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猪乳铁蛋白在4种重组乳杆菌中的表达及抑菌活性比较  [PDF]
于慧?,姜艳平?,崔文?,武啸?,何佳?,乔薪瑗?,李一经?,唐丽杰?
生物工程学报 , 2014, DOI: 10.13345/j.cjb.130616
Abstract: 为了获得优化的猪乳铁蛋白乳杆菌表达系统,并比较重组猪乳铁蛋白的抑菌活性,根据乳杆菌使用密码子的偏嗜性优化合成猪乳铁蛋白成熟肽编码序列,将其克隆到乳杆菌表达载体ppg612.1的xhoⅰ/bamhⅰ位点,获得了plf乳杆菌表达载体质粒ppg612.1-plf。将获得的重组质粒分别电转化入干酪乳杆菌atcc393、戊糖乳杆菌klds1.0413、植物乳杆菌klds1.0344和副干酪乳杆菌klds1.0652细胞内,获得4种表达猪乳铁蛋白的重组乳杆菌。经木糖诱导,通过westernblotting和激光共聚焦检测重组猪乳铁蛋白的表达,用elisa方法检测和比较4种重组菌上清中表达猪乳铁蛋白的量,并用琼脂孔穴扩散抑菌法检测4种重组乳杆菌表达乳铁蛋白的抑菌活性。结果表明,乳铁蛋白在4种重组乳杆菌中均得到正确表达,其产物分子量约73kda,重组干酪乳杆菌、重组戊糖乳杆菌、重组植物乳杆菌和重组副干酪乳杆菌的重组猪乳铁蛋白表达量分别为9.6μg/ml、10.8μg/ml、12.5μg/ml、9.9μg/ml。重组猪乳铁蛋白对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、巴氏杆菌和李氏杆菌均有一定的抑菌作用,对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强,且4种重组乳杆菌中重组植物乳杆菌表达产物的抑菌效果优于其他重组菌的表达产物。结果表明在4种乳杆菌中重组猪乳铁蛋白的最佳表达系统为植物乳杆菌,该结果为猪乳铁蛋白的乳杆菌表达系统进一步开发与应用奠定了基础。
海藻糖对保加利亚乳杆菌保护应用的研究  [PDF]
葛宇,赖承兴,张文艳,陈少芸,袁勤生
食品科学 , 2002,
Abstract: ?本文考察了不同工艺过程包括冷藏、冷冻、真空干燥、冷冻干燥以及喷雾干燥和室温下保存过程中不同保护剂对保加利亚乳杆菌存活性和产酸率的影响。结果发现,海藻糖具有最好的抗冷冻、抗脱水效果。浓度试验表明,海藻糖的最适添加量为5%~10%(w/v)。
关中黑猪和八眉猪泌乳性能的研究  [PDF]
柳万生?,路兴中?,刘孝惇?
西北农林科技大学学报(自然科学版) , 1990,
Abstract: 在相同条件下,对关中黑猪和八眉猪经产母猪的泌乳性能作了研究。结果表明:关中黑猪经产母猪60d泌乳量315.178kg,日泌乳量5.25kg,显著高于八眉猪的239.227和3.94kg;两品种猪平均日放乳次数为25.75和23.58次,放乳持续时间12.16和11.42s,放乳后的拱奶时间2.13和2.31min,放乳间隔53.67和58.36min,泌乳行为与导乳量密切相关;仔猪生后20d每公斤增重需要母乳,两品种分别为5.56和5.31kg,生后30d为5.54和5.32kg。
猪胆汁糖漿(百咳灵糖漿)  [PDF]
霍書智
中国中药杂志 , 1959,
Abstract: <正>本品我部使用近三个月,效果滿意,曾有三例患兒用鏈霉素治疗一週無效,改用百咳灵糖漿五日即愈。我部兒科已大量用于治疗百日咳,茲將处方和配制法介紹如下:
猪α1岩藻糖转移酶基因点突变的PCR-SSCP检测  [PDF]
吴圣龙 , 鞠慧萍 , 包文斌 , 陈国宏 , 朱国强 , 黄雪根 , 华金弟 , 李碧春 , 原志伟
扬州大学学报(农业与生命科学版) , 2006,
Abstract: ????猪α1-岩藻糖转移酶基因(FUT1)位于猪第6号染色体上,是猪肠毒素大肠杆菌F18受体(ETECF18R)理想的候选基因。采用PCR-SSCP法共检测外来猪种、国内地方猪种和培育猪种3个类型9个猪种共计255个个体FUT1基因M857位点的多态性,所检测的3个外来猪种均存在GG和AG两种基因型,而国内地方猪种中除临高猪外均表现为极端的单态分布,只存在GG基因型。采用PCR-SSCP方法对FUT1基因点突变进行检测,具有试验成本低、操作简便和灵敏度高等优点,可望在育种实践中得到更广泛的应用。
重组猪乳铁蛋白n端的高效表达及抑菌活性检测  [PDF]
哈卓?,赵丽丽?,于晓旭?,宗晓淋?,毛雅元?,张健?,李一经?,葛俊伟?,乔薪瑗?,唐丽杰?
生物工程学报 , 2010,
Abstract: 为获得表达猪乳铁蛋白基因的重组菌株,并检测其表达的重组猪乳铁蛋白抑菌活性,应用rt-pcr方法从泌乳3d后母猪乳腺组织中扩增了猪乳铁蛋白n端1077bp的plf-n基因片段,与genbank上发表的4株猪乳铁蛋白基因序列相比,核苷酸同源性均达到99%以上。为了得到高表达量的plf-n基因,以扩增的plf-n片段为参考模板,经过密码子优化,全基因合成了编码猪乳铁蛋白n端的基因plf-ns。将其定向插入到原核表达载体pet-30b中,转化大肠杆菌bl21,获得了表达plf-ns的重组菌pet-plf-ns/bl21;经iptg诱导,并对表达条件进行优化,以及通过sds-page和westernblotting分析均表明猪乳铁蛋白得到了正确表达,其产物分子量约为42kda,最优表达条件下蛋白表达量占菌体总蛋白的32%,表达产物以包涵体形式存在。包涵体经裂解、纯化、复性处理后纯度达到98%。用琼脂孔穴扩散抑菌法检测表明重组猪乳铁蛋白具有明显的抑菌作用。表明通过基因优化对表达量低的基因进行改造使之高效表达,是一种提高表达效率的有效手段。
α-硫辛酸对高糖诱导下乳鼠心肌细胞作用  [PDF]
李兆钢,王国贤,刘珊珊,李瑞芳,李飞
中国公共卫生 , 2013, DOI: 10.11847/zgggws2013-29-01-22
Abstract: ?目的探讨α-硫辛酸对高糖诱导的乳鼠心肌细胞肥大保护作用及其机制。方法取出生1~3d乳鼠心尖部心肌细胞原代培养,用低糖培养基培养48h后分为对照组、高糖组(25.5mmol/L)、α-硫辛酸组(高糖+50、100、200、300mg/L)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂组(高糖+PKC抑制剂50nmol/L)、核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂组(高糖+NF-κB抑制剂5mmol/L);细胞培养48h,检测细胞表面积以及蛋白含量,Wesrternblot法检测PKC-α、NF-κB、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、立早基因c-fos蛋白表达。结果与对照组比较,高糖组乳鼠心肌细胞肥大、细胞表面积增大、蛋白含量增多,心肌细胞内PKC-α(0.89±0.03)、NF-κB(0.88±0.14)、c-fos(0.62±0.14)、TNF-α(0.85±0.05)蛋白表达均升高(P<0.05);α-硫辛酸能够减轻乳鼠心肌细胞肥大,使心肌细胞表面积减小、蛋白含量减少(P<0.05),与高糖组比较,α-硫辛酸300mg/L组细胞内PKC-α(0.44±0.07)、NF-κB(0.24±0.03)、TNF-α(0.39±0.05)、c-fos(0.15±0.06)蛋白表达均下降(P<0.05)。结论α-硫辛酸可抑制高糖诱导的乳鼠心肌细胞肥大,其机制可能与抑制PKC/NF-κB/TNF-α/c-fos的信号转导通路有关。
猪细小病毒vp2蛋白在干酪乳杆菌表面的表达  [PDF]
徐义刚?,崔丽春?,马广鹏?,唐丽杰?,葛俊伟?,夏春丽?,乔薪媛?,赵丽丽?,李一经?
生物工程学报 , 2007,
Abstract: 将编码猪细小病毒主要免疫保护性抗原vp2基因插入干酪乳杆菌细胞表面表达载体ppg中,构建了重组表达载体ppg-vp2,将其电转化干酪乳杆菌lactobacilluscasei393,获得了表达猪细小病毒vp2蛋白的重组干酪乳杆菌系统,经2%乳糖在mrs培养基中的诱导表达,sds-page检测表明,有约74kd蛋白得到了表达,表达蛋白的大小与理论值相符。western-blot结果分析表明,表达的蛋白可被鼠源ppv抗血清所识别,间接免疫荧光实验结果表明,所表达的蛋白能够在干酪乳杆菌菌体表面检测到。
利用大豆浓缩蛋白乳清制备水苏糖的发酵条件  [PDF]
张闪闪,汪立平,王锡昌
大豆科学 , 2008, DOI: 10.11861/j.issn.1000-9841.2008.01.0137
Abstract: 利用酵母对大豆浓缩蛋白乳清进行发酵处理制备水苏糖。在确定最佳起始发酵液的糖度为31.8Brix后,对温度、pH、接种量、装液量等工艺条件进行了单因素试验及正交试验,结果表明最佳发酵条件为:温度32℃,pH5.5,接种量8%,在此发酵条件下利用酵母对大豆浓缩蛋白乳清进行发酵处理48h,水苏糖的纯度达到了90%,保留率为68%。
四环素抗性重组鼠李糖乳杆菌的构建  [PDF]
郭铃,孙靓,李检秀,孙菲菲,黄艳燕,黄日波
中国生物工程杂志 , 2011,
Abstract: 将含有鼠李糖乳杆菌同源序列的自杀质粒puc-ldhd-ter转化到鼠李糖乳杆菌jcm1553中,成功获得2株含四环素抗性的重组鼠李糖乳杆菌gl-1和gl-2。采用pcr技术鉴定重组菌株染色体基因组上含有四环素抗性基因ter;生长曲线说明四环素抗性基因的插入对鼠李糖乳杆菌的生长没有较大影响。抗性菌株gl-1和gl-2在含10%葡萄糖的摇瓶发酵培养基发酵结果显示:37℃,200r/min发酵40h,菌体密度od600最大达到25.49和24.66,残糖含量为0.60%和0.63%,l-乳酸最高产量为93.956g/l、93.693g/l,葡萄糖转化率达到94.82%、94.56%,与原始菌株没有显著区别。
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