一步利用免疫电镜技术分析后发现,经dmso处理后的细胞胞内大量积累的hbsag主要分布在这些扩张区域中,同时发现在细胞核膜上也有分布,这可能是由于扩张区域侵蚀细胞核造成的。以上工作有助于揭示在dmso作用下重组cho细胞胞内hbsag大量积累的机制。
pk-15细胞微载体悬浮培养生产猪细小病毒的工艺研究
李智力,,储炬,庄英,张嗣良
中国生物工程杂志 , 2015,
Abstract: 通过对猪细小病毒接毒时间toi、moi和收毒时间进行优化,开发了一种基于pk-15细胞静置培养的猪细小病毒生产工艺,最大病毒滴度达到107.5tcid50/ml。通过进一步优化接毒时间,成功建立了基于pk-15细胞反应器微载体悬浮培养的猪细小病毒培养工艺,在5l反应器上最大病毒滴度达到107.2tcid50/ml。首次发现乳酸对葡萄糖得率与病毒滴度的正相关性,当猪细小病毒滴度处于最大值时,乳酸对葡萄糖得率也达到最大值,可作为指针病毒滴度及收毒时间的重要参数。
世界遗产旅游的数字化管理研究用
Digital Management Study of World Heritage Tourism
 [PDF]


Modern Management (MM) , 2011, DOI: 10.12677/mm.2011.13041
Abstract: 近年来,中国的世界遗产地旅游热可谓有增无减、如火如荼,如何科学地引导庞大的游客群体和合理地利用宝贵的世界遗产,成为了摆在管理当局十分棘手的问题。针对世界遗产地旅游管理中的重点问题,如:游客流量控制、文化内涵展示、标识方向指引、灾害破坏防治、游客意见采集,本研究提出应该通过数字化管理实现游客分流、利用分级、信息分享,研判其必要性、分析优劣势、构建框架图,以提高世界遗产管理的科技含量和管理效率。
In recent years, China’s world heritage tourism is ever-increasing. It has become a difficult problem to the management authorities that how to scientifically guide tourists in large groups and rationally use valuable resources of world heritage. To the key issues of world heritage management, such as: controlling tourist flow, displaying cultural content, guiding identification direction, preventing disaster & damage, gathering tourists’ opinions, this study points out that we should diverge tourists, and classify utilization, and share information through digital management, while this study researches & judges its necessity and analyzes its strengths & weaknesses and constructs its framework graph, in order to improve scientific and technological content and management efficiency of world heritage management.
文化遗产的绿色低碳协同进化管理研究
Green and Low-Carbon Co-Evolution Management Study in Cultural Heritage
 [PDF]


Modern Management (MM) , 2011, DOI: 10.12677/mm.2011.13030
Abstract: 文化遗产是前人留给我们的宝贵财富,给我们带来了巨大的财富,也当然应该是我们留给后人的珍贵财富。但是,如何让文化遗产尽可能合理地留给后人呢?笔者认为应该把文化遗产与相关方放在一起,围绕绿色和低碳坐标,让它们协同进化。本文的创新点在于,把绿色低碳、质量生态系统、协同进化理论引入文化遗产研究,提出构建文化遗产生态系统,采用以自然生态为主的餐饮购娱、以绿色建筑为主的建筑能源、以绿色道路为主的交通运输协调进化方式,营造内外部环境,旨在实现文化遗产的绿色循环利用、生态互补、可持续发展。
Cultural heritage is a precious treasure which our predecessors left us, which brings us great wealth and also need to be left to our future generations as a precious wealth. However, how should our generations succeed or inherit cultural heritage as much reasonable as possible? The author believes that the stakeholders or relevant involvers and cultural heritage should be put together so that they can realize co-evolution around green and low-carbon coordinates. The innovation of this paper lies in introducing green and low-carbon & quality ecological system & co-evolution theory into cultural heritage study, constructing green ecological system, proposing the co-evolution mode of catering & merchandizing & entertainment systems based on natural ecosystem, and green energy system based on green building, and green transportation delivering system based on green road and travel, creating internal and external green environment, in order to achieve green recycling and ecological complementarities and sustainable development of cultural heritage.
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