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噬菌体表面展示技术
丁淑燕,苗向阳,朱瑞良,高玲美,邵建军
中国生物工程杂志 , 2003,
Abstract: 噬菌体展示技术(phagedisplaytechniques,pdt)是一种用于筛选和改造功能性多肽的生物技术。自问世以来,它已被广泛应用于生命科学的许多领域。对噬菌体展示技术的基本原理、噬菌体表面展示系统研究以及噬菌体展示技术的应用、展望等进行了探讨,由此可以看出:噬菌体展示技术的进一步发展,必将为生命科学及相关学科的发展带来深远的影响。
丝状噬菌体与噬菌体展示技术
黄仪秀,朱圣庚
微生物学通报 , 1997,
Abstract: 丝状噬菌体的利用,在分子生物学研究以及基因工程发展中起了重大作用1]。丝状噬菌体作为载体具有多方面的巨大应用潜力。1985年Smith2]到最先将外源基因插入丝状噬菌体fl的基因Ⅲ,使目的基因编码的多肽能以融合蛋白的形式展水在噬菌体表面,从而创建了噬菌体展示技术。噬菌
利用噬菌体随机肽库筛选抗原模拟表位的研究进展
裴亚峰,胡骁飞,王耀,侯玉泽,张改平,邓瑞广
河南农业科学 , 2012,
Abstract: 噬菌体随机肽库技术是将编码外源多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置,使外源基因随外壳蛋白结构基因的表达而表达,被展示的外源多肽可保持相对独立的空间结构和生物活性,是一种基因型与表达型的统一。近年来,噬菌体随机肽库技术被广泛应用于各种抗原的模拟表位筛选中,并取得了显著成果。综述了利用噬菌体随机肽库技术在抗原模拟表位筛选中的研究进展。
抗口蹄疫病毒phage-scFv及可溶性scFv的构建
曹盛丰,王国丰
华东理工大学学报 , 2006,
Abstract: 利用重组DNA技术在抗口蹄疫病毒单克隆抗体1C7VH基因和VL基因之间导入一段连接肽(Gly4Ser)3,采用重叠延伸拼接法,经聚合酶链反应(PCR)扩增获得scFv基因。将scFv基因克隆至噬菌粒pCANTAB5E载体,转化E.coliTG1,构建噬菌体抗体文库。用M13KO7辅助噬菌体挽救及固相口蹄疫病毒(FMDV)抗原对噬菌体抗体文库的三轮“吸附-洗脱-扩增”的淘洗,筛选出scFv阳性克隆。将阳性克隆转化E.coliBH2151,通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导可溶性scFv蛋白的表达。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测表明:scFv克隆表达的phage-scFv及可溶性scFv与FMDV亲和力高,特异性强。
人源甲状腺髓样癌噬菌体抗体库的构建及初步鉴定
胡小丽,王政杰,庞 华
重庆医科大学学报 , 2013,
Abstract: 目的:应用噬菌体抗体展示技术,构建大容量天然人源甲状腺髓样癌(medullarythyroidcarcinoma,MTC)噬菌体单链抗体库。方法:提取MTC病人癌周淋巴结总RNA,通过RT-PCR方法获得抗体可变区基因VH和VL基因片断,以它们为模板分别扩增VH-Linker和VL-Linker,再用剪切重叠延伸PCR技术将之拼接组装成单链抗体可变区基因片段(singlechainfragmentvariable,scFv)后引入酶切位点SfiⅠ和NotⅠ。将scFv基因克隆入噬菌粒栽体pCANTAB-5E后经电转入大肠杆菌EcoliTG1,之后经辅助噬菌体M13K07超感染,构建人源MTC噬菌体单链抗体库。PCR鉴定scFv片段阳性插入率,1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆双酶切产物。结果:MTC周围淋巴结总RNA的琼脂糖电泳结果可见清晰的28S、18S条带;VH基因的大小约为370bp,VL基因为350bp,组装后的scFv基因约为750bp。用pUC19标准质粒测定转化效率达到108cfu/μg,scFv的阳性插入率为87.5%(21/24)。结论:成功地构建了人源MTC噬菌体展示文库,为进一步筛选具有MTC细胞特异性的人源噬菌体单链抗体奠定了实验基础。
乙肝病毒核心抗原人源单链可变区抗体的筛选
钟彦伟,成军,王刚,田小军,陈新华,李莉,陈菊梅,张玲霞
中国公共卫生 , 2002, DOI: 10.11847/zgggws2002-18-02-15
Abstract: ?目的筛选、鉴定乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)蛋白的人源单链可变区抗体(ScFv)的编码基因,为细胞内表达小分子单链抗体的研究及抗HBV的基因治疗研究奠定基础。方法采用噬菌体表面展示技术,以HBcAg蛋白为固相抗原,从噬菌体单链可变区抗体半合成库中经过5轮“吸附-洗脱-扩增”筛选过程,获得抗原结合活性较强的HBcAg人源单链可变区抗体阳性克隆,并对其进行免疫检测及序列测定。结果筛选得到的ScFv片段编码基因为771nt,编码的产物由257个氨基酸残基组成,具有典型的轻链和重链可变区结构特点以及与HBcAg结合的特异性。结论利用噬菌体抗体库技术成功地获得了HBcAg人源单链可变区抗体的编码基因,并获得了可溶性单链抗体的表达。
利用噬菌体随机肽库筛选ibdv-vp2模拟表位*
王小娥
农业生物技术学报 , 2010,
Abstract: ?目的:获得具有中和作用的ibdv-vp2单抗的模拟表位,为进一步研究其对法氏囊病的免疫保护作用奠定基础。方法:用纯化的4株ibdv-vp2单克隆抗体(1b5、5d1、2h11和i-4-4-3)筛选噬菌体随机12肽库,对40个克隆(10个单克隆噬菌斑×4株单克隆抗体)进行elisa验证,获得32个阳性克隆,选20个阳性克隆(5个单克隆噬菌斑×4株单克隆抗体)进行dna序列分析,确定了4个优势12肽为不同ibdv抗原表位。这4个12肽在一级结构上没有3个以上连续氨基酸与genbank中ibdv-vp2的氨基酸序列相同之处,与单抗的结合可被vp2蛋白有效地抑制,推测可能是构象依赖性表位。将4个模拟表位串联表达后获得r4epis蛋白,经sds-page分析,r4epis占菌体总蛋白的20%,分子量30kda。用多克隆抗体对r4epis进行免疫印迹分析,结果表明r4epis具有特异性和反应原性。结论:筛选的是ibdv-vp2单抗的模拟表位。
链替换技术提高噬菌体抗体亲和力的研究进展
王乃东,袁安文,薛立群
生物技术通报 , 2010,
Abstract: 高亲和力抗体基因的克隆是噬菌体抗体在基础研究、临床诊断治疗研究等重要领域中应用的基础。链替换技术已逐步广泛用于噬菌体抗体的性能改造。该技术不仅可以促进噬菌体的体外亲和力成熟,提高抗体亲和力,有助于低剂量抗体达到实际应用所需要的抗原结合效应,拓宽抗体的应用开发前景,而且可应用于减少抗体人抗鼠抗体反应,分析重链或轻链基因对抗原抗体结合的影响,有助于较好的理解免疫化学。就链替换的原理、策略及其应用进行综述。
噬菌体展示技术在食源性致病菌检测中的应用
胡雨欣,何早,陈力力,刘霞
食品科学 , 2015,
Abstract: ?噬菌体展示技术是20世纪80年代逐步建立并发展起来的一种分子生物学新技术,目前用于构建展示文库的噬菌体主要有丝状噬菌体、λ噬菌体、t4噬菌体和t7噬菌体。该技术在筛选噬菌体、单链抗体及多肽以建立食品安全检测体系方面,具有广阔的应用前景。本文在介绍噬菌体展示技术系统的基础上,对该技术在食源性致病菌检测中的应用进行综述。
人源天然scfv噬菌体抗体库的构建及鉴定
毛晓燕*,乔玉玲,卢卫嘉,马瑞,赵红
中国生物工程杂志 , 2010,
Abstract: 噬菌体抗体库技术是获得治疗性抗体的一条重要途径。以20份健康人外周血为样本,通过提取淋巴细胞、逆转录-pcr(rtpcr)、抗体可变区基因的扩增、重叠pcr获得单链抗体(scfv)基因,将scfv克隆入噬粒载体,通过近300次的电转化获得了库容量为1.3×109的全人源天然scfv噬菌体抗体库。通过随机挑克隆测序和用5种不同抗原筛选对抗体库进行了初步验证。随机测序表明抗体库具有较好的多样性,用5种不同抗原对其进行筛选,均获得了特异性噬菌体抗体的不同富集,表明成功构建了一个多样性良好的人源天然scfv噬菌体抗体库。
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