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Sistema analítico de evaluación de la actividad biológica del reactivo hemoclasificador HEMO-CIM ANTI-A Analytical system of evaluation of the biological activity of anti-A hemo-cim hemoclassifier reagent
Lilia Suárez Batista,Alina Hernández Santana,René Rivero Jiménez,Antonio Bencomo Hernández
Revista Cubana de Hematolog?-a, Inmunolog?-a y Hemoterapia , 2000,
Abstract: Con el objetivo de llevar a cabo el escalado industrial de los productos hemoclasificadores a partir de anticuerpos monoclonales murinos, se realizaron diversas actividades para crear las condiciones que permitieran su manufactura con el cumplimiento de las buenas prácticas de producción en el Centro de Inmunología Molecular. Se introdujeron los métodos analíticos para determinar la calidad del producto hemoclasificador Hemo-CIM anti-A en el Departamento de Control de la Calidad, se entrenó al personal responsable de esta actividad en el uso de estos métodos de evaluación de la actividad biológica del AcM anti-A en el sobrenadante, líquido ascítico y producto terminado; se dise aron y elaboraron los documentos que forman parte del sistema de documentación; entre ellos, los procedimientos normalizados de operación (PNO), los expedientes maestros de lotes, los documentos para la recolección de datos, así como los registros de lote, los certificados de calidad y los registros de las mediciones de la actividad biológica para archivar los resultados en el laboratorio With the objective of carrying out industrial scaling of hemoclassifier products from murin monoclonal antibodies, a number of activities were performed to create the conditions for their manufacture in compliance with good manufacturing practices of the Molecular Immunology Center. The analytical methods were introduced to determine the quality of anti-A Hemo-CIM hemoclassifier in the Quality Assurance Department. Staff responsible for this work was trained in the use of these evaluation methods of the biological action of anti-A monoclonal antibody in supernatant, ascitic fluid and finished product; the documents that are part of the documentation system were designed and prepared, among them standard operating procedures, master production batch records, documents for data-gathering, batch records, quality certificates and biological activity measurement registers to file lab results
Ensayo inmunoenzimático para la detección de anticuerpos monoclonales contra las proteínas E y NS1 del virus dengue
SUSANA VAZQUEZ,MARITZA PUPO,JOSE LUIS PELEGRINO,LUIS MORIER
Revista Cubana de Medicina Tropical , 1995,
Abstract: Se estandarizó un ELISA para la detección de anticuerpos monoclonales a las proteínas E y NS1 del virus dengue. Se aplicó un ELISA indirecto utilizando como fuente de antígeno células C6/36 inoculadas con la cepa A-15 aislada durante la epidemia de dengue 2 en 1981. Estas células fueron fijadas en placas ELISA a una concentración de 200 000 células/pozo. Se utilizó un control celular en condiciones similares. Para normalizar el sistema se emplearon anticuerpos monoclonales específicos a ambas proteínas. Se realizaron estudios a diferentes tiempos de incubación para determinar el momento de mayor expresión de estas proteínas en la membrana celular. Los resultados muestran una respuesta máxima a las 72 horas posinoculación para ambas proteínas, se obtuvo una sensibilidad para la detección de NS1 de 14,7 ng/mL y para la E de 1,43 ng/mL. Este sistema permite el tamizaje primario de anticuerpos monoclonales a las proteínas E y NS1 del virus dengue 2.
Anticuerpos monoclonales que reconocen al polisacárido capsular de Cryptococcus neoformans
Rodríguez Sánchez,Hermis; Pupo Antúnez,Maritza; Ilnait,María Teresa; Otero,Anselmo; Martínez Machín,Gerardo;
Revista Cubana de Medicina Tropical , 2005,
Abstract: se estableció como objetivo la obtención de anticuerpos monoclonales (acm), mediante la tecnología de fusión celular, capaces de reconocer a la fracción glucuronoxilomanano (gxm), serotipo a. cryptococcus neoformans es un hongo levaduriforme rodeado por una cápsula polisacarídica y agente de micosis profundas en el hombre, que afecta particularmente a los pacientes con el síndrome de inmunodeficiencia adquirida. fueron inmunizados 3 grupos de ratones balb/c con gxm acoplado a eritrocitos de carnero con una dosis de 10 μg de gxm vía subcutánea, 50 μ g de gxm vía subcutánea y 50 μ g de gxm vía intraperitoneal. se obtuvieron 2 hibridomas secretores de acm murinos contra el polisacárido capsular de cryptococcus neoformans, de la clase igg 1 , cadena ligera k , los sobrenadantes de cultivo fueron evaluados por elisa utilizando el polisacárido capsular sin conjugar. estos anticuerpos serán utilizados en estudios de protección y fagocitosis in vitro.
Anticuerpos monoclonales que reconocen al polisacárido capsular de Cryptococcus neoformans
Hermis Rodríguez Sánchez,Maritza Pupo Antúnez,María Teresa Ilnait,Anselmo Otero
Revista Cubana de Medicina Tropical , 2005,
Abstract: Se estableció como objetivo la obtención de anticuerpos monoclonales (AcM), mediante la tecnología de fusión celular, capaces de reconocer a la fracción glucuronoxilomanano (GXM), serotipo A. Cryptococcus neoformans es un hongo levaduriforme rodeado por una cápsula polisacarídica y agente de micosis profundas en el hombre, que afecta particularmente a los pacientes con el síndrome de inmunodeficiencia adquirida. Fueron inmunizados 3 grupos de ratones Balb/c con GXM acoplado a eritrocitos de carnero con una dosis de 10 μg de GXM vía subcutánea, 50 μ g de GXM vía subcutánea y 50 μ g de GXM vía intraperitoneal. Se obtuvieron 2 hibridomas secretores de AcM murinos contra el polisacárido capsular de Cryptococcus neoformans, de la clase IgG 1 , cadena ligera k , los sobrenadantes de cultivo fueron evaluados por ELISA utilizando el polisacárido capsular sin conjugar. Estos anticuerpos serán utilizados en estudios de protección y fagocitosis in vitro.
Anticuerpos monoclonales: desarrollo físico y perspectivas terapéuticas
MACHADO,NINA PATRICIA; TéLLEZ,GERMáN ALBERTO; CASTA?O,JOHN CARLOS;
Infectio , 2006,
Abstract: los anticuerpos monoclonales son glucoproteínas especializadas que hacen parte del sistema inmune, producidas por las células b, con la capacidad de reconocer moléculas específicas (antígenos). los anticuerpos monoclonales son herramientas esenciales en el ámbito clínico y biotecnológico, y han probado ser útiles en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades infecciosas, inmunológicas y neoplásicas, así como también en el estudio de las interacciones patógeno-hospedero y la marcación, detección y cuantificación de diversas moléculas. actualmente, la incorporación de las técnicas de biología molecular e ingeniería genética y proteica han permitido ampliar el horizonte de la generación de anticuerpos monoclonales y sus usos, y se han encontrado técnicas como la hibridación, la quimerización, la humanización y la producción de anticuerpos monoclonales totalmente humanos. es una de las áreas de mayor crecimiento en la industria biotecnológica y farmacéutica; en el mercado se encuentran cerca de 29 anticuerpos monoclonales aprobados por la food and drug administration (fda) de los estados unidos para uso en humanos.
Ensayo inmunoenzimático para la detección de anticuerpos monoclonales contra las proteínas E y NS1 del virus dengue
VAZQUEZ,SUSANA; PUPO,MARITZA; PELEGRINO,JOSE LUIS; MORIER,LUIS; CASTILLO,AIDA; OTERO,ANSELMO; GUZMAN,MARIA GUADALUPE;
Revista Cubana de Medicina Tropical , 1995,
Abstract: se estandarizó un elisa para la detección de anticuerpos monoclonales a las proteínas e y ns1 del virus dengue. se aplicó un elisa indirecto utilizando como fuente de antígeno células c6/36 inoculadas con la cepa a-15 aislada durante la epidemia de dengue 2 en 1981. estas células fueron fijadas en placas elisa a una concentración de 200 000 células/pozo. se utilizó un control celular en condiciones similares. para normalizar el sistema se emplearon anticuerpos monoclonales específicos a ambas proteínas. se realizaron estudios a diferentes tiempos de incubación para determinar el momento de mayor expresión de estas proteínas en la membrana celular. los resultados muestran una respuesta máxima a las 72 horas posinoculación para ambas proteínas, se obtuvo una sensibilidad para la detección de ns1 de 14,7 ng/ml y para la e de 1,43 ng/ml. este sistema permite el tamizaje primario de anticuerpos monoclonales a las proteínas e y ns1 del virus dengue 2.
Estabilidad del producto hemoclasificador Hemo-CIM Anti-B: Evaluación durante 2 a os Stability of the Anti-B Hemo-CIM hemoclassifier product: A 2-year evaluation
Lilia E Suárez Batista,René A Rivero Jiménez,Antonio A Bencomo Hernández,Marta N Martínez Solís
Revista Cubana de Hematolog?-a, Inmunolog?-a y Hemoterapia , 2001,
Abstract: Los estudios de estabilidad de los reactivos frabricados a partir de anticuerpos monoclonales de origen murino, permiten establecer adecuadamente la vida de estos productos, y su realización constituye un requisito indispensable en el cumplimiento de las buenas prácticas de producción. Se usaron los métodos de hemaglutinación para medir la actividad biológica del producto Hemo-CIM Anti-B expresada en la potencia, la avidez y la intensidad, frente a un panel de eritrocitos del grupo B y A1B, para demostrar más efectivamente cualquier deterioro del reactivo. Se estableció que la vida útil del hemoclasificador producido en el Centro de Inmunología Molecular es de 2 a os con una temperatura de almacenamiento entre 2 y 8 oC. La evaluación que simula las condiciones a la que los usuarios someten a estos reactivos, demostró que el reactivo mantiene las características de calidad que se requieren para su uso. La estabilidad lograda con el Hemo-CIM Anti-B es similar a la informada con el producto hemoclasificador monoclonal murino Hemo-CIM Anti-A The stability studies of the reagents made from monoclonal antibodies of murine origin allow to establish the life of these products adequately and are an indispensable requisite for the fulfillment of the good practices of production. The hemagglutination methods were used to measure the biological activity of the Anti-B Hemo-CIMa product expressed in the potency, avidity and intensity against a panel of erythrocytes of the group B and A1B in order to show in a more effective way any deterioration of the reagent. It was established that the useful life of the hemoclassifier produced at the Center of Mollecular Biology is of 2 years at a storage temperature between 2 and 8oC. The evaluation that simulates the conditions to which the users subject these reagents showed that the reagent maintains the quality characteristics required for its use. The stability attained with the Anti-B Hemo-CIMa is similiar to that reported with the murine monoclonal Anti-A Hemo-CIMa hemoclassifier product
Amplificación dependiente de anticuerpos del virus dengue en cepas cubanas utilizando anticuerpos monoclonales Dengue virus antibodies dependent amplification in Cuban strains by using monoclonal antibodies
Maritza Pupo,Nevis Amín,Mailing álvarez,Luis Morier
Revista Cubana de Medicina Tropical , 2004,
Abstract: Se describieron los diferentes comportamientos de anticuerpos monoclonales anti-dengue serotipo 2 (H3/6, 4G3) y anti-proteína recombinante de la envoltura del virus dengue cuando fueron enfrentados a diferentes cepas de los serotipos 2 y 4 de este virus (D2 Nueva Guinea C, A15 cepa cubana y A15 propagada 53 veces en cultivo de ri ón de perro Beagly y D4 H-2412 cepa prototipo) en un ensayo de inmunoamplificación dependiente de anticuerpos. Los anticuerpos monoclonales han demostrado ser una herramienta eficaz para explicar que la neutralización y el incremento de la multiplicidad viral pueden realizarse como funciones biológicas separadas. Solamente el AcM H3/6 fue capaz de producir el fenómeno amplificación dependiente de anticuerpos frente a la cepa A15 con un incremento significativo en la multiplicación viral. Los AcMs 4G3 y 4B6 no fueron capaces de inmunoamplificar la multiplicación viral de las cepas estudiadas. The different behaviors of antidengue monoclonal antibodies serotype 2 (H3/6, 4G3) and antiprotein recombinant from the dengue virus sheath were described when they faced diverse strains from the serotypes 2 and 4 of this virus (D2 New Guinea C, A15 Cuban strain and A15 propagated 53 times in culture of Beagley dog kidney and D4 H-22412 prototype strain) in an immunoamplification assay dependent of antibodies. Themonoclonal antibodies have prove to be an efficient tool to explain that the neutralizatrion and increase of viral multiplicity may be carried out as separate biological functions. Only the H3/6 monoclonal antibdoy was capable of producing the amplification assay dependent phenomenon against the A15 strain with a significant rise in the viral multiplication. The 4G3 and 4B6 monoclonal antibodies were not capable of immunoamplifying the viral multiplication of the studied strains.
Anticuerpos monoclonales al virus dengue 4: espectro de reactividad a los 4 serotipos del dengue
Maritza Pupo Antúnez,Mayling álvarez Vera,Melvis Soto Hernández,Hermis Rodríguez Sánchez
Revista Cubana de Medicina Tropical , 2000,
Abstract: Se generaron 3 anticuerpos monoclonales 8E8, 3F7 y 1E9 contra el virus dengue 4 cepa H-241. Estos anticuerpos monoclonales mostraron distintos patrones de reactividad contra los 4 serotipos de dengue y diferentes preparaciones de antígeno del serotipo 4, cuando fueron ensayados en varios métodos serológicos. El anticuerpo monoclonal 8E8 presentó una especificidad de serotipo (D-2, por inhibición de la hemaglutinación), subcomplejo (D-2 y D-4, por inmunofluorescencia) y de complejo por la técnica de inmunoperoxidasa. Fue capaz de neutralizar al virus homólogo en 80 % y resultó ser el único anticuerpo monoclonal reactivo en la prueba de fijación de complemento . El anticuerpo monoclonal 3F7 no reaccionó por inhibición de la hemaglutinación, reconoció a los serotipos D-1, D-2, D-3 y D-4 por inmunofluorescencia y sólo al D-1 y D-4 por inmunoperoxidasa mientras que fue incapaz de neutralizar el virus homólogo. El 1E9 fue reactivo solo por inhibición de la hemaglutinación contra los serotipos D-1, D-2, D-3, y D-4 y neutralizó el serotipo D-4. Todos los anticuerpos monoclonales fueron capaces de reaccionar contra diferentes antígenos de dengue mediante un ELISA de doble anticuerpo y mostraron actividad fluorescente contra el pase 38 en cultivo de ri ón de perros Beagle, sin embargo no fueron capaces de reaccionar con un antígeno recombinante de D-4. These types of monoclonal antibodies 8E8, 3F7 and 1E9 to dengue 4 virus H-241 strain. These monoclonal antibodies show various patterns of reactivity to the four dengue serotypes and different antigen preparations of serotype 4 when they were tested in various serological methods. The monoclonal antibody 8E8 exhibited a specificity of serotype (D-2 ; by hemagglutination inhibition); subcomplex (D-2 and D-4 by immunofluorescence) and complex (by immunoperoxidase technique). It was able to neutralize by 80% homologous virus and it turned out to be the only reactive monoclonal antibody in the complement fixation test. The monoclonal 3F7 did not react to by hemagglutination inhibition, recognized serotypes D-1, D-2, D-3 and D-4 by immunofluorescence and only serotypes D1 and D4 by immunoperoxidase technique but it was unable to neutralize the homologous virus. The 1E9 antibody was reactive to serotypes D1, D-2, D-3 and D-4 only by hemagglutination inhibition and neutralized serotype D-4. All the monoclonal antibodies were able to react to various dengue antigens through an ELISA of double antibody and showed fluorescent activity against 38th pass in Beagle dog kidney culture; however, they could not react to a D-4 reco
Inmunoterapia en la Artritis Reumatoidea
Virginia Torres,María Victoria Hernández Cuéllar,Roberto Amaro Relova,Ana María Torres Lima
Revista Cubana de Medicina General Integral , 1999,
Abstract: La inmunoterapia en la artritis reumatoidea incluye el uso de moléculas producidas por células del sistema inmune, o que participan en reacciones inflamatorias así como formas recombinantes de dichas moléculas. El desarrollo de anticuerpos monoclonales condujo al ensayo de terapias anticélulas T sin resultados alentadores. El tratamiento con anticuerpos monoclonales antifactor de necrosis tumoral alfa resulta prometedor actualmente; así como el uso de citokinas recombinantes que condicionen el predominio de células T cooperadoras tipo 2. Sin embargo, en el futuro el uso de la terapia génica podría ser el arma más poderosa para el tratamiento de la artritis reumatoidea The immunotherapy in the rheumatoid arthritis includes the use of molecules produced by cells of the immune system or that take part in inflammatory reactions as well as recombinant forms of such molecules. The development of monoclonal antibodies led to the trial of anti T cell therapies without encouraging results. The treatment with anti-tumor necrosis factor alpha monoclonal antibodies is promising at present, as well as the use of recombinant citokines that condition the predominance of type II helper-T-cells. However, in the future the use of gene therapy could be the most powerful weapon to treat rheumatoid arthritis
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