oalib

Publish in OALib Journal

ISSN: 2333-9721

APC: Only $99

Submit

Any time

2019 ( 4 )

2018 ( 279 )

2017 ( 292 )

2016 ( 339 )

Custom range...

Search Results: 1 - 10 of 13610 matches for " 可溶表达 "
All listed articles are free for downloading (OA Articles)
Page 1 /13610
Display every page Item
Soluble expression of recombinant cyclophilin A in Escherichia coli
重组亲环蛋白A的可溶性表达

YAN Xiao,XU Li-ren,GUAN Yi-xin,YAO Shan-jing,
闫啸
,徐立仁,关怡新,姚善泾

浙江大学学报(农业与生命科学版) , 2010,
Abstract: 为获得高表达量的可溶亲环蛋白A(cyclophilin A,CypA),对重组CypA质粒表达和工程菌的培养过程进行研究.首先将pRSET-CypA质粒转入Escherichia coli BL21菌株,获得表达CypA的重组工程菌;然后以2×YT为基本培养基,对培养基组成包括碳源、氮源和氨苄青霉素浓度进行优化,并考察接种量和诱导条件(诱导剂浓度、诱导时机、诱导后培养时间)等对目标蛋白表达量的影响.结果表明:通过控制培养温度和转速可大大减少CypA包涵体的量;以甘露醇为碳源能显著提高目标蛋白的表达量;优化的培养基组成为蛋白胨16 g·L-1,酵母提取物10 g·L-1,NaCl 5 g·L-1,甘露醇10 g·L-1,Amp 50 mg·L-1;在对数生长期中期OD600为1.3时加入1 mmol·L-1 IPTG诱导,然后在30 ℃、180 r·min-1条件下继续培养9 h收获菌体;优化后目标蛋白CypA产量为66.7 mg·L-1发酵液,与优化前相比提高了76.6%.
外源蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达策略
朱红裕,李强
过程工程学报 , 2006,
Abstract: 长期以来,大肠杆菌一直是表达外源蛋白的首选表达系统.但由于外源蛋白在表达过程中容易被宿主细胞蛋白酶降解或者形成包涵体,其应用受到了限制.本文综述了在大肠杆菌中表达可溶外源蛋白的策略和进展,以期提高具有生物活性的外源基因的表达水平.
重组海参溶菌酶工程菌发酵及表达产物纯化和性质的研究
王丹,丛丽娜,谢三群,张欢
生物技术通报 , 2011,
Abstract: 旨在研究重组海参i型溶菌酶(Stichopusjaponicuslysozyme,SjLys)可溶性表达的发酵条件、纯化及生物学性质。采用摇瓶发酵的培养方式,分别从培养基组分和发酵条件两个方面对获得可溶性重组SjLys进行研究。表达产物通过亲和层析纯化以及凝胶过滤层析脱盐,获得了电泳纯为95%的重组SjLys蛋白。进一步对其生物学活性分析,结果表明该酶最适温度为45℃,最适pH值为6.8,对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有广谱抑菌作用。上述结果将为海参溶菌酶进行产业化奠定应用基础。
GST-Exendin-4在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化
张怡,周庆峰,贾孟,张红绪,李成伟
生物技术通报 , 2011,
Abstract: 为了制备GST-Exendin-4融合蛋白,以本实验室构建好的pET22b-Exendin-4为模板,通过PCR扩增出Exendin-4基因,酶切克隆入pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Exendin-4。经DNA测序证实插入序列与设计完全一致后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在不同浓度的IPTG和不同温度诱导下,经SDS-PAGE分析鉴定,表达出Mr约为30kD的目的蛋白,灰度扫描显示目的蛋白占菌体总蛋白的29.9%,超声裂解后的上清通过Sepharose4B亲和层析纯化、透析、除盐及冷冻干燥得到高纯度的目的蛋白。本研究成功制备了高纯度的GST-Exendin-4融合蛋白,为下一步进行目的蛋白大规模的生产打下了良好的基础。
绿头鸭IFN-α的可溶性表达及其活性分析
刘澜澜,庄艳娜,于晓红,曾祥伟
生物技术通报 , 2014,
Abstract: 为了利用原核表达系统研制有生物活性的鸭IFN-α。以pMD18T-MaIFN-α为模板扩增绿头鸭IFN-α成熟肽基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行变温诱导表达。SDS-PAGE分析表达结果,并用Westernblotting进行验证。Ni2+树脂柱纯化目的蛋白后,测定其生物活性。结果表明,重组pET-32a(+)-MaIFN-α在大肠杆菌BL21成功表达,主要以可溶性形式存在,Westernblotting分析显示目的蛋白具有良好的抗原性。细胞病变抑制法测定重组鸭IFN-α的抗病毒活性约为8×104U/mL;荧光定量PCR方法检测显示表达的重组鸭IFN-α使NDV在DEF上的复制受到了明显的抑制,48h时间点相对抑制率高达91%。这些都表明表达的重组鸭IFN-α具有良好抗病毒活性。
抗克伦特罗单链抗体可溶性表达及特性鉴定
王弘,潘科,杨金易,张宏斌,王捷,武婕,雷红涛,孙远明
食品科学 , 2007,
Abstract: ?目的:表达抗克伦特罗(cbl)可溶性单链抗体(scfv)并进行抗原结合活性鉴定。方法:利用呈现scfv的重组噬菌体感染大肠杆菌hb2151,iptg诱导可溶性scfv表达。渗透休克法提取菌体细胞周质腔中scfv。经sds-page、western-blotting以及间接elisa法分析检测可溶性scfv的表达,并采用间接竞争elisa法鉴定scfv的抗原结合活性。结果:细菌培养上清及周质腔中均有抗cbl可溶性scfv表达,其分子量约为29kd;上清液及周质腔中scfv效价分别为1:80,1:1600,能够被cbl竞争性抑制,ic50分别为0.78、0.95ng/ml。结论:可溶性抗cblscfv在大肠杆菌hb2151中获得成功表达,表达的scfv与cbl具有很好的结合活性,可用于进一步建立cbl相应的免疫学检测方法。
黑腹果蝇抗真菌肽基因Drs和Drs-lC的原核可溶性表达及抗真菌活性测定
段云,邓小娟,叶明强,杨婉莹,黄亚东,温硕洋,曹阳
昆虫学报 , 2006,
Abstract: Drosomycin(Drs)是第1个从黑腹果蝇Drosophilamelanogaster体内鉴定发现的昆虫抗真菌肽因子。它对细菌无明显的抗性,但对丝状真菌具有高效广谱的抑杀作用。此外,在黑腹果蝇基因组还存在着Drs的另外6个同系物的基因序列,其中同系物Drosomycin-lC(Drs-lC)的抗真菌谱仅次于Drs。将Drs抗真菌肽基因(Drs)和同系物Drs-lC基因(Drs-lC)进行可溶性表达,对果蔬等农产品防腐保鲜的研究有应用前景。本实验将Drs和Drs-lC分别克隆到硫氧还蛋白(Trx)融合表达载体pThiohisA中,转化宿主菌TOP10,进行可溶性表达,并从诱导表达的菌液起始浓度、IPTG的诱导浓度及诱导时间等方面进行了表达条件的优化。结果表明2种融合蛋白Trx-Drs和Trx-Drs-lC大部分以可溶形式表达,可溶性表达的Trx-Drs在上清液中约占菌体总蛋白的22%。2种融合蛋白的表达产物经Ni-NTA亲和层析得到纯化。生测结果表明,2种融合蛋白分别对8种供试真菌中的5种真菌显示明显的抗性。
重组抗凝蛋白-新蛭素的原核表达研究
张超,巩蔚,郭莹莹,孙卫国,姚敏,于爱平
中国生物工程杂志 , 2014,
Abstract: 目的:重组新蛭素(eh)是在抗凝蛋白水蛭素的氨基末端添加3个氨基酸(epr)的衍生物,以往eh的表达工艺沿用水蛭素的酵母表达工艺,生产周期长、目标蛋白表达效率相对较低。而水蛭素类的蛋白在大肠杆菌中往往以包涵体形式表达,后期的分离纯化收率较低,无法适应产业化。为了提高eh的生产效率,探索了eh在大肠杆菌中的可溶性表达。方法:首先通过pcr的方法获得eh的cdna,pcr产物连接入原核表达载体pet-22或pet-24中获得重组表达质粒,将重组表达质粒转化大肠杆菌bl21(de3)或bl21(plyss),获得重组工程菌bl21(de3)-pet-24-eh,bl21(de3)-pet-22-eh,bl21(plyss)-pet-22-eh。重组工程菌进行iptg诱导,sds-page和westernblot鉴定表达产物。结果:eh在3个重组工程菌中均可实现可溶性表达。表达水平较高的为bl21(de3)-pet-24-eh工程菌;之后通过优化诱导温度,时间,诱导剂浓度、诱导前菌种密度,确定最佳条件为:37℃,诱导6h,iptg浓度为0.4μmol/l,诱导前菌种密度在od600=1左右。诱导产物经分离纯化,其纯度可达96.93%。最后通过蛋白含量测定及抗凝活性检测,确定表达的eh蛋白本身无抗凝活性,被fxa裂解后可以释放出水蛭素的抗凝活性。结论:实现了eh在大肠杆菌中的可溶性表达,表达周期短,有望提高eh的生产效率,为eh的产业化奠定了基础,也为水蛭素类产品的生产提供了新的工艺途径。
二硫键异构酶DsbC介导重组瑞替普酶在E.coli中可溶表达 Soluble Expression of Recombinant Reteplase in Escherichia coli by Co-Expression of Disulfide Bond Isomerase DsbC
禚孝发,关怡新,姚善泾
- , 2015,
Abstract: 瑞替普酶(reteplase)是第三代溶血栓药物,其结构中含有9对二硫键,因而重组瑞替普酶在E.coli中表达时极易形成包涵体。研究引入二硫键异构酶Dsb C介导瑞替普酶折叠过程中错配二硫键的异构,从而促进其在E.coli中的可溶表达。首先分别构建了reteplase、Dsb C表达载体p BAD/His A-R及p ACYCDuet-1-Dsb C,并共转化入E.coli BL21菌株,获得了瑞替普酶的Dsb C共表达体系。在此基础上,考察了发酵过程中诱导方式及时间、培养温度、诱导剂浓度对瑞替普酶可溶表达量的影响。在37℃、200 r·min-1的条件下培养到OD600值为0.6左右时,加入0.1 mmol·L-1的IPTG诱导二硫键异构酶Dsb C的表达;在25℃、160 r·min-1的条件下培养1 h后,加入0.5 g·L-1的L-阿拉伯糖诱导目标蛋白瑞替普酶表达,继续培养10 h收获菌体,结果表明近60%的瑞替普酶实现了可溶表达,其产量约为70 mg·L-1发酵液,用平板溶圈法测得纯化后瑞替普酶的活性为2.35×105 IU·mg-1。通过共表达二硫键异构酶Dsb C实现了瑞替普酶在E.coli中的可溶表达,有助于瑞替普酶的临床及折叠机理研究,对其他富含二硫键的重组蛋白质生产具有一定的指导意义。
星海链霉菌卤化酶重组蛋白在大肠杆菌中可溶表达
王玉梅,赵心清,马昱澍,魏东芝
大连理工大学学报 , 2014, DOI: 10.7511/dllgxb201403003
Abstract: 大肠杆菌(Escherichiacoli,E.coli)是表达异源蛋白的良好宿主,但常遇到蛋白表达产物不可溶的困难.在对来自星海链霉菌的卤化酶基因sinH进行大肠杆菌异源表达时,为克服蛋白表达产物可溶性低的问题,探讨了不同载体对蛋白可溶表达的影响.利用pET28a进行SinH表达时不能得到可溶的目标蛋白;使用含有泛素标签及内含肽的载体pHUIE实现了卤化酶蛋白SinH的可溶表达,但纯化后纯度不高;利用带有链霉菌分子伴侣蛋白基因的载体pET28a-SinH与pETcoco-pL1SL2在E.coliBL21(DE3)中共表达,在30℃,0.1mmol/LIPTG诱导条件下表达4h,成功获得大量可溶蛋白,使用亲和层析(Ni-NTA)纯化,获得了较纯的目标蛋白SinH,上述研究结果为在大肠杆菌中进行其他链霉菌蛋白的可溶表达提供了参考.
Page 1 /13610
Display every page Item


Home
Copyright © 2008-2017 Open Access Library. All rights reserved.