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细菌磷代谢的分子调控
夏琪,
微生物学通报 , 1998,
Abstract: 细菌的磷代谢通常是由一种两组分调节系统即磷酸盐调节子(Phoregulcn)所控制。所谓两组份调节系统,是指控制一大类细菌适应性反应、由结构和功能类似的两种同源蛋白族的成员组成的一类信号传导系统。其中磷酸盐调节子是研究较为深人的一种重要的两组分调节系统,它为细菌的正常磷代谢提供了保证。l细菌两组分调节系统两组分调节系统在细菌中是很常见的,目前已在十多种细菌中发现,仅在大肠杆菌中就可能有五十多种1]。近年来,类似的传导系统在真核生物中也有发现,如酵母2.3]和植物4]一般说来,组成细菌两组分调节系统的两种蛋白分…
在非蛋白氮(NPN)和甲醛处理日粮条件下几种与瘤胃氮代谢有关酶活力的研究
,韩正康
南京农业大学学报 , 1986, DOI: 10.7685/j.issn.1000-2030.1986.02.011
Abstract: 在装有永久性瘤胃和皱胃瘘管的四头阉湖羊和三头成年母水牛上,用异丁叉二脲(IBDU)代替湖羊日粮的部分粗蛋白,可使瘤胃脲酶和谷氨酸脱氢酶(GDH)的活力分别增高26.2%、17.3%NAD(辅酶Ⅰ)-GDH和37.9%NADP(辅酶Ⅱ)-GDH。水牛在稻草期补饲两种比例的硫酸铵-尿素及能量饲料(试验Ⅱ),则瘤胃脲酶和脱氢酶活力升高,分别为对照期的1.9倍,1.4倍(试验Ⅰ)和4.6倍、3.3倍(试验Ⅱ)。用0.35%甲醛处理的大豆粉,在体外人工瘤胃培养时,氨基酸和氨的释放水平都低于对照组。而在湖羊的体内试验中,瘤胃蛋白酶活力不受影响,但脱氢酶活力降低6.9u/100ml。大豆胰蛋白酶抑制剂可作用于瘤胃蛋白酶,大豆脲酶则能为0.35%的甲醛所抑制。青刈期湖羊瘤胃每日灌注0.4g甲醛,能够减弱瘤胃蛋白酶和脱氢酶的活力。湖羊瘤胃蛋白酶主要存在于微生物体,最适pH约为7;到达皱胃酸性环境中,微生物蛋白酶活力几乎丧失。
提高富含GC碱基DNA模板PCR扩增效率的方法
邢小黑,
南京农业大学学报 , 1999, DOI: 10.7685/j.issn.1000-2030.1999.03.029
Abstract: 地中海拟无枝菌酸菌U32是一株高产力复霉素的放线菌,其中的pKp基因是U32次生代谢的重要调控信号分子,属蛋白激酶类。研究该基因的结构功能对阐明U32的次生代谢机制具有重要意义。为了首先使该基因在BL21中得到表达,利用PCR方法从克隆有该基因的pCZ8质粒中扩增出pKp基因。由于pKp基因的碱基组成富含GC,因而PCR难度大。本研究通过改善反应体系和扩增条件,获得了大量特异性的PCR产物。1 材料和方法1?1 材料质粒抽提试剂盒购自Whatman公司,TaqplusⅡ、dNTP购自Sangon公司,引物由TakaRa公司合成,PCR扩增仪为Pharmacia产品。1?2 方法质粒提取根据试剂
反刍动物瘤胃微生物酶类膜消化(触壁消化)的研究
,韩正康
牲畜兽医学报 , 1991,
Abstract:
H2O和SO2对V2O5/TiO2催化剂选择性催化还原烟气脱硝性能的影响
, 高翔,
中国电机工程学报 , 2013,
Abstract: 通过浸渍法制备了V2O5/TiO2催化剂,考察了H2O和SO2对该催化剂NH3选择性催化剂还原NO性能的影响。结果表明,H2O对V2O5/TiO2催化剂上的选择性催化还原反应具有一定抑制作用,但是同时能够抑制N2O的生成。SO2在干烟气条件和湿烟气条件(?(H2O)?10%)下对V2O5/TiO2催化剂上NO还原活性影响不大。H2O的存在增加了催化剂表面的Br?nsted酸性位,提高了NH3在催化剂表面上的吸附。催化剂的脱硝活性随着反应气氛中H2O体积分数的增加而降低,可能是因为大量水蒸气的出现抑制了吸附于Br?nsted酸性位上的NH2+离子与NO的反应。SO2在V2O5/TiO2催化剂表面形成SO42?,SO42可能增加了表面酸性,有助于提高选择性催化还原反应速率。
产溶剂梭菌分子遗传操作技术研究进展
顾阳?,杨晟?,
生物工程学报 , 2013,
Abstract: 产溶剂梭菌是一类重要的工业微生物。通过遗传改造以优化产溶剂梭菌的发酵性能一直是溶剂制造技术研究的重要课题,但长期受限于该类菌并不完善的遗传操作工具,未见明显突破。近年来,随着targetron基因中断、大片段基因整合等新技术和新方法的出现,其分子遗传改造已取得较大进展。文中对产溶剂梭菌的分子遗传操作工具研究进展进行了总结,并指出了现有技术在效率及全面性方面的不足。基于此,今后应进一步优化现有的梭菌基因失活技术,如建立基于同源重组的基因删除和替换;同时也应发展新的分子操作技术,如基因组多位点共编辑、多拷贝定点和随机整合等。
定点突变提高D-氨甲酰水解酶的可溶性表达
袁野,蔡渊恒,世民,
生物技术通报 , 2012,
Abstract: 采用定点突变的方法对皮氏伯克霍尔德氏菌(Burkholderiapickettii)来源的D-氨甲酰水解酶(D-carbamoylase,DCase)编码基因的3个位点A18、Y30、K34进行突变,并将获得的突变体基因片段构建入高表达载体pET-28b中,转化E.coliBL21(DE3),获得带有组合三突变(A18E/Y30D/K34E)的DCase-SM表达菌株BL21/pET-DCSM。当以IPTG诱导目的蛋白表达时,发现突变菌株(DCase-SM)与出发菌株(DCase)菌株相比,目的蛋白的可溶性表达显著提高,其可溶蛋白比例约为64%;与出发菌株相比,其单位菌体酶活增加427%;另外,与本实验室前期构建的高可溶性三叠加突变体菌株DCase-M3相比,单位菌体酶活亦增加7.9%。
肠杆菌膦酸酯代谢途径中phnF基因的研究
夏琪,,刘扬,赵国屏
生物工程学报 , 1998,
Abstract: 大肠杆菌的phn操纵子与膦酸酯(Pn)的利用密切相关。实验利用PCR扩增、TA克隆等方法.获得了大肠杆菌phn操纵子中phnE、phnF和phnG基因的亚克隆,并进行了序列测定。通过P1噬菌体转导,构建了phnF的TnphoA’-9转座子插入突变体JW19,该突变仅对大肠杆菌的AEPn同化有微弱的影响,而利用phnE和phnG序列与染色体重组构建的phnF全缺失突变株JW67,则几乎不能在.AEPn培养基上生长。通过phnF基因的诱导高表达,用亲和柱层析分离纯化了PhnF。蛋白,达到电泳纯。并且用凝胶延滞的方法观察到,PhnF蛋白与加phn操纵子DNA片段相互作用后,可使凝胶图谱类型发生改变。
地中海拟无枝菌酸菌U32中生物素羧基载体蛋白结构基因的克隆、表达及转录
卢捷,姚玉峰,,焦瑞身
微生物学报 , 2003,
Abstract: 乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl CoA Carboxylase EC 6.4.1.2, ACC)催化依赖于ATP的乙酰辅酶A羧化形成丙二酸单酰辅酶A,该反应是脂肪酸生物合成途径中的第一步,也是受到调控的关键一步。根据结核分枝杆菌(M. tuberculosis)和天蓝色链霉菌(S. coelicolor)中ACC-α亚基的氨基酸保守序列和地中海拟无枝菌酸菌U32对氨基酸密码子的使用偏好,设计简并引物以U32基因组DNA为模板扩增出一条约250bp的片段,并以此片段作探针成功地从U32基因组cosmid文库中克隆到相应的ACC-α亚基的编码基因accA。该基因对应的ORF长1797bp,编码一个598个氨基酸的蛋白,推算出的分子量是63,714Da;基因G+C mol%含量为70.1%,符合U32基因结构特征,距起始密码子GTG上游6个碱基处有链霉菌典型的RBS序列AGGAGG,并有生物素羧化酶特征的ATP结合区。利用pET28(b)系统构建表达载体,在E. coli BL21(DE3)中实现了accA的诱导表达,产物大部分以可溶形式存在,并通过Western Blot证明该蛋白上确有共价结合的生物素。Northern Blot分析了各种氮源对accA基因转录水平的不同影响。
一株产多种β-内酰胺类抗生素酰化酶菌株的筛选
朱颂成,黄曦,赵国屏,
微生物学报 , 2003,
Abstract: 为了从大量的候选菌株中快速筛选头孢菌素酰化酶产生菌,设计并合成了一系列头孢菌素酰化酶的底物类似物。这些酰胺类的底物类似物由二部分组成,一部分为与头孢菌素相同或相似的侧链,另外一部分为发色基团或便于检测的基团。它们被酰化酶水解酰胺键以后可以方便快速的检测,因此用于对大量菌株进行快速筛选。采用这些化合物筛选到6株酰化酶阳性菌株。其中菌株ZH0650能够同时水解GL7ACA和多个底物类似物。进一步研究表明,该菌至少产生3种酰化酶,ADNABA酰化酶,青霉素G酰化酶和头孢菌素C酰化酶。我们初步纯化了ADNABA酰化酶和青霉素G酰化酶,并对头孢菌素C酰化酶的活力进行了鉴定。这是首次报道的可以产生青霉素G酰化酶和头孢菌素酰化酶等多种酰化酶的菌株,具有良好的应用前景。
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