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牛杀菌/通透性增加蛋白对脂多糖介导的炎性细胞因子表达的影响

DOI: 10.13345/j.cjb.140207, PP. 195-205

Keywords: 杀菌/通透性增加蛋白,脂多糖,免疫应答,炎性细胞因子

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杀菌/通透性增加蛋白(bactericidal/permeability-increasingprotein,bpi)能结合并特异地中和来自革兰氏阴性菌外膜的脂多糖(lipopolysaccharide,lps)。为了研究牛源bpi蛋白及其n端结构域在lps介导的免疫应答中的作用,本文将bpi全长1449bp编码区序列(bpi)和其n端714bp的编码区序列(bpi714)分别导入mhek293细胞,分析了稳定表达的bpi或bpi714对lps介导的炎性细胞因子表达的影响。首先将构建的plex-bpi/plex-bpi714载体分别转染mhek293细胞,获得稳定表达牛源bpi或bpi714的mhek293细胞;然后用lps刺激上述细胞,分别收集刺激前、刺激后1h、3h、6h、12h、24h、36h和48h的细胞,并同时收集未表达bpi或bpi714的mhek293细胞在各时间点的样品作为对照;采用定量rt-pcr检测上述细胞中炎性细胞因子il-8、il-1β、tnf-α、nf-κb-1、nf-κb-2的相对表达水平,比较lps刺激前后表达bpi/bpi714和对照细胞中上述基因转录水平的变化规律。研究表明,lps刺激后,对照细胞中il-8、il-1β、tnf-α、nf-κb-2表达水平在不同时间点均显著提高(p<0.05),并呈现规律性变化;而稳定表达bpi/bpi714的细胞在同样刺激条件下,il-8、il-1β、tnf-α、nf-κb-2基因的转录水平均未发生显著变化(p>0.05)。根据我们的实验结果,在mhke293细胞模型中bpi或bpi714均能显著降低lps介导的炎性细胞因子表达,抑制lps介导的免疫应答。这不仅为进一步研究bpi抑菌机制和利用其抑菌功能提供了可靠的实验依据,也为分析抗菌蛋白的抗菌效果提供了一种可靠的实验方法。

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