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Vitrifica o de ovócitos imaturos de bovinos utilizando etilenoglicol associado à trehalose e polivinilpirrolidona  [cached]
Souza M.R.,Costa E.P.,Torres C.A.A.,Guimar?es J.D.
Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia , 2003,
Abstract: Avaliaram-se os efeitos da vitrifica o de ovócitos imaturos de bovinos utilizando o etilenoglicol (EG) associado à trehalose e à polivinilpirrolidona (PVP). Utilizaram-se ovócitos provenientes de ovários de vacas abatidas em matadouro, distribuídos aleatoriamente em três tratamentos (T). TI - ovócitos n o desnudados e n o congelados, TII - ovócitos vitrificados com cumulus oophorus e TIII - ovócitos desnudados vitrificados. A percentagem de ovócitos recuperados e ovócitos com morfologia normal após a vitrifica o foi diferente entre TII e TIII (92,2 e 72,6%; 79,0 e 63,6%, respectivamente). Os ovócitos normais foram cultivados à 38,5oC em atmosfera de 5% de CO2 por 24 horas. Após o cultivo, os ovócitos foram fecundados e os embri es cultivados in vitro por sete dias. Foram encontradas diferen as entre tratamentos quanto às taxas de matura o nuclear, fecunda o e clivagem (83,9, 70,0 e 44,0%; 17,5, 23,7 e 5,1%; 0,0, 0,0 e 0,0% para os tratamentos I, II e III, respectivamente). Apenas no TI foram obtidas mórulas e blastocistos (21,4%). Os procedimentos de vitrifica o, segundo os protocolos utilizados, n o s o indicados para a criopreserva o de ovócitos imaturos de bovinos.
UTILIZA O DE GLICEROL E ETILENOGLICOL COMO CRIOPROTETORES NA CONGELA O DO SêMEN CAPRINO  [cached]
Rodrigo Freitas Bittencourt,Ant?nio de Lisboa Ribeiro,Anselmo Domingos Ferreira Santos,Rogério Furst
Ciência Animal Brasileira , 2006,
Abstract: Dez amostras de sêmen de dois reprodutores caprinos, da ra a Parda-alpina, colhidas em vagina artificial, foram submetidas a quatro tratamentos para avalia o da eficiência do etilenoglicol e do glicerol, associados ou n o ao EDTA, na criopreserva o da célula espermática caprina. O diluente usado era à base de Tris-gema de ovo contendo 7% de glicerol (glicerol E glicerol+EDTA) ou 7% de etilenoglicol (etilenoglicol e etilenoglicol + EDTA), sendo que nos grupos glicerol+EDTA e etilenoglicol+EDTA foi associado ao diluente 0,1% de EDTA. As amostras foram mantidas por 60 minutos em geladeira a 40C, onde ent o era efetuada a congela o em nitrogênio (-1960C). A descongela o foi realizada em banho-maria a 370C por 30segundos. As médias obtidas para motilidade (%) a descongela o, para os grupos glicerol, glicerol+EDTA, etilenoglicol, etilenoglicol+EDTA, foram, respectivamente, 51%; 61%; 10% e 12%. Os grupos que utilizaram o glicerol como crioprotetor obtiveram melhores taxas de motilidade pós-descongela o, principalmente quando foi associado ao diluidor o EDTA (grupo glicerol+EDTA). Porém, esse resultado foi comprometido pelos maiores índices de altera es patológicas nos grupos que continham o glicerol. PALAVRAS-CHAVE: Caprinos, criopreserva o, sêmen, glicerol, etilenoglicol, EDTA
Viabilidade e fertiliza o in vitro de oócitos bovinos após vitrifica o  [cached]
Galbinski Sérgio,Bos-Mikich Adriana,Ferrari Arnaldo Nicola
Revista Brasileira de Ginecologia e Obstetrícia , 2003,
Abstract: OBJETIVOS: avaliar a técnica de criopreserva o por vitrifica o em DMSO 6 M para oócitos bovinos maturados in vitro e os efeitos do tempo de exposi o às solu es de vitrifica o (SV). MéTODOS: estudo experimental tipo coorte. Ovários de bovinos foram obtidos em frigorífico e transportados ao laboratório. Os oócitos foram aspirados. A partir da SV contendo DMSO 6 M (SV 100%), foram preparadas solu es a 25 e 65%. Oócitos foram maturados in vitro por 18-22 horas. Para vitrifica o, os oócitos foram colocados em SV 25%, por 5 minutos, transferidos à SV 65%, pipetados em SV 100% para palhetas e estocados em nitrogênio líquido. No primeiro grupo experimental, a exposi o à SV 65% tomou até 60 segundos e no segundo grupo n o ultrapassou 30 segundos. Para descongelamento, as palhetas foram expostas ao ar por 10 segundos, colocadas em banho-maria por 10 segundos e seu conteúdo expelido e mantido em solu o de sacarose por 5 minutos. No terceiro grupo, os oócitos passaram por todas SV menos pelo nitrogênio líquido. Os oócitos recuperados foram inseminados. Para controle, oócitos frescos, maturados in vitro, foram inseminados. RESULTADOS: após vitrifica o, foram recuperados 69,1 e 59,8% dos oócitos nos grupos de 30 segundos e 60 segundos, respectivamente, e 24 horas após insemina o pareceram morfologicamente normais 93 e 89,1% deles, respectivamente. No grupo de oócitos expostos às SV sem vitrifica o, foram recuperados 75,6%, sendo 84,6% destes viáveis 24 horas após insemina o. N o ocorreu fertiliza o nos grupos experimentais. Entre os controles frescos, foram fertilizados 65,4% dos oócitos. CONCLUS ES: a técnica de vitrifica o utilizando DMSO 6 M n o é aplicável para criopreserva o de oócitos bovinos maturados in vitro. A redu o do tempo de exposi o às SV n o superou o efeito deletério sobre a capacidade fertilizadora dos oócitos. Aprimoramentos da técnica s o necessários para prote o da zona pelúcida e do oolema.
UTILIZA O DO TESTE HIPOSMóTICO PARA AVALIAR A EFICáCIA DE DIFERENTES PROTOCOLOS DE CRIOPRESERVA O DO SêMEN CAPRINO  [cached]
Rodrigo Freitas Bittencourt,Ant?nio de Lisboa Ribeiro Filho,Anselmo Domingos Ferreira Santos,Marcos Chalhoub
Ciência Animal Brasileira , 2006,
Abstract: Este estudo teve por objetivo comparar a eficácia de quatro protocolos de congela o do sêmen caprino (glicerol, glicerol+EDTA; etilenoglicol; etilenoglicol+EDTA), através da utiliza o do teste hiposmótico (HOST). O sêmen foi colhido de dois machos da ra a Alpina, sexualmente maduros, diluído nos diferentes meios, congelado e armazenado em nitrogênio líquido. Após a colheita, 20ìL do sêmen fresco foram incubados com 01mL de solu o hiposmótica (combina o de citrato de sódio e frutose em água destilada com osmolaridade de 125mOsmol), em banho-maria a 370C por 30 minutos. Este procedimento foi repetido após a descongela o e, em seguida, uma amostra foi colocada sobre lamina/lamínula e avaliada em contraste de fase com mil vezes de aumento. Um total de 100 células foi contado, e as médias percentuais de espermatozóides com edema ou dobramento de cauda, após o HOST, foram – para o sêmen fresco, glicerol, glicerol+EDTA; etilenoglicol; etilenoglicol+EDTA –, respectivamente, 53,89; 16,90; 10,25; 52,64 e 57,54. PALAVRAS-CHAVE: Caprinos, criopreserva o, sêmen, teste hiposmótico
Influência da vitrifica o na incidência de ovócitos bovinos aneuplóides maturados in vitro.
H. S. Luna,I. Ferrari,R. Rumpf
Revista Brasileira de Saúde e Produ??o Animal , 2006,
Abstract: O presente estudo objetivou verificar a incidência de aneuploidias em ovócitos bovinos vitrificados em diferentes períodos de matura o. Os ovócitos foram obtidos de ovários de abatedouro e divididos em cinco grupos: controle (ovócitos n o vitrificados); grupos 0-h (vitrificados antes do come o da matura o); e grupos 8, 12 e 22-h (vitrificados respectivamente 8, 12 e 22 h após o come o da matura o). Os ovócitos permaneceram vitrificados por 24 h e ent o foram descongelados e completaram 24 horas de matura o. Em seguida os ovócitos foram desnudados, fixados em lamina e corados com orceína-acética. Nenhuma diferen a foi encontrado (P > 0,05) entre o grupo controle (6,2%, 1/16 ) e grupos 0, (22,0, 2/9) 8 h (22,0, 2/9), 12 (25,0%, 3/12), 22 h (23,5%, 4/17). Os resultados sugerem que a vitrifica o em diferentes períodos de matura o n o influencia na taxa de aneuploidia.
Vitrifica??o de ovócitos desnudados ou n?o e previamente maturados in vitro
Fagundes, Letícia Martins;Costa, Eduardo Paulino da;Torres, Ciro Alexandre Alves;Amaral Filha, Wald'ma Sobrinho;Silva, Trícia Osório da;Gioso, Marilú Martins;
Revista Brasileira de Zootecnia , 2004, DOI: 10.1590/S1516-35982004000500004
Abstract: this study aimed at the evaluation of the effects from cryopreservation of bovine oocytes in vitro matured, by using ethylene glycol (eg) associated to trehalose and polyvinylpyrrolidone (pvp), of ovary oocytes of slaughtered cows, randomly assigned to three treatments. treatment 0 (t0 - control): oocytes that were desnuded and not vitrified. treatment 1 (t1): cryopreservation of in vitro matured oocytes with cumulus oophorus. tratamento 2 (t2): cryopreservation of in vitro matured desnuded oocytes. the percentage of recovered oocytes after cryopreservation and with normal morphology was different for vitrified oocytes (94.7 and 76.8%; 69.5 and 48.85% for t1 and t2, respectively). the main changes ultrastructural in vitrificated oocytes were prematurely released of cortical granules. later, all normal oocytes were fecundated and cultivated at 38.5oc in atmosphere with 5% co2 for seven days. the fecundation and cleavage rates for treatments were different (56.2, 41.7 and 12.5%; 36.3, 0.0 and 0.0%, for t0, t1 and t2, respectively). morulas and blastocysts were obtained only in t0 (34.5%). these results indicate that, the used protocols, for vitrification procedure is not indicated for cryopreservation of matured bovine oocytes.
Vitrifica??o de ovócitos imaturos de bovinos utilizando etilenoglicol associado à trehalose e polivinilpirrolidona
Souza, M.R.;Costa, E.P.;Torres, C.A.A.;Guimar?es, J.D.;Fagundes, L.M.;
Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia , 2003, DOI: 10.1590/S0102-09352003000500011
Abstract: this study aimed to evaluate the effects of vitrification procedure of immature bovine oocytes using ethylene glycol (eg) associated with trehalose and polivinylpyrrolidone on the percentage of recovered oocytes with normal morphology and nuclear maturation, fecundation and cleavage rates for in vitro cultivated embryos. ovary oocytes of slaughtered cows were randomly allotted to three treatments (t): ti - oocytes neither undenuded nor vitrified, tii - vitrified oocytes with cumulus oophorus, tiii - undenuded vitrified oocytes. the percentage of recovered oocytes and oocytes with normal morphology after vitrification was different for tii and tiii (92.2 and 72.6%, 79.0 and 63.3% for tii and tiii, respectively). all normal oocytes were cultivated at 38.5oc in atmosphere with 5% co2 for 24 hours. after culture, the oocytes were fecundated and the embryos were cultivated in vitro for seven days. the nuclear maturation, fecundation and cleavage rates for ti, tii and tiii were different (83.9, 70.0 and 44.0%, 17.5, 23.7 and 5.1%, 0.0, 0.0 and 0.0% for ti, tii and tiii, respectively). morulas and blastocysts were obtained only for ti (21.4%). these results indicate that the protocol used for vitrification procedure is not recommended for cryopreservation of immature bovine oocytes.
Efeito do glicerol, etilenoglicol, acetamida e leite desnatado na criopreserva??o de espermatozóides eqüinos
Juliani, G.C.;Henry, M.;
Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia , 2008, DOI: 10.1590/S0102-09352008000500010
Abstract: the efficacy of different combinations of cryoprotectants for equine semen was evaluated. three ejaculates of eight stallions were used to test the lactose-edta-egg yolk extender with the following association of cryoprotectants: t1 - glycerol 5% (control group); t2 - methyl cellulose 0.5%, raffinose 0.15g, and acetamide 2.5%; t3 - methyl cellulose 0.5%, raffinose 0.15g, and acetamide 3.5%; t4 - methyl cellulose 0.5%, raffinose 0.15g, and acetamide 5%; t5 - glycerol 5% and 2.4g of dried skim milk; t6 - glycerol 1%, ethylene glycol 4%, and 2.4g of dried skim milk; t7 - ethylene glycol 5% and 2.4g of dried skim milk. after collection, kenney extender was added to the semen 1:1, and centrifuged at 400 x g for 12 minutes. sperm pellets were diluted to reach 100x106 cells/ml. spermatozoa were frozen in 0.5ml straws 3cm above the nitrogen level, during 10 minutes. thawing of samples was done at 75°c for seven seconds followed by immersion of the straw in a water bath at 37°c for 30 seconds. post-thaw total and progressive motilities and sperm vigor were evaluated. sperm membrane integrities of the tail and caput, respectively, were evaluated by the hypoosmotic swelling test and fluorescent dyes. t1 showed the highest post-thaw total and progressive motilities (38.4% and 33.8%, respectively). no significant difference was found among treatments for vigor and hypoosmotic swelling test. t5, t6, and t7 showed higher post-thaw values for sperm membrane integrity. it may be concluded that the association of cryoprotectants used in this experiment did not result in better cryoprotectant effect than 5% glycerol for equine semen cryopreservation.
Criopreserva??o de embri?es de suínos adicionando trealose aos crioprotetores etilenoglicol ou glicerol
Nicola, Edmir da Silva;Deschamps, Jo?o Carlos;Macedo Júnior, Milton;Bozato Sobrinho, José;
Ciência Rural , 1999, DOI: 10.1590/S0103-84781999000100020
Abstract: the objectives of this study were to compare (a) the effects of trehalose incorporated to ethylene glycol and (b) the effect of ethylene glycol and glycerol associated to trehalose on the viability of frozen swine embryos. treatment 1 consisted in 1.5 m ethylene glycol, treatment 2 in 1.5 m ethylene glycol plus 0.25 m trehalose and treatment 3 glycerol 1.5 m with 0.25 m trehalose. the embryos were frozen at expanded blastocyst stage. the rapid freezing method was used, with a cooling rate of 1°c/minute from the room temperature (± 25°c) to seeding (-7°c), and of 0.3°c/minute to -35°c, when the straws were plunged into liquid nitrogen (-196°c). thawing was carried out in air during 30 seconds and in a water bath at 37°c during 30 seconds. cryoprotectors were removed by the step-wise method. embryo viability was observed microscopicaly imediately after thawing and when they reexpanded after being cultured for 18-24h in medium 199 with 20% bovine foetal serum in 60 ml drops covered with mineral oil and incubated at 37°c in air with 6% co2. the viability was 17.2%, 37.5% and 42.8% immediately after thawing, and 6.9%, 28.1% e 28.5% after a culture period of 18-24h, for treatments 1, 2 and 3, respectively. the results showed no differences (p>0.05) in viability among treatments when observation was made immediately after thawing. after culturing, viability rate was higher (p<0.05) in ethylene glycol with 0.25 m trehalose than in ethylene glycol only. ethylene glycol and glycerol associated to trehalose showed no differences to cryoprotect swine embryos.
“One Step and Two Steps” freezing methods of dog’s semen in coconut water and ethylene glycol extender Métodos de congelamento "One Step" e "Two Steps" do sêmen de c es, diluído em solu o de água de coco e etilenoglicol  [cached]
Débora Silva Godim,Ana Cristina Nery de Castro,Marceline Vidal,Marco Antonio da Rocha Ferreira
Revista Brasileira de Saúde e Produ??o Animal , 2009,
Abstract: The objective of this study was to verify the influence of One Step and Two Steps freezing methods on dog’s spermatic viability. The experiment was performed using 20 ejaculates from 11 previously selected dogs which presented progressive motility over 70% and vigor equal or superior to 3. The samples were frozen in medium composed by coconut water and ethylene glycol as crioprotectant by the methods, One and Two Steps. After thawing, progressive motility, vigor, live spermatozoa percentage and plasmatic membrane integrity were evaluated. The results showed that there was no difference (P>0.05) in evaluated seminal characteristics. For progressive motility, the results (mean ± standard deviation) were respectively for One and Two Steps, 47.3% ± 16.6% and 50.5% ±1 7.4%. As well as, the results for vigor, live spermatozoa percentage, plasmatic membrane integrity were 2.64 ± 0.67 and 2.9 ± 0.74; 52.2% ± 24.16 and 52.2% ± 24.48%; 15.27% ± 10.19% and 23.3% ± 11.6% for One and Two Steps methods, respectively. In conclusion, the One Step and Two Steps techniques can be used as semen cryopreservation methods in dog’s assisted reproduction and there is no difference between the evaluated characteristics of frozen-thawed semen using one or other technique. Objetivou-se, com este estudo, verificar a influência dos métodos de congelamento, One Step e Two Steps, na viabilidade espermática em c es. Foram utilizados 20 ejaculados de 11 c es, previamente selecionados, que apresentaram motilidade progressiva acima de 70% e vigor igual ou superior a três. As amostras foram congeladas em meio composto de água de coco e etilenoglicol, pelos métodos de One e Two Steps, e avaliadas após descongelamento, quanto à motilidade progressiva, vigor, porcentagem de espermatozóides vivos e integridade de membrana plasmática. Após o processo de dilui o e congelamento One Step e Two Steps, verificou-se que n o houve diferen a (P>0,05) nas características seminais, cujos resultados (média ± desvio padr o) foram, respectivamente, de 47,3% + 16,6% e 50,5% + 17,4% para motilidade progressiva; 2,64 + 0,67 e 2,9 + 0,74 para o vigor; 52,2% + 24,16% e 52,2%+24,48% para porcentagem de espermatozóides vivos e de 15,27% + 10,19% e 23,3% + 11,6% para a integridade de membrana plasmática. A ausência de diferen as entre as características avaliadas para o sêmen congelado, permite inferir que as técnicas One Step e Two Steps podem ser utilizadas para a criopreserva o do sêmen de c es.
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