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人源化抗Cry1B毒素蛋白单链抗体的原核表达及生物学活性测定
重新,张存政,张霄,刘媛,黄鹰,刘贤金
南京农业大学学报 , 2013, DOI: 10.7685/j.issn.1000-2030.2013.03.008
Abstract: 利用含有重组噬菌粒的噬菌体直接侵染大肠杆菌(Escherichiacoli)HB2151,原核分泌表达了抗苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)Cry1B毒素蛋白的单链抗体(singlechain-variablefragment,scFv),经纯化、鉴定抗原结合活性后,建立了Cry1B毒素蛋白的ELISA检测方法。方法以展示scFv抗体的重组噬菌体感染E.coliHB2151,经PCR和基因测序检测克隆scFv基因片段的完整性,用SDS-PAGE方法检测scFv在E.coliHB2151宿主菌中的表达水平,用ELISA测定法检测scFv的抗原结合活性,通过时间梯度优化获得可溶性表达蛋白的最佳培养时间。结果表明经PCR、DNA电泳及基因测序等,均证实重组噬菌体对E.coliHB2151宿主菌侵染成功,SDS-PAGE电泳结果表明scFv抗体表达成功,纯化后的蛋白质量浓度为132μg?mL-1。以纯化的scFv蛋白为基础建立了对Cry1B毒素蛋白的间接竞争ELISA法,方法的抑制中质量浓度(IC50)为1.398μg?mL-1,最低检测限(IC10)为0.0257μg?mL-1,线性检测范围为0.5~5.0μg?mL-1,scFv对Cry1C的交叉反应率为7.51%;与Cry1Ab、Cry1Ac的交叉反应率均小于0.1%;在培养温度30℃,1mmol?L-1IPTG诱导条件下,scFv在E.coliHB2151宿主中的最佳诱导表达时间为12h。本研究成功地将抗Cry1B毒素蛋白的scFv在E.coliHB2151中进行了可溶性表达,获得了具有抗原结合活性的scFv融合型抗体,为实际生产应用与试剂盒研发提供了基础。
柠檬烯对食源性病原菌的抑菌活性(英文)
卢海燕,重新,张宵,梁颖,刘贤金
- , 2016, DOI: 10.3785/j.issn.1008-9209.2015.07.141
Abstract: 研究了柠檬烯乳化液以及柠檬烯丙酮溶液对3种食源性病原菌的抑菌活性。滤纸片扩散试验表明,对小肠结肠炎耶尔森菌Yersinia enterocolitica的抑菌活性高低为氧氟沙星(阳性对照)>500 μL/L柠檬烯丙酮溶液>5 000 μL/L柠檬烯丙酮溶液>柠檬烯乳化液>50 μL/L柠檬烯丙酮溶液>丙酮(溶剂对照),抑菌圈分别为46.8,32.2,27.4,17.1,14.5,9.2 mm; 对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus活性最高的是阳性对照,其次是50 μL/L柠檬烯丙酮溶液,抑菌圈达30.3 mm; 柠檬烯丙酮溶液对单核增生李斯特菌Listeria monocytogenes具有抑菌圈,但与丙酮的抑菌圈大小相似,而柠檬烯乳化液未表现出抑菌活性,说明柠檬烯对该菌没有抑制作用,溶剂丙酮具有一定的抑菌活性。试管梯度试验表明,柠檬烯乳化液和柠檬烯丙酮溶液对小肠结肠炎耶尔森菌和金黄色葡萄球菌具有抑菌活性,对单核增生李斯特菌没有活性,且柠檬烯丙酮溶液的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度远低于柠檬烯乳化液,说明前者的抑菌活性更好。所选3种食源性病原菌中,小肠结肠炎耶尔森菌对柠檬烯最为敏感,金黄色葡萄球菌次之,单核增生李斯特菌最不敏感。
Abstract: The effects of limonene emulsion and limonene acetone solution on 3 species of food-borne pathogens were studied. The results of the agar diffusion test indicated that the order of the antibacterial effect on Yersinia enterocolitica was ofloxacin (positive control) > 500 μL/L limonene acetone solution > 5000 μL/L limonene acetone solution > limonene emulsion > 50 μL/L limonene acetone solution > acetone (solvent control), with the inhibition zone diameters of 46.8, 32.2, 27.4, 17.1, 14.5, 9.2 mm, respectively. Except the positive control, the most effective one on Staphylococcus aureus was 50 μL/L limonene acetone solution (the inhibition zone diameter was 30.3 mm). The inhibition zones of limonene acetone solution and acetone to Listeria monocytogenes were similar, while there was no inhibition zone of limonene emulsion, which indicated that it was acetone but not limonene that had the antibacterial activity to L. monocytogenes. The tube dilution test showed that limonene was effective to Y. enterocolitica and S. aureus, but not to L. monocytogenes. Limonene acetone solution showed higher antibacterial activity with lower values of minimal inhibitory concentration and minimal bactericide concentration than limonene emulsion. Among the three selected food-borne pathogens, Y. enterocolitica was the most sensitive one to limonene, followed by S. aureus, and L. monocytogenes was the least sensitive one.
玉米赤霉醇特异性单克隆抗体及其胶体金检测试纸的研制
刘媛,文孟棠,张霄,重新,杨晶祎,张留娟,王恒,何鑫,梁颖,郑勤,夏兴霞,刘贤金
核农学报 , 2015, DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2015.06.1101
Abstract: 为了研究国内制备的玉米赤霉醇单克隆抗体,与其同系物玉米赤霉烯酮交叉反应严重,实际检测存在假阳性的问题,本试验开展了玉米赤霉醇特异性识别单克隆抗体及其胶体金检测试纸的研制工作。试验采用玉米赤霉醇-16-羧丙基醚与牛血清白蛋白偶联,免疫雌性Balb/c系小鼠;利用单克隆抗体技术完成杂交瘤融合,并用非竞争及竞争ELISA法,对阳性克隆进行鉴定。杂交瘤诱生腹水后,经亲和纯化,用于15nm胶体金标记,制作玉米赤霉醇胶体金检测试纸。融合细胞经筛选,最终对3株杂交瘤细胞建株,结果均为IgG1型。其中Mab-1A8诱生腹水效价高达1:1.28×107,对玉米赤霉醇抑制中浓度(I50)为10.25ng·mL-1,检测灵敏度(I10)为1.96ng·mL-1,线性检测范围在2.96~35.46ng·mL-1,对同系物玉米赤霉烯酮的交叉反应率小于0.1%。试验研制的玉米赤霉醇胶体金试纸,检测阈值为2.5μg·mL-1,检测时间为10min。本研究制备了一种新型玉米赤霉醇特异性单克隆抗体,并研制了以单抗为基础的玉米赤霉醇胶体金快速检测试纸,为玉米赤霉醇残留快速检测提供了灵敏、便捷的新方法。
间接竞争时间分辨荧光免疫分析法检测稻米中Cry1C毒素
重新,杨晶?,陆梦晓,仲建峰,张存政,张霄,何鑫,刘媛,刘贤金
南京农业大学学报 , 2014, DOI: 10.7685/j.issn.1000-2030.2014.06.007
Abstract: 利用免疫新西兰大白兔制备Cry1C毒素多克隆抗体,建立间接竞争时间分辨荧光免疫分析(CI-TRFIA)方法,用于稻米中Cry1C毒素的残留检测。通过4次免疫,采集Cry1C毒素多克隆抗体血清,并用饱和硫酸铵沉淀和ProteinA柱纯化,测定抗体效价;以制备Eu-N1标记的羊抗兔IgG作为检测抗体,建立Cry1C毒素的CI-TRFIA检测方法,并进行抗原类似物的特异性分析和Cry1C毒素在稻米中的添加回收试验。结果表明获得的多克隆抗体质量浓度为3.86mg?mL-1,效价为148000;建立的CI-TRFIA检测方法,其灵敏度(IC10)为0.074ng?mL-1,中抑制浓度(IC50)为60.16ng?mL-1,线性检测范围(IC20~IC80)为0.96~1633.60ng?mL-1;对Cry1B、Cry1Ab和Cry1Ac均有一定的交叉反应;添加回收试验的批内、批间回收率为84.53%~107.12%,变异系数为6.05%~11.24%。结论该检测方法稳定性和重复性较好,可以满足Cry1C毒素的检测要求。
豫西雨水资源开发利用途径探析
陈维杰,重新,李 战
中国生态农业学报 , 2006,
Abstract: 简析了豫西山丘区雨水资源利用现状,并提出该区雨水资源利用模式与开发途径。
浑椿河小流域综合治理效益探析
陈维杰,重新,许金师,李 占
中国生态农业学报 , 2005,
Abstract: 阐明了在浑椿河小流域开展综合治理对减少水土、肥流失,改善当地生态环境,促进农、林、牧、副诸业发展的作用,并分析了小流域综合治理的近期和远期效益。
浑椿河小流域综合治理效益分析
陈维杰,重新,李战,许金师
生态学杂志 , 2003,
Abstract: ?河南省汝阳县浑椿河小流域是水利部淮委的"试点"小流域之一.本文通过介绍其在1986~1999年的治理经验与近几年的效益发挥情况,研究探讨了水土保持对减少水、土、肥流失及增加当地农、林、牧、副诸业所起的作用,并进行了近、远期效益综合分析.虽然其中对减少的土壤侵蚀及相应增加的作物经济效益估算是粗略的,但初步分析结果表明,开展水土保持小流域综合治理在经济上是合理可行的.
矿井主要通风机扩散器结构优化及实验
陈世强,王海桥,李轶群,重新
煤炭学报 , 2009,
Abstract: 根据工程现场实际,利用重整化群(RNG)湍流模型进行了倾斜式扩散器28个工况的数值计算分析,基于相似准则进行了该扩散器5个工况的模型实验分析.通过对比分析2种研究手段的结果,指出倾斜式扩散器的结构与来流速度分布不匹配.利用构建的非均匀平面来流与虚拟汇的速度势叠加方程,构造出节能型扩散器轮廓线;借助数值计算与模型实验,指出该型扩散器的最优断面系数值为2.28.通过对比分析节能型扩散器的模型实验及数值计算结果,得出该型扩散器的结构与来流速度分布基本匹配.
The ways of rain resource exploitation in the west of Henan
豫西雨水资源开发利用途径探析

CHEN Wei-Jie,LI Chong-Xin,LI Zhan,
陈维杰
,重新,李 战

中国生态农业学报 , 2006,
Abstract: The current status of rain(resource) exploitation in the west of Henan is stated and the using models and(exploiting) ways of rain resource in this area are put forward.
Analysis on the benefits of a comprehensive treatment of Hunchun River Valley
浑椿河小流域综合治理效益探析

CHEN Wei-Jie,LI Chong-Xin,XU Jin- Shi,LI Zhan,
陈维杰
,重新,许金师,李 占

中国生态农业学报 , 2005,
Abstract: The functions of a comprehensive treatment of soi l and water conservation on the decrease of loss of the soil,water and fertilizer and the promotion of the development of agriculture, forestry,animal husbandry, si deline and so on in Hunchun River Valley are stated.And the far and near benefit s of the comprehensive treatment of the valley are analyzed.
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