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Development in ligase-mediated techniques for bio-molecular analysis
连接酶介导的生物分子检测技术

许超,,张先恩
生物工程学报 , 2009,
Abstract: Two oligonucleotide probes are permitted to anneal to the nucleic acid target of interest so that the ends of two probes immediately become adjacent to each other. The ligase can then efficiently join the two juxtaposed oligonucleotide probes by the formation of a phosphodiester bond if and only if perfectly matched base-pairs at the nick are present. During past 20 years, many ligase-mediated techniques have been developed for analyzing various bio-molecules, such as known/unknown point mutations, small-sc...
连接酶介导的生物分子检测技术
许超?,,张先恩?
生物工程学报 , 2009,
Abstract: 连接酶可以催化寡核苷酸模板上2条单链在缺口处形成磷酸二酯键。这种在缺口处需要单核苷酸互补的化学反应特性催生了连接酶介导的生物分子检测技术。在过去20年中,该技术已成功应用于对已知或未知点突变、小片段核酸插入或缺失、dna甲基化、大规模单核苷酸多态性(snp)分型,蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质-dna相互作用的检测以及分析。同时,连接反应通过整合进入其它生物技术,在生物分子检测中取得了更大的进展。这些新的方法经过多重杂交和酶学反应后,仍能保持很高的检测准确性,并为整个检测反应提供了内在的质量控制校核。以下综述了基于连接酶的生物分子检测技术。
准朔铁路黄河特大桥拱上简支t梁支座布置研究
岳武,,
铁道工程学报 , 2012,
Abstract: ?研究目的:准朔铁路黄河特大桥是朔州至准格尔新建铁路重要工程,大跨度上承式拱桥拱上桥墩纵向位移由桥墩和拱肋变形两部分组成,拱上简支t梁支座布置对拱肋结构的受力影响较大,因此需要通过合理的支座布置方案降低拱上高墩的纵向水平位移,降低纵向水平力对拱肋产生的不利影响。研究结论:(1)相邻桥墩纵向最大相对位移发生在交界墩与拱脚g1和g12号墩之间;(2)拱脚第一孔简支梁梁端需要采取大位移量纵向活动支座和伸缩装置,并设置纵、横向防落梁措施;(3)大跨度拱上桥墩墩顶位移对桥上无缝线路的影响较大,桥上无缝线路应采取小阻力扣件来适应桥墩变形要求。
南果梨多酚氧化酶最适作用酶促褐变底物的分析确定
马岩松,车芙蓉,张平,
食品科学 , 2000,
Abstract: ?南果梨采后贮藏期间果心、果肉的酚类物质含量呈先合成上升后分解降低趋势,果实出现褐变时期与组织内酚类物质明显减少时期呈现对应关系。同期多酚氧化酶(ppo)活性也相应出现明显高峰。因此说明南果梨贮藏褐变是酚类物质在有氧条件下被ppo催化而造成的酶促褐变。试验分析看到,绿原酸在南果梨褐变前后发生明显量的变化,并能与ppo互相作用形成褐变物质,初步认为绿原酸是南果梨褐变底物酚类物质的主要成分之一。
金黄色葡萄球菌肠毒素c2的基因克隆、表达及其生物学活性
徐明恺?,张成刚?,,张先恩?
生物化学与生物物理进展 , 2005,
Abstract: 利用pcr技术从金黄色葡萄球菌的基因组dna中克隆sec2全长基因,pcr产物与pgem-t载体连接,经测序证实后进行亚克隆,构建其表达载体pet-28a-sec2,在大肠杆菌bl21(de3)中表达成熟重组蛋白(rsec2),纯化rsec2蛋白并对其生物学活性进行研究.结果表明:成功克隆了sec2全长基因,测序证实该基因共717bp,编码239个氨基酸,与genbank中收录的sec2成熟蛋白质序列完全一致,sec2基因登录genbank(accessionnumber:ay450554);构建了sec2的表达载体pet-28a-sec2,并在大肠杆菌bl21(de3)中得到高效可溶性表达,可溶性的rsec2经ni2+亲和层析纯化达到电泳纯,纯化的rsec2蛋白经蛋白质印迹检测,并能有效刺激人外周血单个核细胞的增殖,被rsec2刺激的外周血单个核细胞在体外对肿瘤细胞的生长有显著的抑制作用.
dna错配修复蛋白muts和mutl的相互作用研究
毕利军?,张先恩?,,张治平?
生物化学与生物物理进展 , 2005,
Abstract: mutl和muts是dna错配修复系统中起关键作用的修复蛋白.利用基因融合技术高效表达了mutl和muts融合蛋白,并利用它们发展了一种研究二者相互作用的简便方法.融合蛋白mutl-gfp(trx-his6-gfp-(ser-gly)6-mutl),mutl-streptagⅱ(trx-his6-(ser-gly)6-streptagⅱ-(ser-gly)6-mutl)和muts(trx-his6-(ser-gly)6-muts)被构建并在大肠杆菌中高效表达.收集菌体细胞、超声波破碎后离心取上清进行sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分析,结果表明有与预期分子质量相应的诱导表达条带出现,其表达量约占全细胞蛋白的30%且以可溶形式存在.利用固定化金属离子配体亲和层析柱分别纯化融合蛋白,其纯度达到90%.通过将muts蛋白固定的方法研究两种mutl融合蛋白分别与muts之间的相互作用.结果表明:只有muts蛋白与含有错配碱基dna分子结合后才与mutl蛋白发生相互作用.通过检测mutl融合蛋白标记的绿色荧光信号或酶学显色信号来鉴定相互作用的发生.建立的融合分子系统方法也为研究其他的蛋白质或生物大分子之间的相互作用提供了一个技术平台.
分子酶工程学研究进展
张先恩* Anthony E. G. Cass
生物工程学报 , 2002,
Abstract: 酶工程的研究已经发展到分子水平,通过基因操作,已实现了许多酶的克隆和表达。定点突变成为研究酶结构与功能的常规手段,并被广泛用于改善酶的性能。体外分子进化方法则大幅提高了酶分子的进化效率,并有可能发展新功能酶。融合蛋白技术的发展使构建新型多功能融合酶成为可能。这里对分子酶工程学的研究与发展情况进行了综述。
基于fpga的16阶fir滤波器的设计
,李跃华,朱昊
南京工业大学学报(自然科学版) , 2005, DOI: 10.3969/j.issn.1671-7627.2005.01.010
Abstract: 研究了一种16阶fir滤波器的fpga设计方法,底层采用vhdl语言描述设计文件,顶层使用底层产生的模块连接组成fir滤波器,并在max+plusii上进行了实验仿真和时序分析.对如何优化硬件资源利用率、提高运算速度等工程实际问题进行了探讨.
一种基于dsp的毫米波目标识别器的设计
朱昊,李跃华,
南京工业大学学报(自然科学版) , 2005, DOI: 10.3969/j.issn.1671-7627.2005.03.011
Abstract: 研究了一种基于dsp的毫米波目标识别器的设计方法.针对毫米波探测系统的特点和应用背景,给出了目标识别器的硬件组成结构和软件设计方案.通过对该系统的大量试验测试分析表明,所设计的目标识别器具有采样速率快、信号实时处理能力强等特点,可实现对地面目标回波信号的实时采集、高速处理和目标识别.
Current Researches on Molecular Enzyme Engineering
分子酶工程学研究进展

Anthony EGCass,
,张先恩,Anthony,E.,G.,Cass

生物工程学报 , 2002,
Abstract: The developments of recombinant DNA technology and structural biology make it possible to modify enzyme in mole- cular level. Scientists show growing interests in the evolution or functional fusion of enzymes. Recent advances and applications of the molecular enzyme engineering are reviewed and discussed in this article.
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