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焦曲霉产木聚糖酶的研究*
朱静,王皓,梁改芹,严自正
生物工程学报 , 1999,
Abstract: 从1144株真菌中筛选到一株产木聚糖酶活力较高的焦曲霉(Aspergillus ustus)。该菌株适宜的产酶条件为在4%麸皮液中添加0.5%葡萄糖,0.4%硝酸钠及0.1%氯化钠,30℃振荡培养6d,木聚糖酶活力可达2176 u/mL。酶反应的最适温度为55℃,最适pH为5.5,在pH5~8酶活力稳定。45℃保温1h,酶活力剩余35%。酶水解桦木木聚糖的Km值为4.3×10-3g/mL,Vmax值为4.9mg/(mL·min)。酶解产物以木三糖和木四糖为主,表明该酶是一种典型的内切糖苷酶。
焦曲霉产木聚糖酶的研究*
朱静 王皓 梁改芹 严自正
生物工程学报 , 1999,
Abstract: 从1144株真菌中筛选到一株产木聚糖酶活力较高的焦曲霉(aspergillusustus)。该菌株适宜的产酶条件为在4%麸皮液中添加0.5%葡萄糖,0.4%硝酸钠及0.1%氯化钠,30℃振荡培养6d,木聚糖酶活力可达2176u/ml。酶反应的最适温度为55℃,最适ph为5.5,在ph5~8酶活力稳定。45℃保温1h,酶活力剩余35%。酶水解桦木木聚糖的km值为4.3×10-3g/ml,vmax值为4.9mg/(ml·min)。酶解产物以木三糖和木四糖为主,表明该酶是一种典型的内切糖苷酶。
黑曲霉An-76木聚糖酶系的酶学研究
陈惠忠,高培基,王祖农
微生物学报 , 1991,
Abstract: 用分子筛和离子交换等色谱分离技术,由黑曲霉An-76的木聚糖酶系中分离纯化到一种β-木糖苷酶(βx)和三种内切-β-木聚糖酶组分(EX1,EX 2,EX 3)。这几种酶均达到凝胶电泳纯和聚焦电泳纯。用凝胶过滤方法测得3X的分子量为147000,用凝胶电泳法测得EX1、EX2和EX3的分子量分别为2 3000、22000和41 000;βX、EX1、EX2和EX 3的等电点分别为4.6、5.9、4.1和3.9。本文还研究了各种酶的最适反应温度和PH、酶的热稳定性和pH稳定性;研究了金属离子和巯基试剂对酶活力的影响、动力学参数、氨基酸组成、底物持异性和反应产物等。各酶组份不具有分解纤维素的交叉活力。巯基试剂能完全抑制卢βX活力,其活力丧失可被半胱氨酸恢复。
海枣曲霉β-木糖苷酶的提纯和性质
曾字成,张树政
微生物学报 , 1993,
Abstract: 从海枣曲霉(Aspergillus phoenicis)麦麸培养物抽提液中。通过聚乙二醇6000-磷酸钾缓冲液双水相分离.相继用SephadexG-100凝胶过滤、DEAE—Sephadex A-50离子交换柱层析、羟基磷灰石吸附层析、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、SE—Sephadex C-50离子交换层析以及Sephadex G-50柱层析等提纯步骤,提纯到凝胶电泳均一的β-木糖苷酶。该酶的最适pH为3.5,最适温度为65 C.在pH3.5—6.5之间稳定,酶保温30分钟时的半失活温度(t1-2)为68C。酶的分子量勾95 000,等电点为4.4。Hg2-和Ag+对该酶有强烈的抑制作用。在所测定的底物中.Β-术糖苷酶仅对β-木精苷(pNP-β-Xyl)有强水解作用。其Km值为0.63mmol/L.Vmax为410 umol·min 1.Mg-1。D-木糖为β-木糖苷酶的竞争性抑制剂,其K.值为7.5mmol/L。
沙田柚β-D-木糖苷酶基因的鉴定及序列分析
Identification and Sequence Analysis of β-D-Xylosidase Gene from Citrus grandis var. Shatinyu Hort
 [PDF]

覃信梅, 韩愈, 郭丹妮, 刘玉洁, 李惠敏, 秦新民
World Journal of Forestry (WJF) , 2016, DOI: 10.12677/WJF.2016.54012
Abstract:
从沙田柚自交和异交花柱转录组测序中鉴定了β-D-木糖苷酶基因序列。该基因全长为2647 bp (GenBank登录号为KU925841),开放阅读框(ORF)为2385 bp,共编码794个氨基酸,编码的蛋白质的分子量为87.30 kDa,理论等电点为5.87。β-D-木糖苷酶基因编码蛋白为亲水性蛋白,含有1个与糖基水解酶家族蛋白相同的保守CAS结构域。β-D-木糖苷酶基因在沙田柚在未授粉花柱中的表达量(RPKM)为0.07,自花授粉1、2、3 d花柱中的表达量(RPKM)分别为43.13、27.84、1.95,在异花授粉1、2、3 d花柱中基因的表达量(RPKM)则分别为33.90、76.14和49.63。系统进化树显示沙田柚β-D-木糖苷酶与甜橙(Citrus sinensis, XM_006468131)和克莱门柚(Citrus clementina, XM_006449591)亲缘关系很近,属于同一进化分支。
β-D-Xylosidase gene was identified from the transcriptome of the self-pollinated style and cross- pollinated style of Citrus grandis var. Shatinyu Hort. It is 2647 bp (GenBank accession number: KU925841) in length with an open reading frame (ORF) of 2385 bp, encoding 794 amino acids with deduced molecular weight of 87.30 kDa, and theoretical pI value of 5.87. Bioinformatics analysis showed that β-D-Xylosidase is a hydrophilic protein, and contained a same conserved CAS structure domain with the glycosyl hydrolase family. The expression of β-D-Xylosidase gene in unfertilized style was 0.07. in 1 - 3 day self-pollinated styles were 43.13, 27.84 and 1.95 respectively. Whereas, the expression of β-D-Xylosidase gene in 1 - 3 day cross-pollinated styles were 33.90, 76.14 and 49.63 respectively. Phylogenetic analysis revealed that β-D-Xylosidase showed closer kinship with that of Citrus sinensis and Citrus clementina, indicating that they belong to the same evolutionary branch.
嗜碱芽孢杆菌c-125木糖苷酶基因的表达与酶特征鉴定
梁艳丽?,李兴玉?,Shin Hyundong?,Chen R. Rachel?,毛自朝?
生物工程学报 , 2009,
Abstract: 嗜碱芽孢杆菌(bacillushalodurans)c-125菌株的基因组中,一个编码木糖苷酶的基因(bh1068)被克隆并在大肠杆菌中获得高效表达。通过全面分析纯化蛋白,确证了它的木糖苷酶功能。该酶在ph4~9的范围内保持稳定,最适ph值为中性,有较宽的最适温度(35°c~45°c),且能在45°c范围内保持稳定。这些特性使得该酶可在较为宽广的条件下对木聚糖进行酶促降解。该酶对人工合成底物对硝基苯-b-木糖苷(p-nitrophenyl-b-xylose,pnpx)的比活力为174mu/mg蛋白质,且木糖对其反馈抑制较弱(抑制常数ki为300mmol/l)。结果显示该酶是活性较高且较耐木糖抑制的细菌源木糖苷酶。该酶与商品化的木聚糖酶一起水解山毛举木聚糖(beechwoodxylan)时显示了增效作用,且水解率可获40%。该酶最适ph为中性,对木糖耐受等特性与大多数来源于真菌、最适ph为酸性、对木糖敏感的木糖苷酶将有较好的互补。结果表明该酶在木聚糖或含木聚糖多糖的单糖化过程可能发挥重要作用。
海枣曲霉木聚糖酶III糖组成及糖肽结合键研究
江均平,严自正,张树政
菌物学报 , 1996,
Abstract: 海枣曲霉木聚糖酶III经PAGE和SDS-PAGE后用Schiff’s试剂染色证明为糖蛋白。经硅胶薄层层析和毛细管气相色谱测定,每分子酶约含4个葡萄糖和1个甘露糖残基。木聚糖酶III经β一消除反应后在241nm处出现一个新的吸收峰。在N2保护下用含NaBH4的NaoH溶液处理后,其Ser和Thr减少,相对应丙氨酸增加,并出现Ⅸ一氨基丁酸。估测酶分子中存在约3个O-糖苷键,糖残基通过O-糖苷键连接于肽链中丝氨酸或苏氨酸上。
里氏木霉内切葡萄糖苷酶Ⅳ在毕赤酵母中的表达*
汤新,刘刚,田生礼,张煜,邢苗
微生物学通报 , 2005,
Abstract: 进行了内切葡萄糖苷酶Ⅳ(EGⅣ)在毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中的表达。采用RT-PCR的方法从里氏木霉(Trichoderma reesei)中分离到eg4基因。将eg4基因与毕赤酵母表达载体pPICZαA连接,得到重组质粒pPICZαA-eg4。将该重组质粒线性化后转化毕赤酵母GS115,eg4基因通过同源重组被整合到毕赤酵母的染色体上,并处于酵母α因子的下游,得到重组菌株P.pastoris-EGⅣ1。在甲醇
重组大肠杆菌高效分泌表达β-木糖苷酶发酵条件的优化
陈洲,贾会勇,闫巧娟,杨绍青,滕超,江正强
微生物学通报 , 2013,
Abstract: 【目的】嗜热拟青霉β-木糖苷酶基因在大肠杆菌中高效分泌表达重组β-木糖苷酶摇瓶发酵条件优化, 及5 L发酵罐放大培养。【方法】通过单因素试验对诱导剂种类及其添加量、诱导起始OD600、培养温度、培养时间进行优化研究。【结果】摇瓶优化结果表明: 2%乳糖为诱导剂、培养温度为33 °C、OD600控制在0.8?0.9时诱导为最佳产酶条件, 在此条件下培养48 h后胞外酶活达到103.9 U/mL, 胞外分泌的比例高达99%以上。进行5 L发酵罐放大培养, 发酵48 h胞外酶活达到最高值392.5 U/mL, 蛋白含量为10.1 g/L。【结论】该重组大肠杆菌高效分泌β-木糖苷酶, 具有较好的工业化生产前景。
Protoplast mutagenesis for improving β-glucosidase production of Aspergillus niger
黑曲霉原生质体诱变选育β-葡萄糖苷酶高产菌株

Chunli Wang,Gaihong Wu,Chang Chen,Shulin Chen,
王春丽
,武改红,陈畅,陈树林

生物工程学报 , 2009,
Abstract: 本研究报道了以原生质体诱变技术选育高产β-葡萄糖苷酶的黑曲霉菌株,并研究了其发酵特性。以黑曲霉CGMCC3.316为出发菌株,通过紫外诱变得到突变株3-3M。然后以3-3M为供试菌株,研究了其原生质体制备与再生的条件。最后通过原生质体诱变,选育得到一株β-葡萄糖苷酶活力较高的突变株60B-3D。该菌株具有良好的遗传稳定性,酶活力平均达到23IU/mL,与出发菌株CGMCC3.316相比提高39%。此外,该菌株的木聚糖酶活力也有所增加。同时考察了黑曲霉60B-3D的发酵特性,并与3-3M和出发菌株进行比较,结果表明该菌株有较高的蛋白分泌能力。本研究为发酵生产β-葡萄糖苷酶提供了一株良好的供试菌株。
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