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喹乙醇人工抗原的合成及鉴定
朱学加,陈金兰,何计国
食品科学 , 2008,
Abstract: ?采用琥珀酸酐法合成了喹乙醇的衍生物喹乙醇-半琥珀酸酯(ola-sh),并通过tlc、质谱、红外光谱和核磁共振等方法对其进行了鉴定。再分别经活化酯法和氯甲酸异丁酯法合成了喹乙醇的人工抗原(ola-bsa,ola-ova),采用紫外分光光度计法和sds-page对合成的人工抗原进行了定性鉴定,结果表明人工抗原合成成功。根据半抗原、人工抗原及其载体在259.4nm处的紫外吸光度,计算出两种人工抗原中半抗原与载体的分子结合比率分别为3.8和5.0。
人工抗原苯并芘的化学合成与分析
王吕,邵辉峰,张斌,陈雪岚
食品科学 , 2014,
Abstract: ?以苯并芘(benzo(a)pyrene,bap)为起始反应物,通过碘代、heck偶联两步化学反应合成苯并芘的羰基衍生物,再经肟化反应将羰基羧基化,采用活化酯法将羧基化半抗原与载体蛋白(牛血清蛋白)进行偶联,制备苯并芘的人工抗原。采用红外光谱(infraredspectroscopy,ir)、核磁共振波谱(nuclearmagneticresonancespectrum,nmr)和质谱(massspectrometer,ms)对苯并芘中间产物进行表征,并用紫外扫描的方法对人工抗原进行鉴定。本实验成功羧化了苯并芘,并成功构建人工抗原,苯并芘与载体蛋白的偶联比为28∶1。
环丙沙星人工完全抗原的制备与鉴定
杨燕燕,樊海平,辛志明,吴斌,曾占壮,余培建
福州大学学报(自然科学版) , 2012,
Abstract: 分别采用碳二亚胺法和氯甲酸异丁酯法制备环丙沙星的牛血清白蛋白与卵清白蛋白载体的人工完全抗原CPFX-BSA和CPFX-OVA.人工完全抗原经SDS-PAGE凝胶电泳初步鉴定后,考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量分别为1.24和0.58 mg.mL-1,将偶联抗原稀释至一定浓度,紫外分光光度法测其波形,根据偶联前后波形及吸收峰的变化鉴定偶联物分子量大于载体蛋白,证实CPFX与BSA和OVA偶联成功,根据游离半抗原、载体蛋白和完全抗原偶联物各自的紫外吸光度、摩尔吸光系数,初步定量计算出偶联结合比分别为7.2∶1和6.4∶1.质谱法测定CPFX-BSA和CPFX-OVA分子量分别为6.895×104和4.586×104,推算偶联比分别为5.6∶1和4.2∶1,进一步证实了偶联比和人工抗原制备成功.制备的人工完全抗原CPFX-BSA和CPFX-OVA可分别作为免疫抗原和包被抗原,为环丙沙星单克隆抗体的制备以及环丙沙星快速检测试剂盒的研制奠定基础.
中药有效成分半抗原抗体应用研究进展
赵玉男
中国中药杂志 , 2013,
Abstract: 中药有效成分半抗原抗体的应用已经触及中药研究的各个领域。首先,可将半抗原单克隆抗体设计成ELISA试剂盒,定量分析生物样本或植物粗提取物中有效成分的含量,应用于中药质量控制和中药药代动力学的研究。其次,可将半抗原单克隆抗体与固相载体相偶联,做成免疫亲和柱,应用于复杂样品的前处理以及knock-out提取物的制备。最后,可将有效成分半抗原单克隆抗体单链可变区(scFv)的基因片段导入植物细胞内,基因重组后可得到有效成分高富集的新品种,实现药用植物的分子育种。
游离甲状腺素半抗原及人工抗原的合成及鉴定
印晓梅,王小龙,于海涛
分析化学 , 2013, DOI: 10.3724/SP.J.1096.2013.20687
Abstract: 选择游离甲状腺素(FT4)的羧基官能团为修饰位点,先用二碳酸二叔丁酯(Boc2O)保护氨基,再用HATU作为缩合剂与炔丙基胺通过酰胺键缩合,将端炔基引入FT4,然后在微量亚铜盐催化下与叠氮戊酸发生"ClickChemistry"反应,合成以三唑杂环作为"连接臂"的FT4人工半抗原(FT4H)。采用N-羟基琥珀亚胺活性酯法,将半抗原(FT4H)与牛血清白蛋白(BSA)、钥孔戚血蓝素(KLH)偶联,合成免疫原(FT4H-BSA)和包被原(FT4H-KLH),免疫原(FT4H-BSA)的紫外吸收图谱相对于FT4H和BSA有明显差异,表明偶联成功,并计算得到偶联比为12:1。用FT4H-BSA(2×10-3g/mL,0.1mg/只)免疫6-8周龄的Balb/c小鼠,5次免疫后,经尾部取血,获得抗FT4血清,采用ELISA间接法测定抗体血清的效价可达1.28×105。结果表明,含有较强决定簇(三唑环)的连接臂未对抗体血清识别FT4产生较大的干扰,为制备小分子的人工抗原提供一种新的方法。
去甲氯胺酮半抗原及其全抗原的合成与鉴定
杨婷婷,赵春城,沈笑平,谈伯昌,邹盘坤,王怀明,刘凌云,韦超,魏万里,何金海,吴杰,张东升,赵晓联
分析化学 , 2010,
Abstract: 在低温条件下,去甲氯胺酮与琥珀醛酸反应,合成了半抗原羧基-去甲氯胺酮,电喷雾质谱鉴定结果表明,目标半抗原合成成功;通过碳二亚胺法将半抗原与载体蛋白偶联制备人工抗原,红外光谱法鉴定结果表明,人工抗原合成成功,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定表明去甲氯胺酮半抗原与牛血清白蛋白的偶联比为11:1。经动物免疫,获得高效价特异性多克隆抗体,抗血清效价可达5.12×104。
半抗原的设计、修饰及人工抗原的制备
宋娟,王榕妹,王悦秋,唐雨榕,邓安平
分析化学 , 2010,
Abstract: 制备具有良好免疫原性的人工抗原是建立测定小分子化合物的免疫分析方法的最关键步骤。本文对半抗原的设计、修饰(修饰位点的选择、修饰物的制备、连接臂的选择)、载体的选择、半抗原与载体的偶联(偶联方式、偶联条件、最佳偶联率)、人工抗原的纯化与鉴定等方面作了详细的介绍。
三聚氰胺人工抗原化合物的合成及鉴定
宋贵平.,郑海涛,何计国
食品科学 , 2011,
Abstract: ?目的:建立三聚氰胺残留的免疫分析方法。方法:以三聚氰胺结构类似物2-氯-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪为原料,分别与6-氨基己酸和对氨基苯甲酸,各经两步化学反应合成两种具有不同长度间隔臂的半抗原mea和meb,并分别通过碳二亚胺法和混合酸酐法将mea和meb与牛血清白蛋白(bsa)和卵清蛋白(ova)偶联,制备三聚氰胺的免疫原(mea-bsa)和包被原(meb-ova)。结果:经质谱和紫外光谱表征,证明所合成的产物为目标半抗原mea和meb,并且与载体蛋白偶联比可达到25.28:1(mea-bsa)和13.11:1(mea-ova)。结论:半抗原mea和meb及人工抗原合成成功。
真菌毒素人工抗原制备方法研究进展
吴春生,马良,胡媛媛,张宇昊
食品科学 , 2014,
Abstract: ?基于免疫原理的酶联免疫吸附技术和金标免疫层析技术等是目前真菌毒素主要的快速检测技术。人工完全抗原的制备和抗体的性质是免疫快速检测技术中最关键的因素。本文对我国粮油产品危害较大的重点真菌毒素,综述目前国内外其各种人工抗原的制备/合成技术,并分析存在的问题和解决方法,为小分子污染物人工完全抗原的定向制备以及获得高亲和性高效价抗体提供一定的理论基础。
两种特异性氰戊菊酯人工抗原的合成与鉴定
熊振宇,杨艳燕,李培武,张奇,张文,丁小霞
食品科学 , 2011,
Abstract: ?选择化学结构具有典型研究意义的氰戊菊酯(fenvalerate,fen)为研究对象,利用有机化学合成法在氰戊菊酯分子的一端分别引入两种不同连接长度的连接臂。通过核磁共振(1h-nmr)、液相色谱-质谱联用仪(lc-ms-ms)鉴定,成功合成两种半抗原fen1和fen2,并与牛血清蛋白(bovineserumalbumin,bsa)偶联合成了两种氰戊菊酯免疫特异性人工抗原fen1-bsa、fen2-bsa,经紫外分光光度仪扫描,人工抗原的紫外图谱相对于半抗原和载体蛋白有明显差异,测得偶联比分别约为9:1和10:1,经sds-page电泳检测表明偶联成功。
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