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细胞有丝分裂马达蛋白的化学生物学研究与展望
刘行,
科学通报 , 2014, DOI: 10.1360/N972014-00300
Abstract: 微管马达驱动蛋白(kinesin,简称驱动蛋白)是一类沿着微管的特定方向行走的分子马达蛋白家族,在胞内运输和细胞分裂中扮演着重要角色.为了研究驱动蛋白的时空动力学特征,过去近15年的化学生物学研究发掘了一系列特异性的小分子抑制剂,为解析驱动蛋白的系统功能提供了有效的工具.由于部分驱动蛋白在实体瘤中活性异常增高,驱动蛋白小分子抑制剂渐渐发展成为癌症化疗的先导化合物.事实上,基于驱动蛋白Eg5(也叫KIF11)和CENP-E(着丝粒结合蛋白E)的小分子抑制剂已经进入Ⅰ期和Ⅱ期临床实验.本文将简介驱动蛋白的小分子抑制剂研究进展及临床转化研究前景.
动点马达蛋白的研究与展望
刘丹,金长江,
科学通报 , 2002,
Abstract: 动点是染色体着丝粒上的一个3层结构的特化部位,现在已经发现了CENP-E,动力蛋白(dynein)和MCAK三种定位于动点最外层——冠状纤维的马达蛋白,并且对它们的功能进行了深入的研究,细胞有丝分裂期的一些作用机制已经逐渐地展现在面前.对马达蛋白在活细胞染色体上运动的研究将有助于阐述其在染色体运动各个时期的分子机理.
纺锤体检验点的功能与染色体不稳定性
健晖,郑宇鹏,
科学通报 , 2002,
Abstract: 细胞生长和个体发育均依赖于母细胞将遗传物质(染色体)精确地分配给两个子细胞。在染色体分离过程中,纺锤体检验点起到了举足轻重的作用。染色体的正确分离是遗传信息稳定性的保证,而异常分离则产生染色体不稳定性,继而直接或间接地导致了一些疾病的发生,如先天愚型综合症和癌症等。动粒及其调控蛋白构成了纺锤体检验点,决定细胞有丝分裂过程中染色体分离的时空可调性。
纺锤体检验点的功能与染色体不稳定性
健晖,郑宇鹏,
科学通报 , 2002,
Abstract: 细胞生长和个体发育均依赖于母细胞将遗传物质(染色体)精确地分配给两个子细胞.在染色体分离过程中,纺锤体检验点起到了举足轻重的作用.染色体的正确分离是遗传信息稳定性的保证,而异常分离则产生染色体不稳定性,继而直接或间接地导致了一些疾病的发生,如先天愚型综合症和癌症等.动粒及其调控蛋白构成了纺锤体检验点,决定细胞有丝分裂过程中染色体分离的时空可调性.
Chk1防止DNA损伤的S期肿瘤细胞进行异常的有丝分裂
李小方,Tarsha,Ward,,吴家睿
科学通报 , 2009,
Abstract: 为探讨在p53失活的肿瘤细胞中DNA甲基化试剂引发的DNA损伤对于细胞周期的影响,我们将同步化在G1,S和G2/M期的HeLa细胞分别进行甲磺酸甲酯(MMS)处理.MMS的处理结果表明,各个时相的细胞周期进程均发生延迟或阻滞,其中S期细胞对药物最为敏感.进一步的分子机理研究表明,3个时相中ATM-Chk2和p38MAPK通路均被激活,但是Chk1仅在S期中被活化,提示Chk1特异地参与了S期的DNA损伤检查点(DNAdamagecheckpoint)或者DNA复制检查点(DNAreplicationcheckpoint)的作用.为了进一步确定Chk1在S期的检查点功能,用专一的小分子抑制剂抑制Chk1的磷酸化,发现被MMS处理的S期细胞能在未完成复制的情况下进行异常的有丝分裂,提示Chk1主要是在HeLa细胞S期的DNA损伤检查点而不是DNA复制检查点发挥其作用.另外,本研究还检查了参与G2/M期进程的cyclinB1的表达变化情况.在MMS处理的S期细胞中,cyclinB1表达量不能上调;而在加入Chk1抑制剂处理后,cyclinB1则有所增加.这一结果进一步支持DNA损伤S期细胞在Chk1失活时进入异常有丝分裂的推论.研究结果表明,Chk1是MMS诱发的HeLa细胞S期DNA损伤检查点的专一性的重要蛋白激酶;当MMS引发DNA损伤后,上游蛋白激酶对Chk1进行磷酸化,从而激活了S期的DNA损伤检查点,阻止细胞进入G2/M期.由于这一过程不依赖于p53的活性,因此Chk1有可能作为p53失活的肿瘤细胞的药物靶标.
哺乳动物驱动蛋白的计算基因组学分析与鉴定
薛宇,刘丹,符传孩,窦震,周庆,
科学通报 , 2006,
Abstract: 提供了一种新颖的、基于比较基因组学方法的全长驱动蛋白预测方法(full-lengthkinesinpredictionprogram,FKPP),用于哺乳动物中驱动蛋白质组的鉴定与研究.之前的预测认为,哺乳动物共含94个驱动蛋白,而用FKPP从哺乳动物的基因组中总共鉴定出134个可能的驱动蛋白基因.基于数据库中存在的片段序列,用FKPP鉴定出25个可能的全长驱动蛋白.此外,用FKPP方法发现人的动点马达蛋白CENP-E应包含2701个氨基酸,而不是当初根据克隆预测的2663个氨基酸.通过对CENP-E的cDNA进行重测序,并同时采用特异性识别FKPP预测的CENP-E多肽抗体予以实验评估,结果表明,FKPP预测的CENP-E氨基酸序列是正确的.为此,本研究利用FKPP对哺乳动物的驱动蛋白进行了重新分类.鉴于目前公共数据库含有较多非全长序列的蛋白片段,FKPP可提供一个具有显著效率且准确新颖的全长序列预测手段,用于驱动蛋白以及其他蛋白家族的分子鉴定.
蛋白激酶TTK与CENP-E相互作用并共定位于人细胞的动粒
张洁,符传孩,缪勇,窦震,
科学通报 , 2002,
Abstract: 纺锤体检验点(spindlecheckpoint)是一个重要的细胞分裂生化调节通路,监督染色体正确分离和传代,其信号传导主要通过两个蛋白激酶Mps1和Bub1/BubR1来调控.近期的研究发现动粒马达蛋白CENP-E与BubR1相互作用并参与纺锤体调控点的作用.为阐明纺锤体检验点分子调控机理,利用动粒蛋白质组学技术剖析人细胞动粒的蛋白质组成时发现了TTK蛋白——人细胞Mps1.揭示了TTK蛋白激酶定位于动粒,并与CENP-E相互作用,可能参与监控人细胞分裂过程中的染色体分离.
慢病毒介导的rna干涉对乳腺癌skbr3细胞her2受体的下调及生长抑制
程联胜,查昭,席甲甲,江冰,刘兢,
中国生物工程杂志 , 2007,
Abstract: 大约30%的乳腺癌中有表皮生长因子受体家族蛋白her2的过表达,此类癌症的预后差,恶性程度高。rna干涉(rnai)是最近发展起来能特异性抑制哺乳动物细胞中基因表达的新技术。本文在以往获得的能够产生良好基因沉默效应的小干涉rna(sirna)的基础上,构建了u6和h1双启动子sirna表达载体,并转染her2高表达乳腺癌skbr3细胞定量测定了其her2下调效应。随后,sirna表达盒经lr重组反应被克隆入慢病毒载体中,在成功包装成病毒后,感染skbr3并经荧光定量pcr、蛋白印迹杂交和流式细胞仪一系列实验证明慢病毒介导的rnai确实能有效地下调肿瘤抗原her2的表达。细胞长期增殖实验表明经慢病毒处理后细胞生长得到抑制。我们的研究为进一步阐明her2与癌症恶化的关系以及发展新的基因治疗药物提供了工具和可能。
鲜食青花椒热处理工艺
,
食品科学 , 2012,
Abstract: ?为了延长青花椒的贮藏期,以汉源青花椒为实验材料,采用高温蒸汽短时热处理方法,以挥发油含量和过氧化物酶(pod)酶活为指标,在研究蒸汽压力、蒸汽处理时间和载料量单因素试验基础上,进行box-behnken中心组合试验,利用响应面分析优化的最佳热处理工艺条件为蒸汽压力0.33mpa、蒸汽处理时间12.4s、载料量2696g/m2,在此条件下响应面模型预测的挥发油含量为0.41ml/20g。
Silencing of HER2 receptor and growth inhibition of SKBR3 breast cancer cells by lentiviral-mediated RNAi
慢病毒介导的RNA干涉对乳腺癌SKBR3细胞HER2受体的下调及生长抑制

CHENG Lian-sheng,ZHA Zhao,XI Jia-jia,JIANG Bing,LIU Jing,YAO Xue-biao,
程联胜
,查昭,席甲甲,江冰,刘兢,

中国生物工程杂志 , 2007,
Abstract: HER2, a member of epidermal growth factor receptor family proteins, is overexpressed in about 30% of human breast cancer. Increased levels of HER2 are associated with poor patient prognosis and enhanced metastasis. RNA interference (RNAi) is developed recently as a new technique which can inhibit gene expression specifically in mammalian cells. On the basis of previous study,in which two target sequences with favorable RNAi effect on HER2 were identified, a series of dual promoter siRNA-expressing vectors containing two opposing U6 and H1 promoters were constructed. After transfection of HER2-overexpressing SKBR3 breast cancer cells with the siRNA-expressing vectors, downregulation of HER2 was identified quantitatively. Subsequently, the siRNA-expressing cassettes were subcloned into lentiviral vectors by LR recombination reaction and lentivirus was prepared successfully. The results from infection of SKBR3 cells with siRNA-expressing lentivirus demonstrated that lentiviral-mediated RNAi could downregulate HER2 expression efficiently through fluorescent quantitative PCR (FQ-PCR), western blot, and FACS analysis. Furthermore, cell growth was inhibited in cell proliferation assay after treatment with siRNA lentivirus.A new tool for clarifying the function of HER2 in cancer metastasis and developing the gene therapy drug was offered.
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