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Isolamento e eficiência de plaqueamento de protoplastos de citros
COSTA MARIA ANGéLICA PEREIRA DE CARVALHO,MOUR?O FILHO FRANCISCO DE ASSIS ALVES,MENDES BEATRIZ MADALENA JANUZZI
Revista Brasileira de Fruticultura , 2002,
Abstract: As recentes ferramentas biotecnológicas para o melhoramento in vitro de citros incluem a hibrida o somática por fus o de protoplastos. A otimiza o dos protocolos de isolamento, plaqueamento e cultura de protoplastos, fundamental para maior eficiência na produ o de híbridos somáticos, foi avaliada em 11 variedades cítricas. As solu es enzimáticas testadas foram: 1. celulase Onozuka RS, 1%; macerase R-10, 1%, pectoliase Y-23, 0,2%; 2. celulase Onozuka R-10, 0,2 %; macerase R-10, 0,3%; driselase, 0,1%; 3. celulase Onozuka R-10, 1%; macerase R-10, 0,2%; driselase, 0,1%. O plaqueamento dos protoplastos foi realizado em meio de cultura EME 0,7 M, nas densidades de 2 x 10(4); 5 x 10(4); 10(5); 2 x 10(5) e 3 x 10(5) protoplastos.mL-1, no escuro, a 25 ± 1degreesC. A solu o enzimática 1 possibilitou melhor rendimento no isolamento de protoplastos para a maioria das variedades, exceto para o lim o-'Cravo', onde o melhor rendimento foi obtido na solu o enzimática 3, e para as laranjas-doces 'Valência' e 'Succari', que apresentaram maiores rendimentos na solu o enzimática 2. A eficiência final de plaqueamento, avaliada aos 90 dias de cultivo, foi superior nas densidades de 10(5) e 2 x 10(5) protoplastos.mL-1, para todas as variedades. O desenvolvimento de embri es somáticos foi observado em todas as variedades, exceto para tangor 'Murcote'.
Calogênese, embriogênese somática e isolamento de protoplastos em variedades de laranja doce  [cached]
Benedito Vagner Augusto,Mour?o Filho Francisco de Assis Alves,Mendes Beatriz Madalena Januzzi
Scientia Agricola , 2000,
Abstract: Com o objetivo de produzir calos embriogênicos de citros, óvulos abortados de frutos maduros de 6 variedades de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck), ?Bahia Cabula?, ?Baianinha?, ?Hamlin?, ?Orvalho de Mel?, ?Rubi? e ?Valência? foram introduzidos em meio de cultivo MT modificado com adi o de extrato de malte, com e sem adi o de 5 mg L-1 benziladenina (BA). Os calos obtidos das variedades ?Bahia Cabula?, ?Orvalho de Mel?, ?Rubi? e ?Valência? foram cultivados em meio basal MT, contendo os carboidratos maltose, galactose, lactose, glicose ou sacarose nas concentra es de 18; 37; 75; 110 e 150 mM para a indu o da embriogênese somática. Os calos destas mesmas variedades foram submetidos ao isolamento de protoplastos, com o uso de 3 solu es enzimáticas. Os resultados revelaram que há influência do genótipo sobre a calogênese. A embriogênese somática foi estimulada na presen a de galactose, para a maioria das variedades. A solu o enzimática composta de 1% de celulase, 1% de macerase e 0,2% de pectoliase foi a mais adequada para o isolamento de protoplastos a partir de calos das variedades de laranja doce estudadas.
Calogênese, embriogênese somática e isolamento de protoplastos em variedades de laranja doce
Benedito, Vagner Augusto;Mour?o Filho, Francisco de Assis Alves;Mendes, Beatriz Madalena Januzzi;
Scientia Agricola , 2000, DOI: 10.1590/S0103-90162000000100007
Abstract: intending to produce embryogenic citrus calli (citrus sinensis l. osbeck), aborted ovules of ripe fruits from six sweet orange varieties (?bahia cabula?, ?baianinha?, ?hamlin?, ?orvalho de mel?, ?rubi? and ?valencia?) were introduced onto modified mt medium with and without benzyladenine (ba). calli obtained from ?bahia cabula?, ?orvalho de mel?, ?rubi? and ?valencia? varieties were grown on mt basal medium modified with the carbohydrates maltose, galactose, lactose, glucose and sucrose at 18; 37; 75; 110 and 150 mm. the effect on somatic embryogenesis was studied. calli from the same genotypes were submitted to protoplast isolation, using three different enzymatic solutions. results revealed the genotype effect in the callus induction. somatic embryogenesis was stimulated in the presence of galactose, for most varieties. enzymatic solution composed of 1% cellulase, 1% macerase and 0,2% pectolyase was the best for protoplast isolation from calli of all genotypes tested.
Isolamento e eficiência de plaqueamento de protoplastos de citros
COSTA, MARIA ANGéLICA PEREIRA DE CARVALHO;MOUR?O FILHO, FRANCISCO DE ASSIS ALVES;MENDES, BEATRIZ MADALENA JANUZZI;
Revista Brasileira de Fruticultura , 2002, DOI: 10.1590/S0100-29452002000200038
Abstract: recent biotechnological tools for citrus improvement include somatic hybridization by protoplast fusion. the optimization of protoplast isolation, platting and culture, essential for hybrid regeneration, was evaluated in 11 citrus varieties. the enzymatic solutions tested were: 1. cellulase onozuka rs, 1%; macerozyme r-10, 1%, pectoliase y-23, 0.2%; 2. celullase onozuka r-10, 0.2 %; macerozyme r-10, 0.3%; driselase, 0.1%; 3. celulase onozuka r-10, 1%; macerase r-10, 0.2%; driselase, 0.1%. protoplasts were cultured in eme 0.7 m at densities of 2 x 104; 5 x 104; 105; 2 x 105 e 3 x 105 protoplasts.ml-1, in darkness, at 25 ± 1°c. the enzymatic solution 1 resulted in better protoplast isolation for most of the varieties studied, except for rangpur lime, which presented higher isolation efficiency on enzymatic solution 3, and for 'valencia' and 'succari' sweet oranges, with better results were obtained on enzymatic solution 3. final platting efficiency, evaluated 90 days after culture, was higher at the densities of 105 e 2 x 105 protoplasts.ml-1, for all varieties. somatic embryogenesis was observed for all varieties, except for 'murcott' tangor.
Compara o de Meios de Enriquecimento e de Plaqueamento Utilizados na Pesquisa de Salmonella em Carca as de Frango e Fezes de Aves
Nascimento MS,Berchieri Jr A,Barbosa MD,Zancan FT
Revista Brasileira de Ciência Avícola , 2000,
Abstract: Este trabalho foi desenvolvido para avaliar, comparativamente, os caldos de enriquecimento Rapapport-novobiocina (RVN), selenito-cistinanovobiocina (SCN) e tetrationato-novobiocina (TN) e os meios para plaqueamento ágar Hektoen (HE), ágar MacConkey (MC), ágar Salmonella-Shigella (SS), ágar verde brilhante (VB) e ágar xilose lisina desoxicolato (XLD), utilizados no isolamento de Salmonella em carca as de frango e fezes de aves. O procedimento bacteriológico consistiu das etapas de pré-enriquecimento, enriquecimento em caldos seletivos, plaqueamento, testes bioquímicos presuntivos e confirma o sorológica com soros polivalentes anti antígenos somáticos e flagelares de Salmonella.. As fezes foram experimentalmente contaminadas com 8 sorotipos de Salmonella (Agona, Anatum, Enteritidis, Havana, Infantis, Owakam, Schwazengrund e Typhimurium) e a concentra o final foi aproximadamente de 1,2 x 102 ufc/g. As fezes foram inoculadas nos caldos enriquecedores e a partir daí, seguiu-se o mesmo procedimento utilizado para as carca as. Os resultados referentes às carca as de frango n o foram estatisticamente diferentes (p>0,01) para os caldos e as placas. Todavia, verificou-se superioridade numérica em rela o aos caldos SCN e TN sobre o caldo RVN, e em rela o ao ágar XLD sobre os demais. Verificou-se também que com o emprego de dois caldos de enriquecimento e de dois meios para plaqueamento pode-se obter maior positividade. Quanto ao exame das fezes, o caldo TN mostrou-se superior aos demais (p>0,01), n o havendo diferen a (p>0,01) de resultados para os meios de plaqueamento. Os resultados sugerem que a utiliza o de mais de um meio de enriquecimento e de plaqueamento poderia aumentar as chances de isolamento de Salmonella.
Isolamento e regenera??o de protoplastos de Magnaporthe grisea
Marchi, Carlos Eduardo;Brommonschenkel, Sérgio Hermínio;Queiroz, Marisa Vieira de;Mizubuti, Eduardo Seiti Gomide;
Summa Phytopathologica , 2006, DOI: 10.1590/S0100-54052006000300004
Abstract: protoplasts are important biological tools in filamentous fungi research. fungal protoplasts have been extensively used in experiments with genetic transformation. protoplastization of magnaporthe grisea was accomplished with novozym 234, however, this enzymatic complex is no commercially available for purchase. thus, the efficiency of several other commercial enzymes in m. grisea protoplasts preparation was investigated. at the same time, osmotic buffer, digestion time and regeneration rate were also analyzed. the highest protoplasts production was obtained with lysing enzymes plus cellulase onozuka r-10. the use of 10 or 15 mg of each enzymatic complex in 3 ml of osmotic buffer was most effective for the protoplasts yields. the best osmotic buffer was mgso4 1.2 m / nah2po4 0.01 m, ph 5.8, followed by mgso4 0.8 m / nah2po4 0.01 m, ph 5.8. the m. grisea protoplasts yield, evaluated at each 60 min, increased with 3 to 6 hours of incubation. however, the highest regeneration frequency (19.4%) was recorded for protoplasts obtained with 3 hours of enzymatic hydrolyse.
Composi o de voláteis e perfil de aroma e sabor de méis de eucalipto e laranja  [cached]
Bastos Deborah Helena Markowicz,Franco Maria Regina Bueno,Silva Maria Aparecida Azevedo Pereira da,Janzantti Natália Soares
Ciência e Tecnologia de Alimentos , 2002,
Abstract: Neste trabalho foram analisados os compostos voláteis de amostras de mel de eucalipto e laranja colhidos nos estados de S o Paulo e de Minas Gerais. O isolamento dos voláteis foi realizado empregando-se uma técnica de ''headspace'' dinamico, a separa o efetuada por cromatografia gasosa de alta resolu o e a identifica o por espectrometria de massas, índices de Kovats e padr es, quando disponíveis. Foram identificados no mel de laranja o benzaldeído, o óxido cis de linalol, n-heptanal, 6-metil-5-hepten-2-ona, octanal e fenilacetaldeído, e em mel de eucalipto, o nonanal, 2-heptanona, 2-heptanol, octanol e nonanol. A caracteriza o sensorial desses méis foi obtida por Análise Descritiva Quantitativa e a aplica o de Análise dos Componentes Principais aos dados revelou que os descritores ''queimado'' e ''sabor residual'' caracterizam o mel de eucalipto, enquanto ''floral'' e ''cera'' caracterizam o mel de laranja. Entre os compostos identificados, o nonanal e o nonanol apresentaram contribui o sensorial importante ao mel de eucalipto, enquanto o fenilacetaldeído e o benzaldeído foram relacionados com os principais descritores do mel de laranja.
Determina??o da viabilidade de protoplastos irradiados de laranja 'pêra'
Cristofani, Mariangela;Mendes, Beatriz Januzzi;Tulmann Neto, Augusto;Ando, Akihiko;
Bragantia , 1993, DOI: 10.1590/S0006-87051993000200001
Abstract: the viability of 'pera' orange (citrus sinensis osbeck) protoplasts, submitted to different dosages of gamma radiation, was studied to determine the lethal dose (dl) 50. the analysis by fluorescence was employed using fluorescein diacetate (fda). the dilutions of fda (1:50; 1:100 and 1:150) did not show any statistical difference: then it was possible to use the 1:150 dilution in order to determine the protoplasts viability. the viability was inversaly proportional to gamma radiation and the dl 50 was about 41 gy. the non-irradiated protoplasts had their viability up to 84% when tested as soon after their isolation.
Isolamento e cultivo de protoplastos de porta-enxertos de citros
Oliveira, R.P. de;Mendes, B.M.J.;d' Utra Vaz, F.B.;Tulmann Neto, A.;
Scientia Agricola , 1995, DOI: 10.1590/S0103-90161995000200007
Abstract: protoplast isolation and growth of citrus rootstock v. cravo lime and cleópatra mandarin were carried out enzyme mixture was used to digest cell suspensions 7-10 times, following criterious purification. protoplast culture was carried out in doplets of semi-solid (agarose 0.6% p/v) km8p medium, in the dark, at 28 ± 1°c following density adjustment to 2 x 105 ppts/ml. osmotic pressure reduction was acomplished for each growth every 10 days with a mixture in equal volumes of km8p and km8 medium in ratios of 2:1; 1:1; 1:2 e 0:3. isolation produced 0.7 x 106 ppts/ml for cleópatra mandarin and 0.5 x 106 ppts/ml for cravo lime, with a viability between 86 to 92% and 73 to 80%, respectively. first cell divisions were recorded at the 8th. day of growth, with an inicial platting efficiency of 9% for cleópatra mandarin and 5% for cravo lime. callus development was achived in 50 days upon transfer of microcalus to semi-solid mt medium.
Isolamento de enterobactérias em Alphitobius diaperinus e na cama de aviários no oeste do estado do Paraná, Brasil  [cached]
Chernaki-Leffer AM,Biesdorf SM,Almeida LM,Leffer EVB
Revista Brasileira de Ciência Avícola , 2002,
Abstract: O objetivo deste trabalho foi realizar o isolamento de bactérias da família Enterobacteriaceae em adultos de A. diaperinus, buscando uma correla o entre as bactérias presentes no inseto e na cama, em aviários para produ o de frangos de corte no oeste do Paraná, Brasil. No primeiro experimento, insetos adultos foram coletados em 14 granjas. No segundo experimento, foram coletados insetos e material da cama de 12 diferentes aviários. Os adultos foram anestesiados com éter, macerados em solu o salina e o material da cama colhido por "swab" de arrasto. O enriquecimento n o seletivo foi feito com caldo BHI e o seletivo com Rappaport-Vassiliadis e Tetrationato. Os meios de cultivo para plaqueamento foram o ágar MacConkey, ágar Salmonella-Shigella e ágar verde-brilhante. As enterobactérias isoladas em adultos de A. diaperinus foram: Proteus Vulgaris, P. mirabilis, Escherichia Coli, Enterobacter spp., E. agglomerans, E. gergoviae, E. sakasakii, Citrobacter Diversus e Klebsiella Pneumoniae, enquanto que na cama foram encontrados Proteus Vulgaris, P. mirabilis, Escherichia Coli, Enterobacter Agglomerans. N o foram isoladas Salmonella spp. do inseto nem da cama e P. vulgaris foi a predominante. E. coli foi freqüente nas granjas, tanto na cama como nos insetos e contribuem na dissemina o da colibacilose em aviários.
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