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莲子草假隔链格孢对空心莲子草活性氧代谢的影响
聂亚锋,长河,陈志谊,永锋,
植物保护学报 , 2013,
Abstract: 为了明确活性氧(ROS)在莲子草假隔链格孢Nimbyaalternantherae侵染空心莲子草过程中的作用,采用氯化硝基四氮唑蓝(NBT)光化学还原法、二氨基联苯胺(DAB)组织染色法和分光光度法测定了莲子草假隔链格孢SF-193侵染空心莲子草后超氧阴离子(O2?-)产生速率、过氧化氢(H2O2)含量、抗氧化酶体系(超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD))活性和丙二醛(MDA)含量。结果显示,接种莲子草假隔链格孢SF-193的叶片经NBT和DAB染色后检测到ROS的大量累积。叶片内的O2?-产生速率和H2O2含量随接种时间显著升高,接种后48h均达到峰值,分别为2.33nmol?min-1?g-1FW和11.78μmol?g-1FW,是对照的2.1倍和2.5倍;SOD、CAT和POD活性均在接种后8h达到峰值,分别为277.75、23.47和444.92U?min-1?g-1FW,之后逐渐下降;MDA含量随接种时间持续上升,72h时达到峰值,为5.20μmol?g-1FW。表明莲子草假隔链格孢侵染空心莲子草打破了ROS产生与清除之间的平衡,导致植物细胞内的ROS迅速上升,对叶片细胞造成严重破坏。
枯草芽胞杆菌sf628对梨炭疽病的控制作用
,陈志谊,永锋,聂亚锋,乔俊卿
植物保护学报 , 2012,
Abstract: 近年来,由胶胞炭疽病菌Colletotrichumgloeosporioides引起的梨炭疽病在砀山酥梨产区普遍发生。为探讨生防菌对梨炭疽病的控制作用,采用平板对峙生长法和喷雾法研究了枯草芽胞杆菌sf628对梨炭疽病的室内外防治效果。枯草芽胞杆菌sf628发酵菌液、100倍和500倍稀释液对胶胞炭疽病菌菌丝生长的平板抑制率分别为91.45%、88.80%和86.63%。梨果先喷施生防菌液sf628,24h后接种炭疽病菌,对梨炭疽病的防治效果为83.74%;梨果先接种炭疽病菌,24h后再喷施生防菌液sf628,对梨炭疽病的防治效果为56.82%。生防菌sf628可湿性粉剂100、1000和2000倍稀释液对梨炭疽病的田间防治效果分别为75.89%、60.78%和50.60%,常规对照药剂多菌灵的防治效果为61.10%。研究表明,枯草芽胞杆菌sf628是一株对梨炭疽病有较好控制作用的生防菌。
生防菌Bs-916离子注入突变高效菌株筛选及抑菌防病效果
李德全,陈志谊,永锋,
植物保护学报 , 2006,
Abstract: 枯草芽孢杆菌生防菌Bs-916是一种在水稻病害防治中发挥作用的生防因子,为进一步提高其拮抗性能,获得生防效果更好的高效菌种,利用不同剂量的N+对Bs-916进行离子注入处理,在1300个诱变处理的菌株中,经过初筛、复筛和定量筛选,筛选到11株拮抗性能比出发菌Bs-916提高10%以上的菌株,对筛选出的高效突变菌株进行室内抑菌和田间防病测定。结果表明,离子注入生防菌Bs-916的最适剂量为150~250×2.6×1013N+/cm2;突变菌株的抑菌拮抗带宽提高率比出发菌株Bs-916高4.3%~30.7%;防病效果比Bs-916高3.2%~19.1%。
枯草芽胞杆菌T-500产脂肽类抗生素的摇瓶发酵工艺优化
乔俊卿,,张荣胜,永锋
南京农业大学学报 , 2018, DOI: 10.7685/jnau.201705017
Abstract: [目的]枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)T-500是1株对水稻纹枯病和稻瘟病均有良好防治效果的生防菌,通过优化其摇瓶发酵工艺,从而提高发酵液中脂肽类抗生素的含量,为T-500菌株生防制剂的开发提供技术支撑。[方法]以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)为指示菌,利用酸沉淀法提取T-500菌株发酵液中的脂肽类抗生素,并进行脂肽抗生素粗提液的抑菌效果分析,筛选影响抑菌效果的发酵培养基主成分;随后通过Plackett-Burman试验设计、中心组合试验设计和响应曲面法,优化T-500菌株高产脂肽类抗生素的发酵培养基成分和发酵条件。[结果]T-500菌株高产脂肽类抗生素的最佳培养基为:黄豆饼粉7.00 g?L-1,蛋白胨4.92 g?L-1,酵母粉1.90 g?L-1,小麦粉5.00 g?L-1,玉米糊5.00 g?L-1,NaCl 1.00 g?L-1,MgSO4 0.20 g?L-1,MnSO4 5.0 mg?L-1,FeSO4 0.5 mg?L-1。最佳发酵培养条件为:装液量500 mL三角瓶装105 mL,接种量0.87%,发酵时间41.35 h,温度28℃,转速180 r?min-1。利用最佳摇瓶发酵工艺,T-500菌株所产生的脂肽类抗生素对纹枯病菌的抑菌带最宽,达(11.23±0.15)mm,菌含量达(7.41±1.18)×109CFU?mL-1。经摇瓶发酵试验和抑菌活性验证,理论预测值与实际值无显著差异。质谱和色谱检测表明:优化发酵工艺后产生的Surfactin含量较基础培养基提高了48.2%,Iturin含量较基础培养基提高了180.9%;优化发酵工艺后检测到了Fengycin的产生,但优化前未发现Fengycin的产生。[结论]利用响应曲面法成功优化了枯草芽胞杆菌T-500产脂肽类抗生素的摇瓶发酵工艺;优化后,T-500产脂肽类抗生素产量增加,抑菌活性增强。
[Objectives] Bacillus subtilis T-500 showed strong biocontrol activities to rice sheath blight and rice blast bacteria. Here, the fermentation process was optimized to improve the yield of lipopeptide antibiotics, which will provide technical support for the development of biocontrol agent containing T-500. [Methods] According to the inhibition zoom of lipopeptide extraction against Rhizoctonia solani, the main nutritional components that are suitable for the production of lipopetides in Bacillus subtilis T-500 were screened by comparing the effects of 10 media that are commonly used for cycle lipopetide antibiotics production by Bacillus. After that, the Plackett-Burman method, the central composite design and response surface methodology were used to obtain optional medium and fermentation condition. [Results] The optimum medium of T-500 was soybean powder 7.00 g?L-1, peptone 4.92 g?L-1, yeast extract 1.90 g?L-1, wheat powder 5.00 g?L-1, corn powder 5.00 g?L-1, NaCl 1.00 g?L-1, MgSO4 0.20 g?L-1, MnSO4 5.0 mg?L-1, FeSO4 0.5 mg?L-1. The optimum culture condition was 28℃, inoculation volume 0.87% and the filling volume 105 mL medium in 500 mL flask for 41.35 h at 180 r?min-1. Under the optimum fermentation medium and culture conditions, the width of inhibition zoom was about(11.23±0.15)mm, and cell amount was up to(7.41±1.18)×109 CFU?mL-1. Fermentation experiments with shake flasks verified that there was no statistical difference between real and forecasted yields. The results of mass spectrometry and chromatography showed that Surfactin content increased by 48.2% and the content of Iturin increased by 180.9% compared with the basal medium after optimization of the fermentation process. Fengycin was detected after optimization of the
生防菌B1619在番茄根部的定殖及对根际微生态的影响
乔俊卿,,夏彦飞,慕少锋,陈志谊*
植物保护学报 , 2013,
Abstract: 采用植物MS平板定殖研究法、盆栽试验和土壤酶活性检测技术研究了生防菌B1619在番茄根部的定殖规律,并评估了B1619对番茄根围土壤微生物和酶活性的影响。结果显示,生防菌株B1619在番茄根部定殖能力较强,在MS平板中,定殖量可达108CFU/g根以上。在盆栽试验中,常规土壤中或在接种青枯菌后,番茄根部生防菌的数量都呈现先下降后上升趋势,最后趋于稳定;在第15天时,定殖量达到106CFU/g根。番茄定植后,B1619对根围土壤中真菌和放线菌具有促进作用,而对细菌则表现为先促进后抑制作用。此外,B1619能够提高土壤蔗糖酶活性而抑制土壤脲酶的活性,B1619施用后第15天,蔗糖酶活性达226.3mg/g土,比对照高88mg/g土;土壤脲酶活性则与对照组截然相反,呈下降趋势。
番茄枯萎病菌和青枯病菌拮抗细菌的评价
张斌,乔俊卿,梁雪杰,,陈志谊
植物保护学报 , 2015,
Abstract: 为筛选出对番茄枯萎病和青枯病有较好防效的生防菌,采用平板对峙法,以番茄枯萎病菌Fusariumoxysporum和番茄青枯病菌Ralstoniasolanacearum为靶标菌,从江苏沭阳、宿迁、溧水及内蒙古海拉尔分离到的2062株细菌菌株中筛选拮抗菌株,并采用平板对峙法、拮抗菌液灌根法、分子生物学方法进行拮抗物质检测、盆栽试验及种属鉴定.结果表明:从2062株细菌中共筛选到21株对番茄枯萎病和青枯病具有很强拮抗作用的菌株,均能分泌蛋白酶,具有解磷作用;不能分泌几丁质酶和纤维素酶,仅4株细菌能分泌嗜铁素.拮抗细菌SY290对番茄枯萎病和番茄青枯病防效最高,分别达到74.2%和75.0%,SQ728和LS536次之,但防效均大于60%.结合各菌株形态特征、16SrDNA与gyr-B序列分析结果,菌株SY177、SY290和SQ728鉴定为解淀粉芽胞杆菌Bacillusamyloliquefaciens,菌株LS536为枯草芽胞杆菌B.subtilis.
枯草芽胞杆菌PTS-394的GFP标记及其定殖能力
,梁雪杰,乔俊卿,张荣胜,陈志谊
植物保护学报 , 2014,
Abstract: 为探明枯草芽胞杆菌PTS-394在番茄根围的定殖能力,采用电转化法获得绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)标记菌株PTS-GFP,构建其生长曲线,采用对峙生长法评价其室内抑菌活性,并应用抗生素平板回收结合激光扫描共聚焦显微镜观察标记菌株在番茄根围的定殖数量。结果显示:与原始菌株PTS-394相比,标记菌株PTS-GFP的生长、对青枯病菌和4种病原真菌的室内抑菌能力无明显差异。标记菌株PTS-GFP和青枯病菌菌液单独或混合处理番茄苗,灌根当天标记菌株初始菌量接近108CFU/g,处理3d后种群数量迅速下降,约106CFU/g,随后缓慢下降,处理10d后种群数量约104CFU/g,处理30d后,标记菌株仍然能被检测到,约20CFU/g。表明枯草芽胞杆菌PTS-394在番茄根际土壤中具有一定的定殖能力。
海洋细菌PY-sw-1产生的抗菌物质及其抑菌活性
聂亚锋,永锋,李德全,陈志谊,,罗楚平
植物保护学报 , 2008,
Abstract: 川芎LigusticumchuanxiongHort为四川地道中药材[1-2],其产量占全国川芎商品量的90%以上.随川芎种植面积的扩大,川芎病害问题日益突出,其中以根腐病的危害最大,发病率通常为25%~38%,严重时达50%~70%,给川芎生产造成严重损失[3].本研究对川芎根腐病的症状进行系统观察,利用形态学,并结合rDNA-ITS序列测定,对该病的病原菌进行了鉴定.
枯草芽孢杆菌bs-916的抑菌活性及其抑菌物质初探
永锋,陈志谊,周明国,张杰,宋福平,,罗楚平
农药学学报 , 2007,
Abstract: 为了揭示从土壤中分离出的拮抗菌—枯草芽孢杆菌bs-916的抑菌作用和抑菌机理,采用管蝶法、平板涂抹法及孢子盟发法测定了bs-916及其代谢液对水稻纹枯病菌、蚕豆枯萎病菌等8种病原菌的抑菌活性,结果表明其对供试的大多数病原菌均具有较强的抑菌活性,如bs-916及其代谢液对水稻纹枯病菌的抑制率分别为95.4%和70.7%,对水稻稻曲病菌的抑制率均为100%。为了探索bs-916胞外物质的种类及特性,分别采用丙酮沉淀、peg沉淀、等电点沉淀和超微浓缩等方法从bs-916代谢液中获得了沉淀物或截留物,它们均具有抑菌活性。沉淀物经蛋白酶k处理后,活性减弱,说明bs-916胞外抗菌物质具有蛋白质的性质。
生防茵PTS-394发酵培养基及培养条件的优化
梁雪杰 , , 张荣胜 , 乔俊卿 , 陈志谊 , 陆凡
扬州大学学报(农业与生命科学版) , 2013,
Abstract: ????
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