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利用pcr技术鉴别转化根癌农杆菌中外源和内源的gus基因  [PDF]
刘颖,金振华
中国生物工程杂志 , 1995,
Abstract: 利用pcr技术鉴别转化根癌农杆菌中外源和内源的gus基因刘颖,金振华(中国科学院发育生物学研究所,北京100080)林忠平(中国科学院植物研究所,北京100044)利用gus编码区引物,分别以取自根癌农杆菌lba4404及整合gus融合基因的ti质粒为模板,通过pcr扩增并用琼脂糖凝胶电泳鉴定其产物。结果表明,两种模板的扩增物都含有对应于gus编码区的1.8kb条带,证明农杆菌lba4404本身含有gus基因(内源),但是基因和gus融合基因(外源)的gus编码序列对bamhi作用的反应不同,据此可将二者区分开来。
抗氧化剂对农杆菌介导的大豆下胚轴GUS基因瞬时表达的影响  [PDF]
汲逢源, 王戈亮, 许亦农
植物生态学报 植物生态学报 , 2006, DOI: 10.17521/cjpe.2006.0044
Abstract: ?大豆(Glycinemax)下胚轴作为大豆遗传转化的外植体材料,能快速高频再生不定芽。然而,在遗传转化过程中褐化影响基因转化效率。在该研究中,我们用含有GUS染色基因和hptII(HygromycinphosphotransferaseII)筛选基因的农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)LBA4404侵染大豆下胚轴,并用组织化学定位法测定了GUS基因的瞬时表达,以确定大豆的优化基因转化条件。结果显示,在共培养基中加入硫代硫酸钠、L_半胱氨酸以及二硫苏糖醇等抗氧化剂,可以有效地抑制大豆下胚轴在组培过程中褐化的发生,并大幅度提高农杆菌在下胚轴的瞬时表达率。这些结果说明抗氧化剂可以降低这种影响并有效提高基因转化效率。
农杆菌介导的半夏GUS基因瞬时表达  [PDF]
贾永芳,马玉坤,郭余龙,李名扬
华北农学报 , 2007, DOI: 10.7668/hbnxb.2007.04.010
Abstract: 采用根癌农杆菌感染半夏无菌叶片、叶柄和愈伤组织,对GUS基因的瞬间表达进行研究,并分析了不同转化受体、感染时间、菌液浓度、共培养、预培养时间、菌种对GUS基因的瞬间表达的影响。结果显示,以半夏的无菌苗叶柄和愈伤组织,在OD值为0.2的EHA101或EHA105农杆菌液中感染15min,叶柄暗处共培养3d,愈伤组织2d,能够得到较高的GUS基因瞬间表达。
THE EFFECTS OF ANTIOXIDANTS ON THE TRANSIENT EXPRESSION OF GUS GENE IN SOYBEAN HYPOCOTYLS MEDIATED BY AGROBACTERIUM TUMEFACIENS
抗氧化剂对农杆菌介导的大豆下胚轴GUS基因瞬时表达的影响

JI Feng-Yuan,WANG Ge-Liang,XU Yi-Nong,
汲逢源
,王戈亮,许亦农

植物生态学报 , 2006,
Abstract: 大豆(Glycine max)下胚轴作为大豆遗传转化的外植体材料,能快速高频再生不定芽。然而,在遗传转化过程中褐化影响基因转化效率。在该研究中,我们用含有GUS染色基因和hptⅡ(Hygomycin phosphotrangeraseⅡ)筛选基因的农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404侵染大豆下胚轴,并用组织化学定位法测定了GUS基因的瞬时表达,以确定大豆的优化基因转化条件。结果显示,在共培养基中加入硫代硫酸钠、L-半胱氨酸以及二硫苏糖醇等抗氧化剂,可以有效地抑制大豆下胚轴在组培过程中褐化的发生,并大幅度提高农杆菌在下胚轴的瞬时表达率。这些结果说明抗氧化剂可以降低这种影响并有效提高基因转化效率。
α-硫辛酸对大豆农杆菌介导GUS瞬时表达和芽诱导的影响  [PDF]
杨晓凤,卢涛,周正剑,寿惠霞,唐桂香
大豆科学 , 2011, DOI: 10.11861/j.issn.1000-9841.2011.04.0552
Abstract: 以适宜转化大豆受体YC-2为材料,研究了抗氧化剂α-硫辛酸对农杆菌介导GUS瞬时表达和芽诱导率的影响。结果表明:在共培养基中添加不同浓度的抗氧化剂可显著降低外植体的褐化率,随α-硫辛酸浓度的增加外植体褐化率明显减少,但白化率增加,且这些白化的外植体在后期不易产生诱导芽;共培养中添加不同浓度的α-硫辛酸可增强GUS瞬时表达率和芽诱导的再生率,且以25mg?L-1效果最佳。
水仙胚性愈伤的获得及农杆菌介导gus基因的遗传转化  [PDF]
魏开发
南京林业大学学报(自然科学版) , 2009, DOI: 10.3969/j.jssn.1000-2006.2009.04.007
Abstract: 用正交实验设计对前期影响水仙胚性愈伤诱导和分化关联性大的因素进行综合分析,结果显示,培养基类型、激素及处理方式、不同添加物等对水仙外植体胚性愈伤诱导及分化的影响是基于培养基的多因素协同效应。水仙适宜胚性愈伤诱导培养基是:改良mb+naa(0.2mg/l)+6ba(2mg/l)+aba(2mg/l)+agno3(5mg/l);适宜的分化培养基是:改良n6+2,4d(0.5mg/l)+6ba(2.5mg/l)+naa(0.2mg/l)+aba(2mg/l)。实验中观察到水仙体细胞胚的发生,在胚性愈伤诱导和分化体系优化基础上实现农杆菌介导gus基因转化,稳定表达抗性愈伤gus染色显示最佳胚性愈伤诱导培养基能促进水仙外植体感受态的形成,有利于外源基因的接受,pcr检测表明实验中获得3株转gus基因阳性植株。
影响农杆菌介导大豆子叶节遗传转化因素的研究  [PDF]
王凤敏,李涛,王运杰,荆慧贤,史晓蕾,张孟臣,邸锐,蒋春志
大豆科学 , 2011, DOI: 10.11861/j.issn.1000-9841.2011.04.0557
Abstract: 利用GUS基因的稳定性和特异性及在植物体中瞬时表达的特点,对农杆菌介导大豆子叶节遗传转化过程中的一些影响因素(激素浓度、筛选剂浓度、基因型和农杆菌菌株)进行研究。结果表明:芽诱导阶段6-BA浓度为1.6mg?L-1时诱导效率较高;适宜的草铵膦筛选浓度为3mg?L-1;同时对24个大豆基因型的再生能力和对农杆菌菌株EHA101、LBA4404和EHA105的敏感性进行比较,再生能力最强的基因型为吉林小豆和Maverick,侵染能力最强的农杆菌菌株为EHA101,GUS阳性率为0~41.03%,其次是EHA105,LBA4404侵染效果最差;就受体基因型而言,吉林小豆和Maverick的GUS阳性率最高。EHA101侵染时,吉林小豆和Maverick的阳性率分别达40.25%和29.89%;EHA105侵染时,吉林小豆和Maverick的阳性率分别达33.35%和27.52%,而冀豆15、冀豆17和nf58的阳性率分别为12.47%、10.67%和9.11%。
农杆菌介导法将bt杀虫蛋白基因导入玉米自交系的研究  [PDF]
姚丹,王丕武,刘占柱,郝文媛,林春晶,关淑艳
吉林农业大学学报 , 2004,
Abstract: ?利用β-葡萄糖苷酸酶(gus)基因的瞬时表达和稳定表达对农杆菌转化玉米愈伤组织的条件进行优化,通过用带有bt抗虫基因和bar抗除草剂基因的根癌农杆菌lba4404(act)转化玉米自交系7922、h99和p2的胚性愈伤组织,获得了抗性愈伤组织,并分化出植株。pcr检测初步证明bt杀虫蛋白基因已整合到玉米再生植株中。
农杆菌介导粳稻高效转化体系的研究  [PDF]
裴忠有,孙守钧,李玲,李明
华北农学报 , 2005, DOI: 10.3321/j.issn:1000-7091.2005.03.003
Abstract: 以5个粳稻品种为材料,研究农杆菌介导转化中影响粳稻转化的几个重要因素。通过研究发现,根癌农杆菌菌株EHA105的转化率明显高于LBA4404,根癌农杆菌菌株EHA105介导的水稻转化率为25.3%,而LBA4404为7.6%;不同外植体的诱导率、转化率和分化率存在明显差异,以幼胚为外植体材料,它的出愈率和转化率明显比成熟胚高,而分化率则明显低于成熟胚;不同水稻品种在转化率与分化率上差异也很明显,反映了不同基因型水稻品种的差异,同时研究发现同一品种不同批次在转化率和再生频率上差异比较显著,反映了在水稻转化过程中还存在一些未知条件对于转化的影响;通过对抗性愈伤和转化植株的叶片、根的GUS染色,证明GUS基因在不同组织中表达;并且通过PCR和Southern杂交分子分析,发现所检测的植株均为转基因植株,足以证明这个高效转化体系的可靠性。
农杆菌介导玉米胚性愈伤的遗传转化研究  [PDF]
杨爱国,刘爽,赵琦,赵玉锦,张世煌,潘光堂
生物技术通报 , 2008,
Abstract: 利用3种不同类型的农杆菌菌株C58、LBA4404和EHA105携带外源GUS基因分别侵染玉米自交系齐319和18(红)胚性愈伤。结果显示,不同的菌株和自交系间的搭配,其遗传转化效率差异很大,GUS瞬时表达率呈极显着差异(F=24.92**),抗性愈伤率也呈极显着差异(F=19.43**)。其中,EHA105-齐319组合遗传转化效率最高,其GUS瞬时表达率平均为55.5%,最高可达71.1%;其抗性愈伤率平均为14.4%,最高可达20%;对22株转基因T0代抗性植株进行PCR检测,其中PCR呈阳性植株有11株,阳性率为50%。进一步对此22株T0代抗性植株进行叶片组织化学染色分析,结果显示,PCR呈阳性的植株中均有GUS基因表达。从而证明,外源GUS基因在转基因玉米T0代植株中得到稳定表达,而且验证了PCR检测结果和GUS表达分析结果的一致性。
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