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Soluble expression of recombinant cyclophilin A in Escherichia coli
重组亲环蛋白A的可溶性表达

YAN Xiao,XU Li-ren,GUAN Yi-xin,YAO Shan-jing,
闫啸
,徐立仁,关怡新,姚善泾

浙江大学学报(农业与生命科学版) , 2010,
Abstract: 为获得高表达量的可溶亲环蛋白A(cyclophilin A,CypA),对重组CypA质粒表达和工程菌的培养过程进行研究.首先将pRSET-CypA质粒转入Escherichia coli BL21菌株,获得表达CypA的重组工程菌;然后以2×YT为基本培养基,对培养基组成包括碳源、氮源和氨苄青霉素浓度进行优化,并考察接种量和诱导条件(诱导剂浓度、诱导时机、诱导后培养时间)等对目标蛋白表达量的影响.结果表明:通过控制培养温度和转速可大大减少CypA包涵体的量;以甘露醇为碳源能显著提高目标蛋白的表达量;优化的培养基组成为蛋白胨16 g·L-1,酵母提取物10 g·L-1,NaCl 5 g·L-1,甘露醇10 g·L-1,Amp 50 mg·L-1;在对数生长期中期OD600为1.3时加入1 mmol·L-1 IPTG诱导,然后在30 ℃、180 r·min-1条件下继续培养9 h收获菌体;优化后目标蛋白CypA产量为66.7 mg·L-1发酵液,与优化前相比提高了76.6%.
γ射线辐照对bep2d细胞蛋白质组的影响
薛振伟,周小林,崔梅萍
癌变·畸变·突变 , 2011,
Abstract: ?目的:利用蛋白质组学方法,研究与人永生化支气管上皮细胞(bep2d细胞)辐照相关的差异蛋白质,寻找辐射致肺癌早期诊断和治疗的新指标。方法:分别培养并收集了0、1.5和3.0gyγ射线辐照24h后的bep2d细胞样品,用双向凝胶电泳技术分离照射组与对照组细胞样品中的总蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(maldi-tof-ms)得到相应的肽质量指纹图,并最终鉴定差异蛋白质。结果:质谱鉴定获得10张肽质量指纹图,经数据库搜索后8个蛋白点被初步鉴定(2个蛋白点无结果),其中1个蛋白点重复。用mascot软件查询ncbinr数据库初步鉴定出7种差异表达的蛋白质,即亲环素a、肌球蛋白轻链2、细胞角蛋白9、α-烯醇酶、磷酸丙糖异构酶1、makorin环指蛋白1、c-myc启动子结合蛋白1。结论:所鉴定的7种蛋白与辐射诱导肺癌的发生、发展过程密切相关,为寻找辐射致肺癌早期诊断和治疗的新靶点提供了理论依据。
基质金属蛋白酶诱导因子和亲环素A在人根尖囊肿和根尖肉芽肿中的表达及临床意义
Expression and Clinical Significance of CD147 and CypA in Periapical Granulomas and Radicular Cysts.

胡淑丽, 王艳青, 董艳, 张红艳
HU Shu-li
,WANG Yan-qing,DONG Yan,ZHANG Hong-yan.

- , 2016, DOI: 10.13701/j.cnki.kqyxyj.2016.07.015
Abstract: 摘要 目的: 检测细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)和亲环素A(CypA)在根尖肉芽肿和根尖囊肿中的表达,探讨CD147和CyPA在人慢性根尖周炎发生发展中的作用。方法: 收集经根尖手术切除所获得的根尖肉芽肿35例和根尖囊肿30例作为实验组,同时收集埋伏阻生智齿拔除术或行牙槽骨修整术凿下的8例健康牙槽骨作为正常对照组。CBCT图像记录病例的病损大小。运用免疫组织化学法检测所有样本中CD147和CypA的蛋白表达,分析CD147和CypA的蛋白表达水平。结果: 根尖囊肿组两种蛋白的表达水平均高于肉芽肿组(P<0.05)。CD147和CypA 的蛋白表达水平在根尖囊肿和根尖肉芽肿中呈正相关(P<0.05);CD147和CypA 的表达水平均与慢性根尖周炎的病变大小呈正相关(P<0.05)。结论: CD147和CypA可能参与根尖周病损的炎性反应和骨质吸收。CD147-CypA相互作用在人慢性根尖周病的发生发展过程中可能发挥了某种协同作用
小球藻亲环蛋白A的酶活性及过表达拟南芥抗盐性分析
Prokaryotic Expression,Activity Assay of Chlorella Cyclophilin A and Salt Tolerance Analysis of Arabidopsis Over-expressing CsCyp1A

廖栩, 何明良, 张素艳, 马海燕, 王旭辉, 罗秋香, 管清杰
LIAO Xu
, HE Ming-Liang, ZHANG Su-Yan, MA Hai-Yan, WANG Xu-Hui, LUO Qiu-Xiang, GUAN Qing-Jie

植物研究 , 2017, DOI: 10.7525/j.issn.1673-5102.2017.05.012
Abstract: 在前期研究中分离到噬碳酸盐小球藻(Chlorella sp.X1)的亲环蛋白基因CsCyp1A(登录号:KY207381),编码CsCyp1A蛋白是否具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性功能是进一步研究它参与小球藻耐盐生物学过程的基础。通过His标签的pQE-30-CsCyp1A原核蛋白表达载体,经IPTG诱导它的E.coli M15菌株表达融合蛋白,Nitra-柱纯化后获得纯化的30 kDa左右的His-CsCyp1A融合蛋白质,Western杂交检测到HisCsCyp1A蛋白的杂交信号。酶活性分析显示,HisCsCyp1A融合蛋白中生色基团的产生速度明显快于对照,表明CsCyp1A蛋白可以催化底物N-succinyl-Xaa-Pro-Phe-p-nitroanilide中Xaa-Pro肽键的顺反折叠,说明纯化的CsCyp1A蛋白具有PPIase活性。典型的亲环蛋白家族成员具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性,参与折叠和转运、信号转导、免疫调节、细胞凋亡等生物学过程。真空渗入法侵染转化的拟南芥在35S启动子驱动下超表达CsCyp1A基因,耐盐性研究表明它提高了过表达株系对NaCl胁迫的耐性,揭示小球藻CsCyp1A基因的抗盐性功能,它将成为抗逆育种的基因资源。本研究也为探索小球藻亲环蛋白A的抗盐碱胁迫生物学作用和分子育种奠定了基础。
低温胁迫下花生差异表达基因的分离与分析
于树涛,于洪波,苏君伟,赵立仁,史普想,赵艳,唐月异,王秀贞,吴琪,王传堂
核农学报 , 2014, DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2014.04.0569
Abstract: 筛选74个花生种质材料,最后以发芽率在80%以上的9650作为试验材料。对9650分别进行2℃和25℃(对照)处理,分别提取2、6和8h花生样品的总RNA。利用GeneFishing随机引物,克隆测序,获得34个独特的基因序列。经BLAST2GO注释,包括参与细胞合成的组分、应激蛋白反应、代谢过程中的转运与运输、蛋白质的合成、以及耐低温相关的基因序列。进一步利用定量RT-PCR证实了4个基因的相对表达量,选择其中亲环蛋白基因相关序列,通过5'-RACE获得cDNA全长,为通过转基因技术对其进行功能分析奠定了基础。
陆地棉GhCYP1基因的分离及其表达分析
李元宝,王亦学,司怀军,吴家和
华北农学报 , 2011, DOI: 10.7668/hbnxb.2011.06.007
Abstract: 应用SSH-PCR技术,在筛选到抗旱相关基因的EST序列基础上,采用RACE技术,分离克隆到全长为801bp,含编码序列(CDS)为522bp的棉花抗旱相关基因GhCYP1。氨基酸序列比对发现,该基因与拟南芥、水稻、人等的亲环蛋白基因高度同源,都具有由11个连续氨基酸所组成的单结构域亲环蛋白典型结构,且在保守区都具有PPIase活性所必需的3个氨基酸(R、F、H)以及与环孢素A(CsA)结合位点密切相关的色氨酸(W)。利用半定量RT-PCR对该基因的表达模式进行分析,发现其在棉花的叶、茎、根中均有表达,且在根中的表达量最高,暗示了该基因可能与植物根系吸水及矿物运输有关,从而在棉花适应干旱胁迫环境中发挥着关键作用。
昆虫致病性斯氏线虫亲环素基因的克隆、特征及表达分析
郝友进,付丹影,何正波,陈斌
重庆师范大学学报(自然科学版) , 2014, DOI: 10.11721/cqnuj20140105
Abstract: 亲环蛋白(Cyclophilin)广泛存在于原核和真核生物中,在进化过程中结构保守,多数具有肽基脯氨酰基顺反异构酶活性。本文在斯氏线虫(Steinernemacarpocapsae)差减杂交分析的基础上,克隆一个亲环蛋白基因(Sca-CYN)。该胞质蛋白有171个氨基酸组成,分子量约为16.2kD,等电点约为6.89。BLAST分析表明,Sca-CYN蛋白与线虫、昆虫及其它生物亲环蛋白的序列一致性达75%~89%。基因表达分析显示该基因在寄生初期就上调表达。序列比较及进化标记分析发现Sca-CYN为秀丽隐杆线虫亲环蛋白3的直系同源蛋白。同源建模分析显示该蛋白具有亲环蛋白的经典三维结构。系统发育分析结果表明该蛋白在进化早期与其同源基因分离。研究结果为进一步研究该基因功能及探讨线虫亲环蛋白基因家族的分子进化提供基础。
重组人亲环素A的表达、纯化及活性测定
李芳秋,赵权,武建国,单祥年
微生物学报 , 1998,
Abstract: 将RT-PCR扩增得到的亲环素A(CyPA)基因片段插入原核表达载体pET11c中,得到重组质粒pET11/CyPA,转入大肠杆菌获得高效表达。Spe-PAGE分析表明,重组CyPA表达量占菌体可溶性蛋白的40%以上。经50%硫酸铵沉淀和DEAESepharoseCL-6B柱层析可纯化重组CyPA。用糜蛋白酶偶联法测定显示重组CyPA具有肽基脯氨酸顺/反异构酶活性。
新疆锡伯族、蒙古族高血压患者血清cypa水平变化及其临床意义
王忠,郑丽华,巴音巴特,徐晓红,王春勇,任宏强,赵若飞
天津医药 , 2015,
Abstract: ?目的观察新疆锡伯族、蒙古族原发性高血压(eh)患者血清亲环素a(cypa)水平并探讨其临床意义。方法选取锡伯族eh患者76例和健康对照者62例,蒙古族eh患者66例和健康对照者57例。采用酶联免疫吸附法(elisa)测定血清cypa,检测各组的年龄、体质量指数(bmi)、腰围、腰臀比、血压等各项指标,并分析血清cypa与各指标的相关性。结果新疆锡伯族、蒙古族eh组血清cypa水平均显著高于健康对照组(p<0.05);蒙古族eh组血清cypa水平显著高于锡伯族eh组(p<0.05);高血压患者血清cypa水平与血压呈正相关(p<0.05)。结论新疆锡伯族、蒙古族eh患者血清cypa明显升高,并与血压存在一定的相关性。血清cypa升高是新疆锡伯族、蒙古族eh的危险因素。
亲环素a过表达对高温、紫外线和顺铂引起的h1299细胞凋亡的影响
阎瑾,赵晓婷,江妹,顾勐,岳文涛
癌变·畸变·突变 , 2015,
Abstract: ?目的:探讨人肺癌细胞株h1299过表达亲环素a(cypa)后对高温、紫外线和顺铂作用引起的细胞凋亡的影响。方法:采用重组慢病毒介导构建cypa过表达h1299细胞株h1299cypaoe,并用westernblot方法验证cypa过表达细胞株是否成功构建。培养h1299和h1299cypaoe细胞株,分别进行高温(44℃处理60min)、紫外线(90μw/cm2处理60min)和顺铂(37.5、75和150μg/ml作用2h)处理后,用高内涵分析平台检测细胞的晚期凋亡。结果:h1299cypaoe细胞能检测到绿色荧光,且其cypa蛋白表达较h1299细胞明显增高,表明h1299cypaoe细胞株构建成功。在不同顺铂浓度下,h1299cypaoe细胞凋亡率较h1299细胞均明显降低(p均<0.05),而在高温和紫外线作用下,h1299cypaoe细胞凋亡率与h1299细胞相比差异均无统计学意义(p均>0.05)。结论:cypa过表达对顺铂诱导的凋亡有抵抗作用,表明cypa可作为潜在的联合化疗的基因靶点,有望为临床个体化治疗提供新的思路。
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